检索结果-内蒙古大学图书馆

致初生仔猪腹泻大肠埃希氏菌氨基糖苷类耐药性检测及AAC(3)-Ⅱ基因序列分析

中国预防兽医学报 2007年第12期29卷 925-928页

作者：陈一兵苗晓青高崧彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

从1995年至2006年分离鉴定的菌株中选取173株致初生仔猪腹泻大肠杆菌,进行氨基糖苷类药物的药敏试验;根据耐氨基糖苷类药物主要钝化酶—氨基糖苷乙酰转移酶(aminoglycoside acetyltransferases,AAC)的基因序列,设计一对引物,PCR扩增耐... 详细信息

从1995年至2006年分离鉴定的菌株中选取173株致初生仔猪腹泻大肠杆菌,进行氨基糖苷类药物的药敏试验;根据耐氨基糖苷类药物主要钝化酶—氨基糖苷乙酰转移酶(aminoglycoside acetyltransferases,AAC)的基因序列,设计一对引物,PCR扩增耐药基因片段,探讨AAC基因的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药性的相关性。对上述分离株中90个耐庆大霉素的大肠杆菌分离株进行检测,结果表明aac(3)-Ⅱ为这些分离株的主要钝化酶,检出64株,检出率为71.1%;对其中的20株PCR产物进行测序,结果表明对耐庆大霉素而不耐丁胺卡那霉素菌株aac(3)-Ⅱ基因保守区为213位A、232位C、527位A;对应的推导氨基酸序列中71位为赖氨酸、78位为脯氨酸和176位为谷氨酸。两者均耐药的菌株aac(3)-Ⅱ基因保守区具213位G、232位T、527位G,对应的推导氨基酸序列中71位为谷氨酸、78位为亮氨酸、176位为谷氨酰胺。

关键词：大肠杆菌耐药性乙酰转移酶(AAC) aac(3)-Ⅱ

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表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价

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中国预防兽医学报 2007年第5期29卷 327-331页

作者：卢军胡传伟金乔彭大新刘文博高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-g... 详细信息

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。

关键词：鸡马立克氏病重组鸡痘病毒 gB基因遗传稳定性生物安全性

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A型流感病毒的反向遗传技术研究进展

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中国生物工程杂志 2005年第3期25卷 1-5页

作者：卢建红刘秀梵邵卫星扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

A型流感病毒基因组为单股负义RNA ,分为 8个片段。反向遗传技术即从克隆的cDNA产生病毒的过程 ,是研究RNA病毒、也是研究A型流感病毒基因结构与功能的新技术。介绍了A型流感病毒反向遗传技术的发展 ,完全以质粒为基础的新操作系统及其... 详细信息

A型流感病毒基因组为单股负义RNA ,分为 8个片段。反向遗传技术即从克隆的cDNA产生病毒的过程 ,是研究RNA病毒、也是研究A型流感病毒基因结构与功能的新技术。介绍了A型流感病毒反向遗传技术的发展 ,完全以质粒为基础的新操作系统及其在研究病毒的生命周期、致病性、产生基因修饰的疫苗候选株等方面的应用。

关键词： A型流感病毒基因修饰质粒基因结构 RNA 生病疫苗候选株反向遗传致病性基因组

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禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测

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畜牧兽医学报 2007年第5期38卷 493-499页

作者：陈祥刘静苗晓青王晓泉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-37... 详细信息

运用基因重组方法将庆大霉素(Gentamycin,GM)抗性基因连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下此tshF-GM-tshR片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APEC E037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株,命名为E037(Δtsh).E037和E037(Δtsh)株对1日龄鸡的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有明显下降.在243株禽源分离株中,有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/1 67)和0%(0/167);O1、O2和O78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%～100%,而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%,差异极显著(P＜0.01).结果显示tsh+株大多数为高致病性菌株,且其致病性与血清型的种类有一定的相关性,温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子.

关键词：禽病原性大肠杆菌同源重组温度敏感性血凝素突变体

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不同基因型新城疫病毒对美国白羽王鸽的致病性研究

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中国预防兽医学报 2010年第6期32卷 424-427页

作者：吴双王伟伟曹军平胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为比较鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒(NDV)与其它不同基因型NDV对鸽的致病性差异,本研究选取JS-7-05-Ch(基因Ⅲ型)、WX-10-07-Pi(基因Ⅵb型)、JS-5-05-Go(基因Ⅶd型)和F48E8(基因Ⅸ型)4个病毒株,分别人工感染2月龄实验鸽。接种后,观察实验鸽临... 详细信息

为比较鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒(NDV)与其它不同基因型NDV对鸽的致病性差异,本研究选取JS-7-05-Ch(基因Ⅲ型)、WX-10-07-Pi(基因Ⅵb型)、JS-5-05-Go(基因Ⅶd型)和F48E8(基因Ⅸ型)4个病毒株,分别人工感染2月龄实验鸽。接种后,观察实验鸽临床症状、病理剖解变化、同时检测HI抗体水平变化、喉气管和泄殖腔排毒以及病毒在组织分布情况。4株NDV均能导致接种鸽的发病,但死亡率分别为0、0、100%、50%。WX-10-07-Pi接种组鸽泄殖腔排毒时间最长、而且病毒检出率比其它组高。另外,在接种组鸽的多种组织器官中均可检测出病毒。实验结果表明,不同基因型NDV对鸽均有致病性,但致病力强弱与NDV毒株特性有关;基因Ⅵb型NDV在鸽体内可长期的带毒与排毒,与其它基因型NDV相比更易在鸽群中传播。

