检索结果-内蒙古大学图书馆

高致病性蓝耳病的防治体会

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中国兽医杂志 2011年第3期47卷 81-82页

作者：赵国鹿欣伦潘金金刘金彪扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

从2009年10月到2010年3月我们共收治来自江苏、安徽、上海等南方地区的高致病性蓝耳病48例,经采取了有效的防治措施,疫情得到了较好控制,防治情况报告如下。

关键词：高致病性蓝耳病防治南方地区疫情

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H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性

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病毒学报 2013年第5期29卷 495-499页

作者：张晓剑李彦芳熊丽平陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因... 详细信息

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。

关键词： H5N1亚型禽流感 HA 糖基化位点突变

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2008年江苏地区基因Ⅶd亚型新城疫病毒遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2009年第12期40卷 1782-1787页

作者：吴双黄伟平王伟伟胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 铜山县禽病门诊部徐州221009

为了研究基因Ⅶd亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的分子流行病学及遗传变异规律,作者对2008年分离自江苏地区16株具有一定代表性NDV分离株的F和HN基因片段进行了扩增。根据F基因和HN基因序列绘制的2个遗传进化树基本一致,... 详细信息

为了研究基因Ⅶd亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的分子流行病学及遗传变异规律,作者对2008年分离自江苏地区16株具有一定代表性NDV分离株的F和HN基因片段进行了扩增。根据F基因和HN基因序列绘制的2个遗传进化树基本一致,表明分离株中不存在囊膜糖蛋白基因发生重组的NDV;同时,HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势。基因Ⅶd亚型变异株的出现应引起相关领域从业者们的高度重视。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶd亚型变异株

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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 702-704页

作者：曾艳兵焦新安潘志明黄金林张评汻张苏华孙泉云刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 上海畜牧兽医总站兽医诊断中心上海201103

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹... 详细信息

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8～ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断。

关键词：禽流感病毒 H9亚型血凝素单克隆抗体

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猪伪狂犬病病毒JSZ株的分离鉴定及其病毒核酸的分布规律

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 759-763页

作者：郭丽静赵瑜张伟崔盟吴艳涛高崧彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分... 详细信息

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分离株接种兔后出现奇痒症状并麻痹致死;接种仔猪后出现持续发热,肌肉震颤等症状。通过对自然感染PRV病死仔猪脏器进行PCR检测,发现PRV在仔猪体内广泛分布,其中以脾的检出率最高,可达100%;对人工感染猪的直肠和鼻腔棉拭样品进行PCR检测,发现病猪排毒最长可达13 d。证实,该分离株为猪伪狂犬病强毒株,脾为病毒检测的首选靶器官。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定排毒分布

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产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 573-576页

作者：梁光军田银芳文其乙张小荣潘志明高玉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学实验农场苏北人民医院

目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内... 详细信息

目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构建的重组质粒经内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,发现特异的目的基因条带。SDS -PAGE电泳后 ,发现重组菌株有特异的表达条带。实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性。结论　重组菌株BL2 1(pGEX6p - 1-cpα)表达了具有活性的α毒素蛋白。目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构?

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素基因克隆表达生物学活性鉴定聚合酶链式反应

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鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第2期32卷 1-5页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装... 详细信息

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。

关键词：新城疫病毒鸡胚成纤维细胞酵母双杂交 cDNA文库 SMART技术

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重组鸡痘病毒首免与灭活疫苗加强免疫对高致病性禽流感免疫效果的影响

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中国兽医科学 2008年第5期38卷 397-400页

作者：刘武杰仇保丰马怀良王彦红陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用表达H5亚型禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV)rFPV-12LSH5NA对10日龄带有H5亚型AIV母源抗体的商品鸡进行了首次免疫,17日龄时再用H5亚型AIV全病毒灭活疫苗加强免疫。免疫鸡分为2个批次,分别在24和31日龄用H5亚型AIV进行... 详细信息

用表达H5亚型禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV)rFPV-12LSH5NA对10日龄带有H5亚型AIV母源抗体的商品鸡进行了首次免疫,17日龄时再用H5亚型AIV全病毒灭活疫苗加强免疫。免疫鸡分为2个批次,分别在24和31日龄用H5亚型AIV进行致死性攻击。在24日龄攻毒组中,rFPV首免与全病毒灭活疫苗加强免疫组的死亡比例(0/17)显著低于17日龄全病毒灭活疫苗单独免疫组(16/17)。在31日龄攻毒组中,rFPV首免与全病毒灭活疫苗加强免疫组的死亡比例(0/17)显著低于10日龄rFPV单独免疫组(6/17)。结果显示,在鸡群普遍存在针对H5亚型AIV母源抗体的情况下,rFPV首免与全病毒灭活疫苗配合使用能使鸡体快速建立坚强的免疫保护反应,是一种非常有效的免疫策略。

关键词： H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒全病毒灭活疫苗加强免疫

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鸭源H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建

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中国兽医科学 2009年第1期39卷 54-57页

作者：唐应华吴培培彭大新张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

H5N1亚型clade 2.3.4为我国南方地区的优势毒株。A/mallard/Huadong/S/2005(S)病毒在遗传进化上属于clade 2.3.4,而A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)病毒属于clade 2。通过删除S病毒和Y病毒的HA多碱性氨基酸序列,S病毒由PLRERRRKRGL改变为PLREGRGL,Y病毒由PQR-ERRKKRGL改变为PQREGRGL,使之成为低致病性特征的HA基因。将S病毒和Y病毒的NA基因和突变的HA基因分别组合,由A/Puerto Rico/8/34(PR8)病毒提供6个内部基因,进行拯救,共获得4个致弱病毒(SS,SY,YS,YY)。这4个致弱病毒对SPF鸡的静脉内致病指数(IVPI)为0,对10日龄SPF鸡胚无致病性。SS、SY、YS、YY病毒第10代鸡胚尿囊液的HA效价分别为9、11、111、1 lb。

关键词： H5N1 HA裂解位点反向遗传疫苗候选株

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利用反向遗传技术产生8基因全禽源流感病毒疫苗候选株

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病毒学报 2006年第2期22卷 126-130页

作者：石火英张小荣陈素娟吴艳涛刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

利用反向遗传技术将含有A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）株禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）的6个内部基因与H5N1亚型AIV的2个表面基因HA和NA共转染COS-1细胞，产生了6＋2全禽源的重配AIV。将H5N1亚型AIV的HA基因经基因... 详细信息

利用反向遗传技术将含有A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）株禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）的6个内部基因与H5N1亚型AIV的2个表面基因HA和NA共转染COS-1细胞，产生了6＋2全禽源的重配AIV。将H5N1亚型AIV的HA基因经基因突变致弱，然后将A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）AIV的6个内部基因的cDNA和以上致弱的禽源HA基因及NA基因的cDNA分别克隆到转录／表达载体pHW2000中，构建成8个转录／表达质粒。将8个质粒共转染COS-1细胞，24h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚，72～90h后鸡胚死亡，收取鸡胚尿囊液进行血凝、血凝抑制试验、序列分析、病毒致病性试验和动物免疫保护试验，最终证实产生了致弱的全禽源AIV瘩苗候诜株．

关键词：反向遗传技术 AIV 质粒转染

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