检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2005年第3期45卷 349-354页

作者：张晓明焦新安唐丽华潘志明殷月兰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

鼠伤寒沙门氏菌SifA- 基因突变株的特点是能进入真核细胞的胞液。利用P2 2噬菌体转导技术构建了鼠伤寒沙门氏菌疫苗株SL72 0 7的SifA- 突变株SL72 0 7 ,该突变株与SL72 0 7有着相似的体外生长曲线和细胞侵袭力,SL72 0 7 在MDCK上皮细胞... 详细信息

鼠伤寒沙门氏菌SifA- 基因突变株的特点是能进入真核细胞的胞液。利用P2 2噬菌体转导技术构建了鼠伤寒沙门氏菌疫苗株SL72 0 7的SifA- 突变株SL72 0 7 ,该突变株与SL72 0 7有着相似的体外生长曲线和细胞侵袭力,SL72 0 7 在MDCK上皮细胞中的增殖能力增强,但在RAW2 6 4 7巨噬细胞中的生存能力减弱。小鼠毒力试验显示SL72 0 7 在BALB c小鼠体内毒力下降。仅SL72 0 7 在体外可向RAW2 6 4 7巨噬细胞递送真核表达质粒。SL72 0 7

关键词：鼠伤寒沙门氏菌,P22噬菌体 SifA基因疫苗载体

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华东地区家鸭中N1亚型禽流感病毒NA基因的遗传进化分析

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病毒学报 2009年第2期25卷 131-136页

作者：仇保丰刘武杰唐应华彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002-2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒：2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析。结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正... 详细信息

为了解华东地区家鸭内禽流感病毒的遗传进化情况,对2002-2006年分离自华东地区家鸭的3种主要N1亚型的禽流感病毒：2株H1N1、10株H3N1和14株H5N1,共26株病毒的NA基因进行了遗传进化分析。结果表明,华东地区家鸭中的N1亚型的禽流感病毒正处于不断进化状态中。14株H5N1禽流感病毒均在NA的茎部缺失20个氨基酸（49-68位）,而其他N1亚型的禽流感病毒的NA都未见发生此缺失。H3N1病毒可能与H1N1病毒发生了NA基因的重排,但是目前还没有直接证据表明华东地区家鸭中H5N1禽流感参与了基因重排。

关键词：家鸭禽流感病毒 NA基因遗传进化分析

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尿道致病性大肠杆菌HEC4株和禽源致病性大肠杆菌E058株毒力相关特性的比较(英文)

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微生物学报 2007年第5期47卷 918-922页

作者：宦海霞周琼赵李祥高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

对人尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)HEC4株和禽致病性大肠杆菌(avian pathogen-ic Escherichia coli,APEC)E058株进行毒力基因和其他相关特性的比较,结果显示,它们具有一些共同的毒力基因,包括一些存在于APE... 详细信息

对人尿道致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)HEC4株和禽致病性大肠杆菌(avian pathogen-ic Escherichia coli,APEC)E058株进行毒力基因和其他相关特性的比较,结果显示,它们具有一些共同的毒力基因,包括一些存在于APEC中一个大的可传递质粒上的基因;同时,它们也具有一些相似的生化特性。对SPF鸡的致病性试验显示,这两株分离株具有相似的致病力。因此,对于APEC和UPEC的相关性,以及APEC是否有可能导致人尿道感染或者成为UPEC的毒力基因贮主,有待进一步研究。

关键词：尿道致病性大肠杆菌禽源致病性大肠杆菌毒力基因致病性

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选择性捕获禽病原性大肠杆菌体内转录序列

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微生物学报 2007年第3期47卷 407-412页

作者：陈祥高崧王晓泉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因.通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31... 详细信息

采用选择性捕获转录序列(SCOTS)方法鉴定禽病原性大肠杆菌E037株(血清型O78)在感染SPF鸡过程中的转录表达基因.通过总RNA分离、cDNAs合成、PCR扩增和SCOTS对cDNAs选择和致病性特异转录序列的富集,致病性特异的cDNAs被分离鉴定,共获得31个转录序列(命名为aec),其中分别有2、1、4、14、2和8个aec序列与黏附素、LPS的合成、铁的摄取系统、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因相关;从气囊中分离到16个aec序列,心包膜中分离到15个aec序列;有3种与质粒编码基因相关序列在气囊和心包膜中都被分离到.结果显示APEC致病性特异序列包括黏附素、LPS的合成、铁的转运、质粒编码基因、噬菌体编码基因和一些其它功能基因等.通过SCOTS方法建立了一种体内表达致病性特异基因的方法和APEC在自然宿主感染模型中致病性相关基因的表达谱的筛选方法.

