检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒学 2005年第4期20卷 388-392页

作者：卢建红邵卫星龙进学刘玉良石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物,用RT-PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因... 详细信息

设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物,用RT-PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因,而其它5个内部基因来自A/WSN/33,进行了6种3+5组合形式的基因重排,把相应组合的转录/表达质粒共转染COS-1细胞,均产生了预期组合、有感染性的H9N2亚型流感病毒,表明亲缘关系遥远的流感病毒可以互相获取基因片段产生重组病毒,提示表面结构基因和单个内部基因不足以限制H9N2AIV在哺乳动物细胞上的宿主范围,同时也验证了构建的8个转录/表达载体均能有效工作,为进一步研究H9N2亚型AIV基因结构与功能、AIV与宿主之间的关系打下了基础。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型反向遗传技术基因重排

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鸡白痢沙门氏菌dfrA基因与Ⅰ类整合子的特征

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2007年第2期28卷 1-4页

作者：王晓泉焦新安潘志明陈祥吴双王彦红刘秀梵扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

1993～2006年间分离鸡白痢沙门氏菌141株,通过抗生素敏感性试验测定其对三甲氧苄氨嘧啶(TMP)耐药性,并用PCR方法检测dfrA基因的流行及与Ⅰ类整合子的关系。141个分离株对TMP的耐药率为90.8%(128/141)。128株TMP耐药性沙门氏菌中检测到4... 详细信息

1993～2006年间分离鸡白痢沙门氏菌141株,通过抗生素敏感性试验测定其对三甲氧苄氨嘧啶(TMP)耐药性,并用PCR方法检测dfrA基因的流行及与Ⅰ类整合子的关系。141个分离株对TMP的耐药率为90.8%(128/141)。128株TMP耐药性沙门氏菌中检测到4种dfrA基因,即dfrA1、dfrA12、dfrA13和dfrA17。dfrA12和dfrA17基因广泛分布。PCR产物测序表明:所有dfrA1和dfrA17基因都位于Ⅰ类整合子中;而dfrA12和dfrA13基因与Ⅰ类整合子无关,主要通过接合性质粒发生转移。鸡白痢沙门氏菌中TMP耐药性居于首位,其主要原因是dfrA基因广泛由接合性质粒和Ⅰ类整合子携带。

关键词：鸡白痢沙门氏菌三甲氧苄氨嘧啶耐药性 dfrA基因 Ⅰ类整合子

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运用锚引物扩增新城疫病毒鹅源分离株基因组末端序列

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2002年第2期23卷 17-20页

作者：黄勇吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

在T4RNA连接酶的作用下,将人工合成的锚引物直接与新城疫病毒(NDV)鹅源毒株ZJ1株的基因组5′末端的反转录产物及NDV基因组3′末端直接相连,然后用聚合酶链反应(PCR)和RT PCR分别快速扩增基因组5′末端和3′末端。测序结果表明:3′末端的... 详细信息

在T4RNA连接酶的作用下,将人工合成的锚引物直接与新城疫病毒(NDV)鹅源毒株ZJ1株的基因组5′末端的反转录产物及NDV基因组3′末端直接相连,然后用聚合酶链反应(PCR)和RT PCR分别快速扩增基因组5′末端和3′末端。测序结果表明:3′末端的Leader序列为55nt,5′末端的trailer序列为114nt。将该序列与GenBank报道的NDV鸡源毒株的相应序列相比,ZJ1株与6个鸡源NDV毒株的Leader和trailer序列的同源性分别为83.6%～92.7%和60 5%～63.2%。序列比较结果表明:该鹅源毒株与鸡源毒株在基因组3′端调控区有较高的同源性,而在基因组5′端的调控区同源性则较低。

关键词：末端序列新城疫病毒锚引物基因组鹅源分离株 PCR

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H9N2亚型禽流感病毒基因组的遗传进化分析

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病毒学报 2012年第1期28卷 7-14页

作者：李树纯李心海仲书官孙化露潘金金陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 徐州生物工程职业技术学院徐州221006

