检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2004年第5期24卷 429-432页

作者：孙蕾吴艳涛张体银陈素娟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后... 详细信息

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制。

关键词：鸡痘病毒表达载体新城疫病毒 F基因 HN基因疫苗

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抗禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的抗原结合特性分析

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中国兽医科学 2006年第5期36卷 348-351页

作者：唐应华张评浒刘金彪王海燕李玉君刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了解和确定抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体所针对的抗原表位及今后的确切用途,用竞争性结合ELISA试验结合Western-blotting分析,对10株单克隆抗体的抗原结合特性进行了分析。抗体反应增值结果表明,10株单抗针对的是同一大的抗原... 详细信息

为了解和确定抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体所针对的抗原表位及今后的确切用途,用竞争性结合ELISA试验结合Western-blotting分析,对10株单克隆抗体的抗原结合特性进行了分析。抗体反应增值结果表明,10株单抗针对的是同一大的抗原决定簇,根据增值结果可将10株单抗分成4个亚群。除2A1外,其他9株单抗的ELISA反应增值结果与Western-blot- ting分析结果一致,认为可能是由于2A1与其他9株单抗的免疫原不同所致。

关键词：单克隆抗体竞争性结合ELISA 抗原结合特性蛋白质印迹法

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两株家鸭禽流感病毒H3N1亚型分离株的致病性及其表面糖蛋白基因序列分析

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中国兽医科学 2006年第8期36卷 621-624页

作者：薛峰彭宜顾敏徐利军张评浒刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

测定了2株禽流感病毒(AIV)Dk/YZ/231/02和Dk/YZ/3/04对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性；对其血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的序列进行了测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果,此2株AIV对SPF鸡具有较低的致病性,而对BALB/... 详细信息

测定了2株禽流感病毒(AIV)Dk/YZ/231/02和Dk/YZ/3/04对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性；对其血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因的序列进行了测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果,此2株AIV对SPF鸡具有较低的致病性,而对BALB/c小鼠无致病性；Dk/YZ/231/02株的HA基因与Dk/Ukraine/1/63(H3N8)株的同源率最高,Dk/YZ/3/ 04株的HA基因与Petbird/HK/1559/99(H3N8)株的同源率最高；而Dk/YZ/231/02株的NA基因与Dk/Fujian/17/2001(H5N1)株的同源率最高,Dk/YZ/3/04株的NA基因与Gs/Guangdong/ 1/96(H5N1)株的同源率最高。进化分析结果表明,Dk/YZ/231/02和Dk/YZ/3/04株的NA基因均可能起源于水禽源H5N1亚型AIV,这可能是不同亚型AIV在水禽体内基因重组的结果。推导的氨基酸剪切位点序列均为PEKQTR,属于非高致病性AIV的特征序列。

关键词：禽流感病毒 HA基因 NA基因

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H9N2亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及其序列特征

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中国兽医科技 2003年第4期33卷 46-49页

作者：卢建红韦栋平刘玉良徐耀辉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用RT PCR技术扩增到H9N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Shanghai/F/ 98(简称F株 )的核蛋白 (NP)全基因。 18个毒株NP基因核苷酸序列比较结果显示 ,以Q/HK/G1/ 97为代表的、并和同期香港发生的人流感事件有直接联系的毒株相互间同源率达... 详细信息

用RT PCR技术扩增到H9N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Shanghai/F/ 98(简称F株 )的核蛋白 (NP)全基因。 18个毒株NP基因核苷酸序列比较结果显示 ,以Q/HK/G1/ 97为代表的、并和同期香港发生的人流感事件有直接联系的毒株相互间同源率达 98.3%～ 99.3% ,而F株与它们的同源率为 92 .2 %～ 92 .8%。遗传进化分析结果表明 ,F株独成一组 ,可暂时划分到类C/Ko/ 32 3/ 96亚系。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒核蛋白基因基因克隆序列分析禽流感

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鸡痘病毒载体启动子的优化

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病毒学报 2000年第4期16卷 347-351页

作者：朱爱华彭大新刘秀梵张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

要提高外源基因在鸡痘病毒 (FPV)载体的表达量 ,必须使用强启动子来控制表达。为构建较强的启动子组合 ,根据痘苗病毒天然启动子P7 5的结构 ,人工合成 4条寡核苷酸 ,形成一个早期启动子和一个晚期启动子 ,其首尾可相互连接。利用分子生... 详细信息