关键词：禽病原性大肠杆菌选择性捕获转录序列 O78血清型体内

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H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力

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微生物学报 2006年第2期46卷 301-305页

作者：龙进学薛峰彭宜顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表... 详细信息

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表达／转录载体（848）和其补加15个核苷酸的NS突变载体（m848）。构建的载体分别与编码WSN（H1N1）内部基因载体进行组合转染，拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒：RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价（HA）、鸡胚的平均死亡时间（MDT）和鸡胚半数感染量（EID50）均无显著差异；但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263～277位核苷酸发生缺失后，不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能，但提高了病毒对鸡的致病力。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒病毒拯救突变非结构基因NS 病毒蚀斑形成单位

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用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株

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微生物学报 2007年第2期47卷 197-200页

作者：胡顺林孙庆吴艳涛张艳梅刘秀梵刘玉良王曲直扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫... 详细信息

将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子。设计两对引物,经overlapPCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与3个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,同时该病毒的脑内接种致病指数(ICPI)为0.16,上述结果表明,获救病毒的毒力已被致弱,是一个较为理想的疫苗候选株。

关键词：新城疫病毒拯救致弱基因Ⅶd型

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转座子随机插入鉴定肠炎沙门氏菌生物膜形成相关基因

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微生物学报 2008年第7期48卷 869-873页

作者：董洪燕张小荣潘志明彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较... 详细信息

【目的】生物膜在沙门氏菌的致病性和引起沙门氏菌食物中毒等方面起着重要作用,本研究为了鉴定影响沙门氏菌生物膜形成的基因。【方法】利用结晶紫染色定量法对74株鸡源的肠炎、鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌进行生物膜测定,选择生物膜生长较好的肠炎沙门氏菌C050041,采用转座子随机插入法构建突变株库。【结果】84%的鸡源沙门氏菌菌株可在塑料表面形成生物膜;通过转座子插入获得1924个突变株,筛选的生物膜降低突变株经生长曲线测定、测序和序列比对及Southern blot分析鉴定出15个插入基因,它们分别为metE、ompR、rpoS、rfaG、rfaJ、rfaK、rfaP、rfbH、rhlE、spiA、steB、tpx、ybdN和2个未知功能的基因。【结论】我们鉴定出了多个影响生物膜形成的新基因,这些基因的发现为进一步研究沙门氏菌生物膜形成的调控机制,研制减毒沙门氏菌疫苗奠定了基础。

关键词：沙门氏菌转座子生物膜突变株基因

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水禽流感病毒分离株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)膜蛋白基因遗传进化分析

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微生物学报 2005年第4期45卷 491-495页

作者：张评浒刘晓文钱忠明唐应华刘秀梵薛峰郝贵杰扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定... 详细信息

采用常规的血清学收验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行两年多的监测,分离鉴定出多株H6亚型禽流感病毒。对其中的一株A/Duck/Yangzhou/233/02(H6N2)(简称DkYZ23302)(H6N2)的表面膜蛋白基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明DkYZ23302的血凝素基因(HA)与近年香港分离的鸭源毒株DkHK346199(H6N1)、中国台湾鸡源毒株CkTaiwanna398的亲缘关系最近;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明DkYZ23302(H6N2)的NA基因起源于禽源H9N2亚型流感病毒,这可能是不同亚型禽流感病毒在水禽体内发生基因重配的结果。DkYZ23302(H6N2)的HA推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-D,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：病毒分离株进化分析基因遗传低致病性禽流感病毒 RT-PCR方法 GenBank 神经氨酸酶基因 H9N2亚型遗传进化膜蛋白基因血凝素基因致病力试验华东地区分离鉴定序列测定亲缘关系中国台湾 NA基因分析结果特征序列

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表达鸡白细胞介素2重组鸡痘病毒的构建及其体外表达产物生物活性的检测

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生物工程学报 2004年第1期20卷 136-139页

作者：邵卫星彭大新卢建红韦栋平刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因编码区。将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中 ,获得重组转移载体p1175IL2 ,然后转染已感染鸡痘病毒 ... 详细信息

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 2 (ChIL 2 )基因编码区。将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中 ,获得重组转移载体p1175IL2 ,然后转染已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,质粒p1175IL2与wt FPV基因组DNA发生同源重组 ,产生了表达ChIL 2的重组鸡痘病毒rFPV IL2。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑 ,获得并纯化重组鸡痘病毒rFPV IL2。应用XTT PMS方法检测的rFPV IL2 (M .O .I 2 0 )感染CEF 72小时后细胞上清中表达的重组ChIL 2生物活性 ,效价为 3 6× 10 5u mL ,表明rFPV IL2能有效地表达ChIL 2。下一步将利用rFPV IL2在体内表达ChIL 2 ,研究ChIL 2的免疫增强作用及其作用机理。

关键词：表达鸡白细胞介素2 重组鸡痘病毒构建体外表达产物生物活性

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用反向遗传操作技术产生致弱的H5亚型重组流感病毒

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微生物学报 2005年第1期45卷 53-57页

作者：卢建红龙进学邵卫星韦栋平刘秀梵张艳梅扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株... 详细信息

选择一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒 (AIV) ,缺失其HA基因裂解序列的 4个碱性氨基酸、使HA裂解模式由高致病性的PQRERRRKKR↓GL突变为低致病性的PQRESR↓GL ,将修饰的HA基因克隆入转录表达载体pHW2 0 0 0、构建质粒pHW5 2 4_HA ,将该毒株和H9N2亚型毒株的NA全基因分别克隆入pHW2 0 0 0 ,构建质粒pHW5 0 6_NA和pHW2 0 6_NA。将pHW5 2 4_HA与pHW5 0 6_NA或pHW2 0 6_NA组合、均用A WSN 33(H1N1)提供 6个内部基因 ,两个组合的 8个质粒分别共转染COS_1细胞 ,产生了H5N1和H5N2两个亚型的基因重排病毒。通过在鸡胚中的连续传代和适应 ,2个重组病毒血凝价上升到 1∶2 9、表面基因稳定、对 6周龄SPF鸡不表现致病性 ,H5N2重组病毒对鸡胚的毒力低于H5N1病毒。

关键词：禽流感病毒 H5亚型反向遗传操作技术基因重排致弱

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