检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第4期46卷 542-546页

作者：王曲直龙进学胡顺林吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009

近年来H5N1亚型禽流感病毒（AIV）神经氨酸酶（NA）茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道，突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术，拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1／PR8重组AIV。重组病毒的内... 详细信息

近年来H5N1亚型禽流感病毒（AIV）神经氨酸酶（NA）茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道，突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术，拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1／PR8重组AIV。重组病毒的内部基因和血凝素（HA）基因来源相同，NA基因来源不同，并在NA茎部进行20个氨基酸的删除或添加突变。通过研究其生物学特性发现，5株重组病毒在SPF鸡胚中繁殖良好，其EID50、MDT和平均病毒滴度相似；NA茎部长短影响病毒的解凝能力，长茎病毒红细胞解脱能力比短茎病毒强；NA茎部15或20个氨基酸删除突变提高了重组病毒在MDCK细胞上的繁殖能力，短茎病毒释放出的病毒粒子数量是长茎病毒的10。100倍，释放时间提前6．10h，短茎病毒在MDCK细胞上形成的空斑也明显比长茎病毒的空斑大。实验结果揭示了AIVNA茎部氨基酸缺失突变的生物学意义，NA茎部15或20个氨基酸删除突变增强了AIV的细胞适应性，可能与现阶段H5N1亚型AIV宿主范围进一步扩大有关。利用反向遗传技术成功拯救了5株H5N1／PR8重组流感病毒，为流感病毒基因功能研究和重组疫苗研究建立了技术平台。通过对AIVNA茎部氨基酸的删除突变提高了病毒在MDCK细胞上的繁殖产量，为流感病毒细胞苗的生产提供了新的思路。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶茎部氨基酸删除突变反向遗传操作技术

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鸡痘病毒复制非必需区的选择对重组鸡痘病毒免疫效力的影响

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微生物学报 2005年第3期45卷 359-362页

作者：孙蕾刘武杰陈素娟石火英刘秀梵吴艳涛张体银扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区... 详细信息

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区的两个侧翼区FPV1和FPV2 ,利用此假定复制非必需区构建FPV表达载体pP12LS及表达ZJ1株新城疫病毒(NDV)F基因的转移载体pP12LSF。pP12LSF与2 82E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) ,经数轮蓝斑筛选得到纯化的重组病毒rFPV_FSC。重组FPV在CEF上连续传2 0代仍具有良好的遗传稳定性。对重组FPV进行免疫效力试验,在SPF鸡上,重组病毒rFPV_FSC和与之仅有复制非必需区差异的rFPV_FSB均能抵抗NDV强毒的攻击,提供10 0 %的保护。但在有母源抗体的商品鸡上,rFPV_FSC与rFPV_FSB的免疫效力却有显著差异,保护率分别为10 0 %和6 1 5 4 % ,rFPV_FSC的免疫效力与NDV常规油苗相当。试验结果表明,母源抗体对重组FPV的免疫效力有一定的影响。

关键词：鸡痘病毒复制非必需区免疫效力

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应用DNA芯片技术研究体外表达禽致病性大肠杆菌可能致病基因

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微生物学报 2008年第1期48卷 103-111页

作者：宦海霞周琼赵李祥高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

应用DNA芯片研究禽致病性大肠杆菌可能致病基因的表达。构建禽致病性大肠杆菌毒力基因、潜在毒力基因的DNA芯片,应用基因芯片技术对同属O2血清型的禽高致病性大肠杆菌E058株和低致病性大肠杆菌E526株在体外LB培养基和鸡血清培养状态下... 详细信息

应用DNA芯片研究禽致病性大肠杆菌可能致病基因的表达。构建禽致病性大肠杆菌毒力基因、潜在毒力基因的DNA芯片,应用基因芯片技术对同属O2血清型的禽高致病性大肠杆菌E058株和低致病性大肠杆菌E526株在体外LB培养基和鸡血清培养状态下进行差异表达分析。结果:在体外LB静置培养状态下,低致病株E526与高致病株E058相比共有16个差异基因,均为下调基因。在鸡血清静置培养中,E526与E058相比共有15个差异基因,均为下调基因。应用基因芯片成功筛选了禽致病性大肠杆菌在体外不同条件下的毒力基因及可能毒力基因中差异表达基因,表明一些铁摄取系统相关基因对APEC的毒力较重要,同时也筛选出了一些新的可能致病基因aes-1,aes-2,aes-3,aes-4,aes-6,aes-8,aes-10,aes-13,aes-15,aes-31等。