关键词：新城疫病毒鸽致病性排毒

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华东地区致初生仔猪腹泻大肠杆菌的O血清型和毒力因子

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微生物学报 2004年第1期44卷 96-100页

作者：陈祥高崧王雷焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

从江苏、江西、安徽等 7个省疑似黄、白痢直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结中分离鉴定出 339株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定 ,除 77株未能定型、4 1株自凝外 ,测定出 2 2 1个分离株的O血清型 ,这些分离株覆盖了 6 4个血清型 ... 详细信息

从江苏、江西、安徽等 7个省疑似黄、白痢直肠棉拭及病死猪的十二指肠和肠系膜淋巴结中分离鉴定出 339株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定 ,除 77株未能定型、4 1株自凝外 ,测定出 2 2 1个分离株的O血清型 ,这些分离株覆盖了 6 4个血清型 ,以O1 0 7、O1 0 1 、O2 0 、O93、O1 1 和O1 49为主 ,共 99株 ,占定型菌株的 4 4 80 %。这些血清型与已报道的常见血清型间存在一定差异。运用黏附素单抗对以上菌株进行F4、F5、F6、F1 8、F4 1 5种黏附素检测 ,共 97个分离株表达黏附素 (2 8 6 1 % ) ,而表达两种和 3种黏附素的菌株分别有 2 2株和 8株 ,它们分别占表达黏附素菌株的2 2 6 8%和 8 2 5 % ,其中单独表达F4、F6、F5 +F4 1黏附素菌株分别有 1 8、30、1 5株 ,分别占表达黏附素菌株的1 8 5 6 %、30 93%和 1 5 4 6 % ;同时运用多重PCR对其中 1 4 5个分离株进行毒素基因 (STa、STb、LT、SLT 2e)的检测 ,拥有STa和STb毒素基因的菌株分别占检测菌株的 5 1 72 %和 37 2 4 %。F6、F4、F5 +F4 1和STa。

关键词：仔猪腹泻大肠杆菌 0血清型黏附素毒素

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以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2004年第2期44卷 157-161页

作者：张小荣焦新安潘志明张晓明刘秀梵黄金林张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染... 详细信息

根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列 ,设计一对引物 ,通过RT PCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因 ,测序确认后 ,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asd pVAX1得到重组表达载体pVAX1 HA和asd pVAX1 HA。将重组质粒转染P815细胞 ,经间接免疫荧光试验证实 ,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4 5 5 0 (pVAX1 HA)和X4 5 5 0 (asd pVAX1 HA) ,以 1× 10 9CFU 只的剂量两次口服免疫BALB c小鼠 ,免疫小鼠不仅可以检测到HA特异性的血清抗体应答 ,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击 ,说明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒 ,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。

关键词：减毒沙门氏菌 H5亚型禽流感病毒 DNA疫苗免疫原性小鼠 HA基因序列 RT-PCR 免疫应答

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2002-2005年华东地区家鸭中不同HA亚型低致病性禽流感病毒的分布

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中国人兽共患病学报 2006年第9期22卷 888-889,854页

作者：薛峰彭宜钱忠明张评浒刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

从2002年起我们对中国华东地区部分省市的家鸭进行LPAIVs的病毒学监测,主要对家鸭中AIVs的感染率、亚型分布、分布的时间规律等方面进行研究。其目的就是为我国制定禽流感防制措施提供详实的流行病学信息.并对水禽中流感病毒的自然基因... 详细信息

从2002年起我们对中国华东地区部分省市的家鸭进行LPAIVs的病毒学监测,主要对家鸭中AIVs的感染率、亚型分布、分布的时间规律等方面进行研究。其目的就是为我国制定禽流感防制措施提供详实的流行病学信息.并对水禽中流感病毒的自然基因库进行研究,探讨陆地家禽中流行的AIVs与水禽中流行的AIVs之间的关系。

关键词：禽流感病毒华东地区家鸭致病性 A亚型流行病学信息病毒学监测亚型分布

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肠致病性大肠杆菌(EPEC)的致病机理

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中国人兽共患病学报 2006年第6期22卷 590-593页

作者：宦海霞高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要的公共卫生问题,每年死亡人数都超过200万,特别是那些不足5岁的婴幼儿。导致这些婴幼儿腹泻的一个最常见的病原是肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)。尽管近20年来对EPEC的致... 详细信息

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要的公共卫生问题,每年死亡人数都超过200万,特别是那些不足5岁的婴幼儿。导致这些婴幼儿腹泻的一个最常见的病原是肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)。尽管近20年来对EPEC的致病机制有了较深入的研究,但还有许多问题需要进一步了解。[第一段]

关键词：肠致病性大肠杆菌致病机理婴幼儿腹泻公共卫生问题世界范围内腹泻性疾病死亡人数致病机制

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一株家养野猪源猪圆环病毒2型的分离与鉴定

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微生物学通报 2008年第11期35卷 1760-1763页

作者：王海燕高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考... 详细信息

应用PCR方法从临诊疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)家养野猪病例的淋巴结和脾脏中扩增出预期长度的猪圆环病毒2型(PCV2)的DNA片段,在Dulac细胞中进行分离和培养,扩增全基因组序列后进行同源性分析。结果显示,扩增产物与家猪源参考毒株的序列同源性均在98%以上,该病毒与家猪源病毒差异不大。

关键词：家养野猪猪圆环病毒2型分离鉴定

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