2009～2011年从江苏省、湖北省和安徽省等地来源于鸡、鸭、鹌鹑和鸽子的样品中分离鉴定出16株H9N2亚型禽流感病毒。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出分离株的全基因片段,并对其进行测序及遗传进化分析。序列分析显示,16株病毒HA... 详细信息

2009～2011年从江苏省、湖北省和安徽省等地来源于鸡、鸭、鹌鹑和鸽子的样品中分离鉴定出16株H9N2亚型禽流感病毒。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出分离株的全基因片段,并对其进行测序及遗传进化分析。序列分析显示,16株病毒HA基因裂解位点氨基酸序列为P-S-R/K-S-S-R,符合低致病性禽流感的分子特征;226位均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特性。M2基因均出现了对金刚烷胺产生耐药性的N31S突变。不同宿主来源的H9亚型AIV的主要分子特征一致。全基因遗传进化分析表明16株H9N2亚型禽流感病毒全基因发生了3配体重组,即以F98亚系AIV为骨架,HA来源于Y280亚系,PB2和M基因来源于G1亚系,形成了2种新的基因型。因此,要加强对H9N2亚型禽流感病毒的监测,密切关注它的重组趋势。

关键词： H9N2 禽流感病毒基因组遗传进化分析

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鹅源新城疫病毒M基因的原核表达及其多克隆抗体制备

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江苏农业学报 2012年第1期28卷 125-130页

作者：段志强胡娇胡增垒王郁杨朱杰胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化*** BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检... 详细信息

试验旨在制备原核表达鹅源新城疫病毒(NDV)JS/5/05/Go株M蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。以鹅源NDV总RNA为模板,RT-PCR扩增M基因,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET32a-M,转化*** BL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物;用KCl染色切胶纯化法纯化重组蛋白;采用切胶免疫小鼠的方法制备M蛋白多克隆抗体,抗体效价用间接ELISA检测,特异性用Western blot和间接免疫荧光法鉴定。结果表明,在大肠杆菌中成功表达了分子量约为55 000的重组蛋白,用切胶纯化法获得了纯度较高的重组蛋白;ELISA法检测抗体效价可达1∶102 400,Western blot和间接免疫荧光试验结果表明制备的多克隆抗体能够特异性识别纯化的M蛋白及NDV自身表达的M蛋白。

关键词：鹅源新城疫病毒 M基因原核表达多克隆抗体

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不同血清型马立克氏病病毒在体外相互增殖的影响

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农业生物技术学报 1999年第1期7卷 41-46页

作者：吴晓丰刘秀梵张如宽吴长新彭大新 225009 扬州大学畜牧兽医学院畜禽传染病农业部重点开放实验室!扬州

通过细胞培养板间接免疫荧光空斑计数法对MDV1,2和3型在鸡成纤维细胞（Chickenembryofibroblast，CEF）上相互增殖的影响进行研究，发现：（1）MDV2，3型不影响MDV1型形成的空斑数目，但明显地减少了每一个空斑中的感染细胞数；（2）MDV... 详细信息

通过细胞培养板间接免疫荧光空斑计数法对MDV1,2和3型在鸡成纤维细胞（Chickenembryofibroblast，CEF）上相互增殖的影响进行研究，发现：（1）MDV2，3型不影响MDV1型形成的空斑数目，但明显地减少了每一个空斑中的感染细胞数；（2）MDV2型对MDV3型在体外CEF上形成的空斑数目也无明显影响，但能显著增强MDV3型的复制，而且这种增强作用依赖于2型剂量；（3）来自MDV2型感染的CEF培养上清液对HVT的复制无明显抑制作用，而r-干扰素能明显抑制MDV1和3型在细胞单层上空斑形成，说明MDV之间的相互作用与r-干扰素无关。而2型和3型之间的协同作用可能与2型病毒促进了3型病毒的复制有关。

关键词：马立克氏病病毒体外增殖

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重组减毒细菌运送CD8^+T细胞表位的效应分析

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第6期22卷 730-733页

作者：潘志明张晓明焦新安 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 法国巴斯德研究所免疫调节生物学实验室法国巴黎75015

