检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 60-63页

作者：张扬焦新安刘文博潘志明高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛... 详细信息

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。结论　实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。

关键词：沙门氏菌 O9抗原模拟表位噬菌体展示肽库

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禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用

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中国免疫学杂志 2006年第1期22卷 13-15,19页

作者：唐应华张评浒薛峰刘晓文刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗... 详细信息

目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应,且所有单抗株均不与非AⅣ-H9病毒反应,而其中一株(8E6)能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示, 其中8株单抗能与AⅣ的Mr为75 000处反应,表明是针对AⅣ H9 HA的单抗。结论:本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗,特别是8E6株;这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。

关键词： H9亚型禽流感血凝素单克隆抗体 Western blot

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炭疽杆菌毒力因子作用机制研究进展

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中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 105-107页

作者：冀德君高崧吴艳涛彭大新杨玲焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

炭疽杆菌及其芽孢感染人兽,引起高热、皮肤溃疡及焦痂,亦可因不同侵入途径而引起肺炎、肠炎或全身性败血症,是一类重要的烈性人畜共患病病原.本菌存在于感染动物及人的各个组织及排泄物中,其芽孢存在于受污染的土壤、水草、皮毛及其制品... 详细信息

炭疽杆菌及其芽孢感染人兽,引起高热、皮肤溃疡及焦痂,亦可因不同侵入途径而引起肺炎、肠炎或全身性败血症,是一类重要的烈性人畜共患病病原.本菌存在于感染动物及人的各个组织及排泄物中,其芽孢存在于受污染的土壤、水草、皮毛及其制品中.本菌及其芽孢常从破损皮肤及伤口处或从呼吸道、消化道侵入草食兽及人,迅速繁殖而产生各种毒力因子,使局部组织出血、坏死及周围组织水肿甚至导致全身性症状,使动物及人休克及死亡.本菌致病作用主要依赖于其分泌的外毒素,即使在感染的某一时期使用抗生素消灭了体内所有的炭疽杆菌,亦很难保证患畜及人免于死亡,而且抗药性的存在令其危害更大.由于这一特点,炭疽杆菌及其芽孢成为一种生物武器的材料,并被应用于恐怖活动,也正是由于这一公共卫生意义,对炭疽杆菌毒力因子及其作用机制的研究较为深入,在美国炭疽热事件之后进展更快,即将推出抑制毒素作用的新药.本文对炭疽杆菌的毒力因子研究进展作一综述.

关键词：炭疽杆菌毒力因子作用机制研究进展荚膜

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鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定

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微生物学通报 2004年第2期31卷 37-40页

作者：刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将... 详细信息

将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒 ,分别转染COS 1细胞和CEF细胞 ,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光 ,表明GFP基因已得到表达 ,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功。

关键词：鹅新城疫病毒 NP、P和L基因绿色荧光蛋白表达

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鹅源新城疫病毒拯救体系的建立

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微生物学通报 2007年第3期34卷 426-429页

作者：胡顺林张艳梅孙庆刘玉良吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、... 详细信息

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、Ⅵ和Ⅷ3对引物的扩增片段分别克隆进pCR2.1载体,并亚克隆到表达质粒pCI-neo上,构建了L基因的真核表达载体(pCI-L),pNDVZJI、pCI-L与另外两个辅助表达质粒(pCI-NP和pCI-P)共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有血凝性的鹅源新城疫病毒,ZJI株鹅源新城疫病毒的成功拯救为后续相关研究工作的开展打下了基础。

关键词：新城疫病毒 cDNA 转染拯救

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我国部分地区猪源大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

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中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 33-35,47页

作者：陈祥赵娟高崧苗晓青刘静黄莉莉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆... 详细信息

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定。结果在分离的猪源大肠杆菌中,LEE毒力岛基因检测结果为:2.2%(22/1 007)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性,0.5%(5/100 7)的菌株eaeA阳性。HPI毒力岛基因检测结果为:10.6%(107/1 007)的菌株irp2和fruA基因扩增阳性,2.1%(21/1007)的菌株irp2阳性;其中有2株irp2和ler基因扩增阳性,有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性,1株irp2f、yuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性;在128个HPI阳性分离株中,O93和O107血清型菌株分别占定型菌株的15.7%(13/83)和12.0%(10/83)。结论2.7%的猪源大肠杆菌携带LEE,12.7%的菌株携带耶尔森菌HPI,O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型。

关键词：猪源大肠杆菌 O血清型强毒力岛肠细胞脱落位点毒力岛

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猪源大肠杆菌(ETEC、STEC、AEEC)毒力基因及其与O抗原型的关系