要提高外源基因在鸡痘病毒 (FPV)载体的表达量 ,必须使用强启动子来控制表达。为构建较强的启动子组合 ,根据痘苗病毒天然启动子P7 5的结构 ,人工合成 4条寡核苷酸 ,形成一个早期启动子和一个晚期启动子 ,其首尾可相互连接。利用分子生物学常用实验方法把合成的启动子进行不同组合 ,最终形成 10个较有代表性的启动子组合PS1～ 10。在其下游插入大肠杆菌 β 半乳糖苷酶基因LacZ ,并进一步构建成鸡痘病毒转移载体 pFBS1～10 ,同时以P7 5作对照构建成 pFB7 5。以脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株 2 82E4感染 3h～ 4h后的原代鸡胚成纤维细胞 (CEF)单层。用蓝斑筛选法纯化病毒 4次 ,最终得到稳定的重组病毒。将纯化的重组病毒感染次代CEF ,分别于感染后 10h、2 4h、36h、48h、72h收获细胞 ,制备提取物 ,检测提取物中 β 半乳糖苷酶的活性。通过计算比较 ,筛选出其中较强的启动子组合LLEE ,其表达活性约为P7 5的 3 5倍 ,为进一步构建高效表达的鸡痘病毒通用载体打下了良好的基础。

关键词：人工合成强启动子鸡痘病毒重组病毒载体

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RNA病毒反向遗传操作技术研究进展

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病毒学报 2004年第1期20卷 90-94页

作者：刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多... 详细信息

近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多年的难题.从cDNA克隆拯救出负链RNA全病毒是20世纪90年代分子病毒学研究领域最振奋人心的突破之一,它开启了人们对病毒基因组进行人工操作和详细了解病毒基因及其产物功能的大门.该技术发展迅速,倍受国内外研究者关注.

关键词：分子病毒学 RNA病毒反向遗传 cDNA 克隆

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江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

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中国兽医学报 2008年第12期28卷 1379-1382页

作者：李文杰刘金彪高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用复合PCR方法，对江苏地区的162份可疑病料进行了检测，结果72份病料为PCV2阳性，17份为PCV1阳性，其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看，以9～11月发病最多，阳性率高达54．67％。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26．0... 详细信息

应用复合PCR方法，对江苏地区的162份可疑病料进行了检测，结果72份病料为PCV2阳性，17份为PCV1阳性，其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看，以9～11月发病最多，阳性率高达54．67％。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26．03％和68．12％。通过流行病学调查，表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测，结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2；在这些脏器中，肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100％，较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。

关键词：猪圆环病毒2型流行病学复合PCR 脏器检测

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应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

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中国兽医学报 2005年第2期25卷 128-130页

作者：张体银李军伟孙蕾孙学辉张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接 EL ISA方法。应用该方法检测鸡痘阳性血清 ,其灵敏度为琼脂扩散试验的 4 0 0~ 80 0倍 ,而且还具有特异性强、操作简便。

关键词：间接ELISA 鸡痘病毒抗体检测鸡痘

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PRRSV间接免疫荧光检测法的建立和应用

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中国兽医科技 2005年第4期35卷 256-260页

作者：彭长凌高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ATCC VR 2332 株人工单独感染3 头3 周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR 2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2 头3 周龄仔猪,每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现,并用HerdChek IDEXX 试剂盒测其血清抗... 详细信息

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ATCC VR 2332 株人工单独感染3 头3 周龄仔猪,并用PRRSV ATCC VR 2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2 头3 周龄仔猪,每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现,并用HerdChek IDEXX 试剂盒测其血清抗体。PRRSV+PCV2联合感染猪分别在感染后1、3周剖杀,PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1、2和3周剖杀,对全部试验猪的肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM进行抹片,同时用肺组织直接进行触片做间接免疫荧光(IIF)检测。结果表明,用所获得的3 株单克隆抗体均检测到人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外,用IIF检测7 头临床疑似PRRS病猪的PAM抹片,其中沭阳县的2头猪呈现阳性反应;对这2头猪的肺组织进行病毒分离,在盲传到第4代时Marc 145细胞上产生明显的细胞病变,进一步证实用所获得的3株单克隆抗体检测临床样品的结果准确而可靠,且获得的3株单克隆抗体均可通过IIF用于检测猪肺组织中的PRRSV抗原。

关键词： PRRSV 荧光检测法猪生殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型单克隆抗体应用肺泡巨噬细胞间接免疫荧光联合感染肺组织 ATCC 检查试验临床表现采食情况血清抗体人工感染阳性反应病毒分离细胞病变临床样品抗体检测

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鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2006年第4期27卷 5-7,11页

作者：王彦红马怀良胡顺林仇旭升刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因... 详细信息

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致。克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白。

关键词：鸡痘病毒 ORF073基因克隆原核表达

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