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8+T细胞表位的效应。方法:以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)CD8+T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC),... 详细信息

目的:分析重组减毒菌体外运送CD8+T细胞表位的效应。方法:以表达卵清蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)CD8+T细胞表位的重组菌13A(ptG2F)、25A(ptG2F)和SL7207(ptG2F)感染抗原提呈细胞(APC)LKb、LLd和骨髓源树突状细胞(BMDC),应用体外抗原提呈试验检测APC对重组菌运送的CD8+T细胞表位的提呈效应。结果:感染试验证实,减毒菌13A、25A和SL7207对LKb细胞或LLd细胞均具有良好的侵袭能力,BMDC对重组菌具有很好的摄取功能。抗原提呈试验结果显示,在感染的早期(2h),LKb、LLd细胞和BMDC均可提呈重组菌13A(ptG2F)或SL7207(ptG2F)运送的T细胞表位;在感染的晚期(48h),LKb细胞对OVA257-264CD8+T细胞表位的提呈效应降低,LLd细胞对LCMV118-132CD8+T细胞表位的提呈效应增强。3种APC均不能提呈25A(ptG2F)运送的T细胞表位。另外,在同样的作用条件下,BMDC对减毒菌运送的抗原表位的提呈效应要强于LKb和LLd细胞。结论:重组菌能运送CD8+T细胞表位,为基于减毒细菌的新型基因工程疫苗的分子设计提供了有益借鉴。

关键词： CD8^+T细胞表位减毒大肠杆菌减毒鼠伤寒沙门氏菌体外抗原提呈试验

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共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性研究

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 405-408页

作者：陈素娟丁彦红钱程柴茂彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室/禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的遗传稳定性,本研究将其接种CEF,绘制生长曲线。结果显示,该重组病毒与亲本病毒的生长速度及蚀斑大小一致;在CEF连续培养20代,取第0代、5代、10代、20代重组病... 详细信息

为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的遗传稳定性,本研究将其接种CEF,绘制生长曲线。结果显示,该重组病毒与亲本病毒的生长速度及蚀斑大小一致;在CEF连续培养20代,取第0代、5代、10代、20代重组病毒PCR扩增HA和IL-6基因进行鉴定,显示HA基因无核苷酸突变,IL-6基因在第20代时有1个氨基酸发生突变,但不影响该蛋白的功能区;间接免疫荧光试验证明所选代次病毒均能够表达HA蛋白,RT-PCR试验表明各代次病毒均可以表达鸡IL-6基因;通过蓝斑鉴定重组病毒纯度,结果显示所有蚀斑均为蓝斑。因此,该重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性,符合兽医生物制品的生产要求。

关键词：禽流感病毒 HA基因鸡IL-6 重组鸡痘病毒遗传稳定性

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流感病毒气源性传播研究进展

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中国家禽 2015年第13期37卷 43-49页

作者：江恺骏钟蕾王晓泉刘晓文刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式。流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用。外界环境的改变会... 详细信息

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式。流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用。外界环境的改变会直接影响病毒气溶胶颗粒形成的数量和大小,进而影响传播效率。目前,经过长期的筛选和比较,将豚鼠和雪貂作为研究流感气源性传播的模式动物,根据不同目的或者单独使用或者协同实验。文章通过对病毒本身的生物学特性以及外界环境对气源性传播产生的影响进行了初步总结,对进行气源性传播的实验动物给出了综合评价,一方面为研究者提供较为全面的总结,另一方面为防治流感提供依据。

关键词：流感病毒气源性传播生物学特性动物模型环境因素

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反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验

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中国家禽 2005年第17期27卷 11-13页

作者：石火英张小荣孙学辉刘慧谋刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死... 详细信息

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标,评价其免疫和交叉免疫保护作用。结果表明:反向遗传操作技术为构建新型的流感疫苗株提供了更好的方法。

关键词：反向遗传操作技术禽流感病毒疫苗免疫保护作用 H5N1亚型操作技术反向遗传保护性试验致弱禽源

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