检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2025年第2期33卷 355-365页

作者：王哲武嵘峰耿晴晴赵梓多吴一凡程富富席一凡陈欣雨王春慧子牛英杰左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

禽类原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)具有能够从血液迁移而定植于生殖嵴的特点，因此PGCs不仅能替代受精卵开展遗传修饰，而且在禽类的种质资源保护和濒危物种的复原方面都具有重要的应用前景。现有的PGCs体外培养体系对于... 详细信息

禽类原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)具有能够从血液迁移而定植于生殖嵴的特点，因此PGCs不仅能替代受精卵开展遗传修饰，而且在禽类的种质资源保护和濒危物种的复原方面都具有重要的应用前景。现有的PGCs体外培养体系对于支持雌雄PGCs生长之间存在差异，满足不了PGCs在种质资源保护中的需求。针对这一问题，本研究以鸡(Gallus gallus domesticus) PGCs为研究对象，探究脂肪酸氧化(fatty acid oxidation, FAO)在PGCs形成中的功能，旨在为后续建立完善的PGCs体外培养体系提供理论参考。基于转录组学分析FAO在胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)向PGCs分化过程中的作用，通过CCK8与EdU实验探究FAO激活剂BMS-687453 (BMS)和抑制剂马来酸哌克昔林(perhexiline maleate, Per)的最适添加浓度；分别通过观察细胞形态、qRT-PCR检测FAO关键基因和PGCs特异标记基因的表达、间接免疫荧光和流式细胞分析等检测FAO在ESCs向PGCs分化过程中的作用。转录组学分析显示，参与FAO的相关基因在ESCs与PGCs中差异表达，且富集于生殖细胞分化相关通路(MAPK signaling pathway, GnRH signaling pathway, PI3K-Akt signaling pathway);qRT-PCR结果表明，乙酰辅酶A酰基转移酶2 (acetyl-Coacyltransferase 2, ACAA2)和烯酰辅酶A水合酶1 (enoyl-CoA hydratase 1, ECH1)在PGCs高表达。CCK8与EdU实验确定了BMS和Per的最适添加浓度分别为80和160 nmol/L。细胞形态观察结果显示，BMS组在培养6 d的细胞中，类胚体数目显著高于Per组(P<0.05);BMS组中鸡核糖核酸同源蛋白(chicken VASA Homolog, CVH)和酪氨酸激酶受体蛋白(c-Kit proto-oncogene receptor tyrosine kinase, C-KIT)的表达量显著高于Per组(P<0.05)；间接免疫荧光和流式细胞分析结果显示，BMS组的DDX4阳性细胞数显著高于Per组(P<0.05)。以上结果表明，高水平FAO能够促进PGCs的形成。本研究为建立完善的体外培养家禽PGCs体系提供理论依据，有助于从细胞能量代谢的角度系统地阐明PGCs的发生机理。

关键词：家禽脂肪酸氧化(FAO) 转录组分析原始生殖细胞(PGCs)

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大豆卵磷脂对湖羊精液4℃保存效果的影响

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畜牧与兽医 2024年第2期56卷 1-6页

作者：江才雨康言王旭洋李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究大豆卵磷脂(SL)对湖羊精液4℃保存效果的影响,在湖羊精液基础稀释液中添加不同浓度(0、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)的SL进行4℃低温保存试验,通过在不同保存时间(0~6 d)对精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率、质膜完整率... 详细信息

为探究大豆卵磷脂(SL)对湖羊精液4℃保存效果的影响,在湖羊精液基础稀释液中添加不同浓度(0、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)的SL进行4℃低温保存试验,通过在不同保存时间(0~6 d)对精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率、质膜完整率和顶体完整率进行测定,确定湖羊精液低温保存稀释液中SL的最佳添加浓度。结果表明:保存2、5、6 d,0.1%SL组的精子活率、活力均显著高于其他组(P<0.05);保存3 d,0.1%SL组的精子直线速率显著高于其他组(P<0.05);保存4 d,SL各组的精子曲线速率和路径速率显著高于对照组(P<0.05);保存1、5 d,0.1%SL组的精子质膜完整率显著高于其他组(P<0.05);保存2、6 d,0.1%SL组的精子顶体完整率显著高于其他组(P<0.05)。结论:在低温保存条件下,添加0.1%SL可以有效地延长湖羊精子的存活时间,提高精液质量。

关键词：湖羊精液大豆卵磷脂低温保存

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稀释比例对绵羊精子活率、活力、运动速率、质膜完整率和顶体完整率的影响