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微生物学报 2008年第7期48卷 857-862页

作者：陈祥赵李祥高崧苗晓青焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300... 详细信息

【目的】揭示从我国部分地区仔猪腹泻或水肿病病猪体内分离到的300个大肠杆菌分离株所属病原型(pathotype)、毒力基因及其与O血清型的关系。【方法】O血清型采用常规的凝集试验进行测定,毒力基因采用PCR方法检测。【结果】通过对这300个分离株的O血清型及其毒素、紧密素和黏附素基因进行鉴定,结果显示除50株未定型、17株自凝外,测定出233个分离株的血清型,这些分离株覆盖了45个血清型,其中以O149、O107、O139、O93和O91为主,共133株,占定型菌株的57.1%;拥有estⅠ、estⅡ、elt、stx2e和eaeA基因的菌株分别为102(34.0%)、190(63.3%)、81(27.0%)、57(19.0%)和54(18.0%)株;分离株中有51株K88基因阳性(其中菌毛表达率为100%),75株F18基因阳性(其中菌毛表达率为50.7%),在K88菌株中,O149血清型与estⅠ或estⅡ+elt密切相关,在F18菌株中,O107血清型与estⅠ或estⅡ、O139血清型与stx2e紧密相关。依其毒力特征可将这些分离株分为以下6种类型:ETEC、STEC、AEEC、ETEC/STEC、AEEC/ETEC和AEEC/ETEC/STEC,分别拥有190、24、36、32、17和1个菌株,占分离株的63.3%、8.0%、12.0%、10.7%、5.7%和0.3%。通过分析这些分离株的O血清型、毒素类型和黏附素型之间的相关性:猪源ETEC以O149、O107、O93和O98等血清型为主,O149:K88菌株主要与estⅡ或estⅡ+elt肠毒素相关,O107:F18菌株主要与estⅡ相关,O93和O98血清型菌株主要与estⅡ肠毒素相关;STEC菌株以O139:F18血清型为主,拥有stx2e;AEEC菌株拥有紧密素,无明显优势血清型;ETEC/STEC菌株以O107:F18和O116:F18血清型为主,主要与estⅠ+stx2e或estⅡ+stx2e密切相关,ETEC/AEEC菌株以O91和O107血清型为主,全部拥有肠毒素estⅠ和紧密素基因。【结论】我国至少存在6种病原型的猪肠道致病性大肠杆菌,其中ETEC为我国部分地区猪大肠杆菌病的主要病原,同时其病原型日益复杂。

关键词：仔猪大肠杆菌血清型毒力基因产肠毒素大肠杆菌产志贺毒素大肠杆菌黏附与脱落性大肠杆菌

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SPF鸡人工感染禽源大肠杆菌、H9亚型禽流感病毒后的体液免疫应答和死亡率分析

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畜牧兽医学报 2006年第9期37卷 899-902页

作者：高璐胡仁莉陈祥盛瑜刘静高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和***173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种***组死亡率最高;各... 详细信息

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和***173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种***组死亡率最高;各混合感染组试验鸡针对***和LPS的抗体水平低于单独感染***组,其中又以先接种MPAIV再接种***组为最低,提示MPAIV和***间存在协同致病作用,这种协同机理可能与因MPAIV的感染导致一定程度的免疫抑制并进而促进了***在体内的定居与繁殖有关。

关键词： SPF鸡大肠杆菌低致病性禽流感病毒协同致病免疫抑制

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利用8质粒系统拯救A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株禽流感病毒

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微生物学报 2005年第3期45卷 373-376页

作者：石火英卢建红陈素娟孙蕾刘秀梵刘玉良扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的... 详细信息

应用反向遗传技术将含有1998年中国大陆分离株H9N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的8个基因片段的质粒共转染COS_1细胞,产生了与野生病毒生物学特性相同的H9N2亚型AIV。将A Chicken Shanghai F 98(CK SH F 98)株H9N2亚型AIV的8个基因组cDNA分别克隆到polⅠ_polⅡ转录表达载体pHW2 0 0 0中,构建成8个转录表达载体重组质粒。将这8个质粒共转染COS_1细胞,2 4h后收获细胞及上清接种SPF鸡胚,4 8h后收取鸡胚尿囊液继续进行鸡胚传代,产生能致死鸡胚的病毒。经血凝、血凝抑制试验、序列分析和电镜观察,证实产生了CK SH F 98(H9N2 )株AIV。

关键词：反向遗传技术 H9N2亚型AIV 质粒转染

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3株表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒的免疫效力比较

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畜牧兽医学报 2010年第1期41卷 60-64页

作者：王彦红陈素娟刘武杰仇旭升董丽彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因... 详细信息

作者旨在探讨鸡痘病毒ORF073或ORF214基因缺失后,在母源抗体存在情况下对重组病毒免疫效力的影响。将构建好的在ORF073或ORF214基因插入H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-△73LRH5A、rFPVLP-△214LRH5A)及单表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒(rFPVLP-12LSH5A)分别免疫SPF鸡和商品鸡,检测重组疫苗诱导的免疫效力。结果:3种重组鸡痘病毒在SPF鸡产生较高的HI抗体效价及100%的免疫保护;在HI母源抗体效价为2.45的商品鸡体内基因缺失株重组病毒比rFPVLP-12LSH5A易于清除,抗体上升缓慢而且免疫28 d后HI抗体效价较低,免疫保护率低,分别为16.7%和23.3%;在母源HI抗体效价为0的商品鸡体内基因缺失株重组病毒免疫后产生的抗体效价高,免疫28 d后分别达到3.50和3.17。结果表明在商品鸡体内母源抗体影响下,缺失ORF073或ORF214基因的重组鸡痘病毒的免疫效力降低。

关键词：重组鸡痘病毒 H5亚型AIV 免疫效力

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