检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2007年第6期27卷 785-789,794页

作者：薛峰刘慧谋彭宜张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收... 详细信息

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果发现,Dk/YZ/163/03的血凝素基因(HA)与禽流感日本分离株A/Japan/91(H1)的同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)与Mallard dk/A1b/35/1976(H1N1)同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-S-I-Q-S-R,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

关键词：禽流感病毒 H1亚型 HA NA 致病性剪切位点

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猪圆环病毒2型江苏分离株的遗传进化分析

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中国兽医学报 2014年第7期34卷 1047-1052页

作者：束陈宇许秋阳段世鹏李晨曦张小荣焦库华吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用PCR方法扩增了15个猪圆环病毒2型（PCV 2）江苏分离株的基因组DNA,以这些毒株的ORF2核苷酸序列进行遗传进化分析。经序列比较发现,所有分离株均属于2b基因群,其中7株为1A/1B亚群、8株为1C亚群;毒株间核苷酸同源性为93.6%~100%,所编... 详细信息

采用PCR方法扩增了15个猪圆环病毒2型（PCV 2）江苏分离株的基因组DNA,以这些毒株的ORF2核苷酸序列进行遗传进化分析。经序列比较发现,所有分离株均属于2b基因群,其中7株为1A/1B亚群、8株为1C亚群;毒株间核苷酸同源性为93.6%~100%,所编码的Cap蛋白氨基酸同源性为92.3%~100%。PCV 2江苏分离株Cap蛋白的主要变异区域为53~90、121~151和190~210位氨基酸;R59、R89、S90、S121、T134、S169、A190、E210为1A/1B亚群分离株的特征氨基酸,而F8、I53、N68、L89、T90、T121、N134、R169、D210、I215、K234则是1C亚群分离株的特征氨基酸。

关键词：猪圆环病毒2型序列分析 ORF2基因 Cap蛋白

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共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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病毒学报 2003年第1期19卷 52-58页

作者：程坚刘秀梵彭大新刘红旗吴艳涛张如宽扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的基因工程疫苗 ,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素 (HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素 (IFN Ⅱ )全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE/L)的基因片段 ,定向插... 详细信息

为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的基因工程疫苗 ,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素 (HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素 (IFN Ⅱ )全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE/L)的基因片段 ,定向插入鸡痘病毒转移载体 1175的痘苗病毒启动子P7.5的下游 ,得到HA和IFN Ⅱ基因分别处于P7.5及PE/L转录调控下的重组转移载体 1175HAIFN。以脂质体转染法将 1175HAIFN转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。 1175HAIFN与wt FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV HA IFN Ⅱ。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rF PV HA IFN Ⅱ。以间接免疫荧光法和细胞病变抑制试验证实 ,纯化的rFPV HA IFN Ⅱ感染的CEF能以非融合的方式同时表达HA和具有抗VSV活性的鸡IFN Ⅱ。动物试验表明 ,rFPV HA IFN Ⅱ能显著抑制静脉攻毒后 1日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡从泄殖腔排毒 ,且能减轻单表达HA的重组鸡痘病毒 (rFPV HA)抑制 1日龄SPF雏鸡增重的副作用。

关键词： H9亚型禽流行性感冒病毒重组鸡痘病毒鸡Ⅱ型干扰素血凝素

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两株基因Ⅲ型强毒新城疫的全基因组测序及其与Ⅰ系苗的亲缘性分析

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微生物学报 2009年第3期49卷 302-308页

作者：仇旭升孙庆姚春峰董丽吴艳涛胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

【目的】研究基因III型新城疫(Newcastle disease,ND)强毒分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go与中等毒力疫苗株Mukteswar的亲缘性关系,分析三株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的全基因差异。【方法】采用RT-PCR方法获得两株NDV分离株的全基因组核苷酸序列,与GenBank中公布的Mukteswar序列比对分析。【结果】强毒分离株与中等毒力疫苗株Mukteswar全基因组核苷酸同源性均为99.7%;病毒6个阅读框核苷酸序列与Mukteswar同源性为99.6%～99.9%;预测的8种病毒编码蛋白同源性在98.8%～99.8%。然而,测定MDT,ICPI和IVPI发现JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go毒力明显强于Mukteswar,其中JS/7/05/Ch株的IVPI达到了2.18。【结论】综合3株NDV的遗传分析结果和已有的流行病学资料可以推断分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go是由疫苗株Mukteswar自然进化而来的返强毒株。因此,必须停止使用中等毒力疫苗以免造成更大的危害。

关键词：基因Ⅲ型新城疫病毒 Mukteswar 全基因组毒力返强

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用8质粒病毒拯救系统产生H9N2/WSN重组A型流行性感冒病毒

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病毒学报 2005年第1期21卷 48-53页

作者：卢建红邵卫星刘玉良贾立军韦栋平石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重... 详细信息

把禽流行性感冒(流感)病毒A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因cDNA克隆至polⅠpolⅡ双向转录和表达载体pHW2000,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中流感病毒A/WSN/33(H1N1)6个内部基因cDNA的质粒组合(6+2重排),共转染COS 1细胞,产生了能在鸡胚中高滴度增殖的H9N2/WSN重组病毒。用A/WSN/33的8个基因cDNA质粒作对照,也产生了转染子病毒。经过EID50测定和MDCK感染实验,新基因型H9N2/WSN病毒感染鸡胚的能力强(EID50为10-11/0.2ml),而且对鸡胚的毒力弱,在不加胰酶的情况下不使MDCK细胞产生病变。经电镜观察,两个转染子病毒的形态与野生型流感病毒相似。反向遗传操作技术的建立,为对禽流感病毒基因功能和疫苗构建等方面的研究提供了新的手段。

