检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2004年第1期20卷 90-94页

作者：刘玉良刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多... 详细信息

近年来,在分子病毒学研究领域兴起一门新型技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,是一种反向遗传操作技术(reverse genetics),通常被称为"病毒拯救(the rescue of virus)",它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一困扰研究者多年的难题.从cDNA克隆拯救出负链RNA全病毒是20世纪90年代分子病毒学研究领域最振奋人心的突破之一,它开启了人们对病毒基因组进行人工操作和详细了解病毒基因及其产物功能的大门.该技术发展迅速,倍受国内外研究者关注.

关键词：分子病毒学 RNA病毒反向遗传 cDNA 克隆

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表达鸡白细胞介素1β基因重组鸡痘病毒的构建

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中国兽医科技 2004年第1期34卷 12-16页

作者：邵卫星卢建红刘玉良韦栋平彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

从伴刀豆球蛋白 (ConA)刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 1β(ChIL 1β)编码区基因 ,通过与GenBank上登录的ChIL 1β序列 (Y15 0 0 6 )进行比较。结果显示 ,在ChIL 1β基因编码区的 10 4位、30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变... 详细信息

从伴刀豆球蛋白 (ConA)刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 1β(ChIL 1β)编码区基因 ,通过与GenBank上登录的ChIL 1β序列 (Y15 0 0 6 )进行比较。结果显示 ,在ChIL 1β基因编码区的 10 4位、30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变化 ;相应的氨基酸在 35位也发生了变化。虽然 30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变化 ,但没有引起氨基酸变化 ,说明这一区域的氨基酸具有一定的保守性。从氨基酸的性质上看 ,35位 (Asp→Ala)由酸性氨基酸变为中性氨基酸 ,这可能是同一种属的不同品种间的正常变化。以鸡痘病毒 (FPV )为活载体 ,构建了表达ChIL 1β的重组鸡痘病毒rFPV IL 1β。应用XTT/PMS方法检测rFPV IL 1β感染的成纤维细胞 72h后表达ChIL 1β的生物活性 ,效价为 1.0× 10 5U /mL ,证明FPV能有效地表达ChIL 1β。

关键词：鸡痘病毒基因重组鸡白细胞介素1β 生物活性鸡脾细胞核苷酸氨基酸品种 FPV 细胞因子

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鸡马立克氏病重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗免疫效力试验

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中国家禽 2004年第20期26卷 7-9页

作者：胡传伟彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-g... 详细信息

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-gB/R二价冻干苗对超强毒株Md5和RB1B攻击时的免疫保护效果明显优于HVT冻干苗,接近CVI988/Rispens的水平,本研究证明HVT+rFPV-gB/R二价冻干疫苗是一种安全、方便、高效的疫苗。

关键词：鸡马立克氏病超强毒株冻干火鸡疱疹病毒重组鸡痘病毒疫苗免疫保护效果 RB1 效力试验血清

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H_9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用

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中国家禽 2004年第10期26卷 21-22,27页

作者：王海燕刘文博胡顺林孔晶吴艳涛文其乙张评浒高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

禽流感分型单克隆抗体在禽流感的检疫、监测、预警预报工作中发挥重要作用。作者以Ｈ_9 Ｎ_2 亚型禽流感病毒Ｆ株为免疫原获得了特异性优、血凝抑制效价高的单克隆抗体，为Ｈ_9 亚型禽流感病毒的分型提供了良好的诊断试剂。

关键词： H9亚型禽流感病毒单克隆抗体宿主谱传染源诊断

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直接酶联免疫吸附法和聚合酶链反应联合检测沙门菌的应用

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中华预防医学杂志 2004年第5期38卷 331-334页

作者：黄金林焦新安潘志明文其乙孙林刘秀梵扬州大学生物科学与技术学院 225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接... 详细信息

目的　通过比较试验 ,得到准确、快速的沙门菌检测方法。方法　 2 2 8株沙门菌经过前增菌、选择性增菌后 ,采用在聚合酶链反应 (PCR)和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 ,并将 2种快速检测方法进行比较研究。结果　PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,2种方法的检测符合率达 99%以上。直接ELISA结合PCR法对饮食行业工作人员健康检查的 15 4 6份人粪便样品进行检测 ,同时以国家标准方法为参照 ,直接ELISA法的敏感性和特异性达 10 0 %和 97 14 % ,PCR法的敏感性和特异性均为 10 0 %。结论　优化的沙门菌检测程序是对大量样品采用直接ELISA筛检 ,除去大量阴性样品 ,阳性样品用PCR法作进一步鉴定 ;血清型的确定用国家标准方法。