关键词：禽致病性大肠杆菌毒力基因体外培养基因表达 DNA芯片

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载体表达的siRNA分子对猪圆环病毒2型复制的抑制作用

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微生物学报 2008年第11期48卷 1507-1513页

作者：王海燕刘文博高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针... 详细信息

【目的】寻找一种基于RNA干扰技术的猪圆环病毒2型感染的防控方法。【方法】根据猪圆环病毒2型毒株基因组核苷酸序列,设计了3条特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)分子,其中2条针对猪圆环病毒1型和2型复制酶基因(rep),1条针对猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因(cap),将合成的DNA片段退火形成双链,分别连接到RNAi-Ready pSIREN-RetroQ ZsGreen载体鼠源U6启动子下游,转化大肠杆菌得到阳性克隆,测序鉴定后分别命名为Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6。用上述质粒转染PCV2感染前、后的Dulac细胞及肌肉注射PCV2感染前、后的BALB/c小鼠,应用实时定量PCR试验评价其对病毒在细胞及小鼠体内复制的抑制作用,免疫组化法检测脾脏中病毒的存在。【结果】感染PCV2前或后转染500ng Retro-SH1,Retro-SH4,Retro-SH6质粒能有效抑制PCV2在Dulac细胞上的复制,抑制率最高可达99%以上,对10株不同来源的临床分离株在细胞中复制的抑制作用同样明显,且不同毒株间差异不大。动物试验中,肌肉注射10μg上述不同siRNA分子对小鼠体内PCV2的复制有一定的抑制作用,其抑制率在26%至99%之间。【结论】载体表达的siRNA分子可能成为防控猪圆环病毒2型感染的一种新工具。

关键词： RNA干扰猪圆环病毒2型复制抑制

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嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1234-1240页

作者：宋益朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-... 详细信息

【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-2全基因组串联入pSK载体中,得到含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。【结果】经序列测定,获得含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。PCV1-2嵌合病毒接种BALB/c小鼠,用间接ELISA方法对接种后7、14、21、28、35、42d的小鼠进行血清抗体检测。结果显示从接种后14d开始,即有部分小鼠产生了针对PCV2Cap蛋白的特异性抗体;至接种后42d,几乎全部接种小鼠的血清均呈阳性。【结论】构建了PCV1-2型感染性DNA克隆,该嵌合病毒能够激发机体产生体液免疫应答。

关键词： PCV1 PCV2 ORF2基因嵌合型DNA克隆

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利用反向遗传技术研究H9N2亚型AIV传播途径的分子机制

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微生物学报 2006年第1期46卷 48-54页

作者：石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传技术,通过基因重排方法,产生两个表面基因来自A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)株和其余基因来自A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)AIV株的3株H9N2亚型重排AIV,动物传播性试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株、A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV株和3株H9N2亚型重排AIV都可以经直接接触途径传播;在粪便接触途径下,3株重排AIV都不经粪便接触传播;只有A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株和重排AIV RF7/SSHA能经过气溶胶途径传播。HI试验结果进一步证明了以上的结果。实验结果表明H9N2亚型AIV的NA基因与H9N2亚型AIV气溶胶传播途径有重要的关系,即1998年中国大陆H9N2亚型AIV大流行可能是因为病毒获得气溶胶传播途径的特性,推测病毒的NA基因发挥了重要作用。

关键词： AIV H9N2亚型传播途径反向遗传技术 HA和NA基因

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表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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微生物学报 2002年第4期42卷 442-447页

作者：程坚刘秀梵彭大新刘红旗扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

以RT PCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒 (AIV)分离株 (A Chicken China F 1 998)的血凝素 (HA)基因 ,将其定向插入鸡痘病毒转移载体 1 1 75的痘苗病毒启动子P7 5的下游 ,得到重组转移载体 1 1 75HA。以脂质体转染法将 1 1 75HA转染至已感... 详细信息

以RT PCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒 (AIV)分离株 (A Chicken China F 1 998)的血凝素 (HA)基因 ,将其定向插入鸡痘病毒转移载体 1 1 75的痘苗病毒启动子P7 5的下游 ,得到重组转移载体 1 1 75HA。以脂质体转染法将 1 1 75HA转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株(wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV HA。以间接免疫荧光法证实感染rFPV HA的CEF表达了HA。rFPV HA在免疫 7日龄SPF鸡 7天后即能诱生可检出的血凝抑制 (HI)抗体 ,1 4天后诱生的HI抗体到达高峰 ,且诱生的HI抗体保持较高水平达 5 5天。在 7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验表明 ,rFPV HV能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒 ,效果与AIV全病毒灭活苗相当。