关键词： A型流行性感冒病毒 H9N2亚型禽流感病毒共转染 8质粒系统反向遗传操作技术血凝素神经氨酸酶

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家鸭中H8N4亚型流感病毒株A/duck/Yangzhou/02/2005的全基因克隆和序列分析

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病毒学报 2006年第6期22卷 450-455页

作者：薛峰彭宜张小荣姚春峰龙进学刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规的血清学试验和特异性RT—PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测，分离鉴定出国内报道的第一株H8亚型禽流感病毒。应用流感病毒通用引物成功地扩增出H8N4亚型禽流感病毒A／duck／Yangzhou／02／2005... 详细信息

采用常规的血清学试验和特异性RT—PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测，分离鉴定出国内报道的第一株H8亚型禽流感病毒。应用流感病毒通用引物成功地扩增出H8N4亚型禽流感病毒A／duck／Yangzhou／02／2005株（简称Dk／YZ／02／05）的全基因序列。将Dk／YZ／02／05的基因组核苷酸全序列与网上公布的基因序列进行比较分析，结果表明：Dk／YZ／02／05（H8N4）的8个基因片段均含有相应病毒基因的完整开放阅读框；其推导的血凝素（Heamgglutinin，HA）氨基酸剪切位点序列为P-SV-E-P-R，为典型低致病性禽流感病毒的特征序列；神经氨酸酶（NA）在第48位氨基酸后无20个氨基酸的缺失；非结构蛋白（NS）79～84位也没有氨基酸的缺失。

关键词： H8N4亚型禽流感病毒全基因组序列测定分析

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H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株的全基因克隆及序列分析

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微生物学报 2005年第5期45卷 690-696页

作者：龙进学王曲直卢建红刘玉良刘秀梵扬州大学畜牧兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷酸全序列与18株网上公布的禽流感基因序列进行比较和分析,结果与4株鸭源H5N1的5～7个基因具99%以上的同源性;与14株H5N1有至少一个以上内部基因同源性在95%以上.与H9亚型AIV代表株A/Quail/Hongkong/G1/97(简称G1株)和A/Chicken/Beijing/1/94(简称BJ94)比较,除了非结构基因(Nonstructural gene,NS)与G1株的同源性为95.3%外,其余基因均在36.6%～92.1%之间.说明A/D/SD/04没有H9N2基因的直接整合,是H5N1毒株在自然界的重组株.推导的HA氨基酸序列分析,A/D/SD/04 的血凝素(Heamgglutinin,HA)裂解位点与比较的16株AIV的序列一致,是高致病性禽流感的分子特征(PQRERRRKKR/G),第226位氨基酸是对禽类和哺乳细胞均具有亲嗜性的蛋氨酸(Met).神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)在第48位氨基酸(颈部)后有20个氨基酸的缺失,但非结构蛋白(NS)没有在79～84氨基酸发生缺失.碱性聚合酶2(PB2)的627位氨基酸是亲禽类细胞的谷氨酸(Glu,E).结合生物学特性和分子特征,A/D/SD/04对小鼠的致病力是由多种因素决定,其可能是一株对鸡高度致病,并逐渐获得对哺乳动物致病能力的中间重组病毒.

关键词： H5N1亚型禽流感病毒通用引物全基因组序列序列分析

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新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国兽医科技 2004年第4期34卷 3-8页

作者：韦栋平徐忠林张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+... 详细信息

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+4.632。应用该ELISA方法对表达NDVF基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关。攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性。

关键词：新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA 抗体效价鸡痘病毒栽体基因工程疫苗

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嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

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中国兽医学报 2009年第9期29卷 1097-1102页

作者：程旭宋益盛瑜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头... 详细信息

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪，9头猪随机分为4组，1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头，2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头，3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头，4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d，PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV，剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d，攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大，免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组，攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明，嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后，对PCV2感染能产生保护性免疫应答，有可能成为候选疫苗。

关键词：嵌合型猪圆环病毒(PCV1—2) 真核表达质粒免疫保护

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禽流感-新城疫重组活载体疫苗研究进展

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中国家禽 2013年第4期35卷 38-40,44页

作者：丁平云刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感和新城疫是严重危害养禽业发展的两种主要病毒性传染病。由于禽流感病毒和新城疫病毒(NDV)流行毒株复杂、感染宿主范围广及传播途径多样,给防制带来很大困难。目前,对这两种疾病的防制主要依赖疫苗。近年来,随着反向遗传技术的发... 详细信息

禽流感和新城疫是严重危害养禽业发展的两种主要病毒性传染病。由于禽流感病毒和新城疫病毒(NDV)流行毒株复杂、感染宿主范围广及传播途径多样,给防制带来很大困难。目前,对这两种疾病的防制主要依赖疫苗。近年来,随着反向遗传技术的发展成熟,NDV常被作为病毒载体,用以携带外源基因,研制重组活载体疫苗,其中,用以表达禽流感病毒保护性抗原的研究成为热点之一。本文从多方面分析了NDV作为疫苗载体的优点,并就禽流感和新城疫重组活载体疫苗的研究进展作一综述。

关键词：新城疫病毒载体禽流感重组疫苗

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