关键词：沙门菌 PCR法酶联免疫吸附法 ELISA法联合检测聚合酶链反应敏感性人粪比较试验样品

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一规模化猪场断奶仔猪腹泻大肠杆菌毒力因子的检测

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畜牧与兽医 2004年第2期36卷 11-13页

作者：陈祥高崧施慧王雷刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

从疑似断奶仔猪腹泻的仔猪中分离、鉴定出15株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定,11株为0131、4株未定型,所有O131血清型菌株呈β溶血。多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,O13... 详细信息

从疑似断奶仔猪腹泻的仔猪中分离、鉴定出15株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定,11株为0131、4株未定型,所有O131血清型菌株呈β溶血。多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,O131菌株的毒素为STa、STb、SLT-2e,表达F18粘附素,未定型菌株的毒素为STa,共表达F6和F18粘附素。对15株大肠杆菌用16种抗生素进行药敏试验,结果表明:分离株对阿米卡星、痢特灵、新霉素敏感,而对多种抗生素产生了不同程度的耐药性。运用本场大肠杆菌分离株灭活苗免疫猪群,取得良好效果。

关键词：大肠杆菌 0血清型断奶仔猪腹泻 PcR 毒力因子仔猪

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两种消毒剂对禽流感病毒的杀灭效果

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中国兽医杂志 2004年第5期40卷 43-44页

作者：卢建红刘玉良韦栋平邵卫星张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

禽流感是由正粘病毒科中的A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合征.A型流感病毒基因易变、亚型众多、分布广泛,虽然中国出现的禽流感主要是低致病性的H9N2亚型,但各种家禽散养和混养的生态以及香港和世界各地不断从活禽市场检出H5N... 详细信息

禽流感是由正粘病毒科中的A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合征.A型流感病毒基因易变、亚型众多、分布广泛,虽然中国出现的禽流感主要是低致病性的H9N2亚型,但各种家禽散养和混养的生态以及香港和世界各地不断从活禽市场检出H5N1流感病毒或发生禽流感等情况提示我们加强禽流感的防止工作迫在眉睫,除应用疫苗外,卫生和消毒等是非常重要的生物安全措施.我们对两种不同制剂的消毒剂进行了杀灭流感病毒试验,可以给实际应用提供参考.

关键词：消毒剂禽流感病毒杀灭效果菌毒杀星杀毒威

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家禽DNA疫苗研究进展(下)

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中国家禽 2004年第1期26卷 31-33页

作者：张小荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素.由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了... 详细信息

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素.由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了影响免疫应答的因素.此外,质粒的存在形式也可能会对免疫应答造成影响,例如仅有Schubbert的一篇研究报道表明,将NDV F基因克隆入CMV极早期启动子和鸡β肌动蛋白基因启动子的下游,构建NDVDNA疫苗,环状质粒DNA肌肉接种1周龄小鸡并不能诱导产生针对F蛋白的抗体,也没有任何保护效果,而线性化质粒DNA免疫后的5只鸡有4只产生了高水平的抗体,并能保护强毒株的攻击.而在其他所有的研究中使用的都是高纯度的超螺旋质粒DNA进行免疫.

关键词：家禽 DNA疫苗载体安全性

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抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 702-704页

作者：曾艳兵焦新安潘志明黄金林张评汻张苏华孙泉云刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 上海畜牧兽医总站兽医诊断中心上海201103

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹... 详细信息

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8～ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断。

关键词：禽流感病毒 H9亚型血凝素单克隆抗体

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产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 573-576页

作者：梁光军田银芳文其乙张小荣潘志明高玉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学实验农场苏北人民医院

目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内... 详细信息

目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构建的重组质粒经内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,发现特异的目的基因条带。SDS -PAGE电泳后 ,发现重组菌株有特异的表达条带。实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性。结论　重组菌株BL2 1(pGEX6p - 1-cpα)表达了具有活性的α毒素蛋白。目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构?

关键词：产气荚膜梭菌 α毒素基因克隆表达生物学活性鉴定聚合酶链式反应

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