关键词：表达 H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒免疫效力

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H9N2亚型禽流感病毒基因组全长序列测定和各基因的遗传分析

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微生物学报 2003年第4期43卷 434-441页

作者：卢建红刘秀梵邵卫星张评浒韦栋平扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

用RT PCR技术及cDNA末端快速扩增法获得禽流感病毒分离株A Chicken Shanghai F 98(H9N2 )代表基因组全长的 8个基因片段。基因组序列比较及遗传进化分析结果表明 ,Chicken Shanghai F 98的 8个基因均不属于Quail HongKong G1 97亚系 ,... 详细信息

用RT PCR技术及cDNA末端快速扩增法获得禽流感病毒分离株A Chicken Shanghai F 98(H9N2 )代表基因组全长的 8个基因片段。基因组序列比较及遗传进化分析结果表明 ,Chicken Shanghai F 98的 8个基因均不属于Quail HongKong G1 97亚系 ,与香港禽流感事件没有直接关系。它与Chicken Beijing 1 94的HA、NA、M、NS基因同源率分别为 96 7%、96 4%、97 5 %和 98 0 % ,这 4个基因属于Chicken Beijing 1 94亚系 ,其中 ,NA基因与Duck HongKong Y2 80 97的同源率为 97 4% ,而且它们均在 2 0 5位后缺失 9个核苷酸。而PB2、PB1、PA和NP基因与已知的 3个亚系关系较远 ,分别在相应的进化树上另成分支。因此 ,Chicken Shanghai F 98是两个以上不同基因亚系间发生自然重排的产物。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒基因组序列测定遗传分析

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封闭式饲养鸡场H9N2亚型禽流感病毒HA基因在5年内的遗传变异

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微生物学报 2003年第6期43卷 706-711页

作者：刘红旗张评浒刘秀梵刘文博贾立军彭大新程坚扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择一个于 1 998年开始发生H9亚型禽流感的封闭式大型养鸡场 ,连续 5年内分离到 2 2株H9N2亚型病毒 ,对其中 9株与 1 998年分离株进行HA基因序列和病毒抗原性的比较结果表明 ,这些分离株均与 1 998年的具有较高的序列同源性 ,且在本研... 详细信息

选择一个于 1 998年开始发生H9亚型禽流感的封闭式大型养鸡场 ,连续 5年内分离到 2 2株H9N2亚型病毒 ,对其中 9株与 1 998年分离株进行HA基因序列和病毒抗原性的比较结果表明 ,这些分离株均与 1 998年的具有较高的序列同源性 ,且在本研究期内HA基因的这些变化尚未产生引起交叉保护性改变。初步推断这些分离株均系 1 998年分离株在场内循环传播变化得来 ,其HA基因的变异可能与频繁的疫苗免疫选择压力有关。这为进一步研究禽流感病毒变异的规律和制定正确的禽流感防治对策具有重要意义。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因遗传变异 HA基因

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4株鹅源新城疫病毒融合蛋白基因的克隆及序列分析

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微生物学报 2002年第2期42卷 208-213页

作者：万洪全吴艳涛刘秀梵张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

测定了 4株鹅源新城疫病毒 (NDV)融合蛋白 (F)基因 5’端 1 70 0核苷酸片段的序列 ,并由此推导了F蛋白氨基酸序列 ,并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明 ,4株病毒F基因的同源性大于 97% ,与DNV标准强毒株F48E8F基因的同源性... 详细信息

测定了 4株鹅源新城疫病毒 (NDV)融合蛋白 (F)基因 5’端 1 70 0核苷酸片段的序列 ,并由此推导了F蛋白氨基酸序列 ,并对鹅源NDV的基因型分类地位进行探讨。结果表明 ,4株病毒F基因的同源性大于 97% ,与DNV标准强毒株F48E8F基因的同源性为 86 0 %～86 8% ,F基因转录起始序列及起始密码子位置与已知NDV完全相同 ;F蛋白具有和已知NDV相似的各种功能区 ,F蛋白前体F0裂解位点附近的氨基酸序列为112 RRQKRF117,符合NDV强毒株的特征。对F基因第 3 3 4～ 1 6 82位核苷酸之间 3种限制性内切酶HinfⅠ、BstoⅠ、RsaⅠ酶切图谱的分析表明。

关键词：鹅新城疫病毒融合蛋白基因序列分析基因型基因克隆

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