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畜牧与兽医 2024年第6期56卷 15-21页

作者：张柳明王旭洋江才雨孙宇轩王健孙晓梅李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

旨在研究15℃条件下保存绵羊精液的最适宜稀释比例,获得较好的精液保存效果。试验分别将精液按照1:1、1:4、1:9、1:14、1:19和1:24进行稀释保存,在保存过程中检测精子的活率、活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)、侧摆... 详细信息

旨在研究15℃条件下保存绵羊精液的最适宜稀释比例,获得较好的精液保存效果。试验分别将精液按照1:1、1:4、1:9、1:14、1:19和1:24进行稀释保存,在保存过程中检测精子的活率、活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)、侧摆幅度(ALH)、移动角度(MAD)、质膜完整率和顶体完整率。结果显示,保存3~6 d,1:9稀释后的精子活率显著高于其他稀释比例(P<0.05);保存1~5 d,1:4和1:9稀释后的精子活力显著高于其他稀释比例(P<0.05);保存3~5 d,1:4和1:9稀释后的精子质膜完整率和顶体完整率显著高于其他稀释比例(P<0.05);保存3~6 d,1:4和1:9稀释后的精子VCL、VAP和ALH显著高于其他稀释比例(P<0.05),但两组之间差异不显著(P>0.05)。因此,在本试验条件下,15℃保存绵羊精液最合适的稀释比例是1:9,过高和过低的稀释比例均不利于绵羊精液保存。

关键词：绵羊精液稀释比例 15℃ 精子活力

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α-硫辛酸对湖羊精液低温保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2024年第7期60卷 199-204页

作者：孙嘉懿康言冯雪风张柳明李拥军孙晓梅扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

α-硫辛酸(ALA)是一种高效的生物抗氧化剂,为探究4℃保存条件下在精液稀释液中添加ALA对湖羊精液品质的影响及可能的作用机理,本实验采集3只健康湖羊精液样本,在精液稀释液中分别添加0、0.025、0.05、0.1、0.5mmol/L的ALA,其中0mmol/L ... 详细信息

α-硫辛酸(ALA)是一种高效的生物抗氧化剂,为探究4℃保存条件下在精液稀释液中添加ALA对湖羊精液品质的影响及可能的作用机理,本实验采集3只健康湖羊精液样本,在精液稀释液中分别添加0、0.025、0.05、0.1、0.5mmol/L的ALA,其中0mmol/L ALA组为对照组,检测精子活力、运动性能、结构完整性、活性氧(ROS)以及丙二醛(MDA)含量指标,确定最佳的添加浓度。结果表明:与对照组相比,外源添加适宜浓度的ALA能够显著提高精子活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)和质膜完整率等指标。随着ALA添加量的增加,精子活力、运动性能和质膜完整率呈现先上升后下降的趋势,当添加浓度为0.1 mmol/L ALA,效果最好。相对于其他添加浓度,0.1 mmol/L ALA处理组的ROS和MDA含量显著降低,减少精液低温保存过程中氧化应激带来的损伤,对精子具有较好的保护作用。本实验结果表明在湖羊低温保存精液稀释液中添加ALA通过降低氧化损伤来改善精液品质,其最适宜的添加浓度为0.1 mmol/L。

关键词： α-硫辛酸湖羊精液低温保存氧化应激

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代谢产物泛酸的筛选及其在原始生殖细胞形成过程中的功能验证

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中国家禽 2025年第1期47卷 15-23页

作者：程富富武嵘峰耿晴晴赵梓多王哲牛英杰左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后... 详细信息

研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后,分别通过观察细胞形态、qRT-PCR检测PGCs特异标记基因、间接免疫荧光和流式细胞分析等分析PA代谢在ESCs向PGCs分化过程中的作用。结果显示:参与PA代谢相关的基因在ESCs与PGCs中呈现差异性表达,且富集于生殖细胞分化相关的通路(Pantothenate and CoA biosynthesis、TGF-beta signaling pathway和AMPK signaling pathway);PA和PZ的适宜添加浓度分别为20μmol/L和80 nmol/L;PA组在第6天的类胚体数目显著低于PZ组,PA组中CVH和C-KIT3的表达量显著低于PZ组(P<0.01);PA组的DDX4阳性细胞数显著低于PZ组(P<0.01)。结果表明添加PA抑制PGCs的形成,添加PZ促进PGCs的形成。

关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞代谢物泛酸鸡

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安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 176-180页

作者：王旭洋张柳明江才雨孙宇轩李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响,本实验采集3只1~2岁健康成年湖羊精液,混匀后取5份等量精液,按1:9的比例加入不同安石榴甙浓度(0、5、15、30、45μmol/L安石榴甙)的稀释液,4℃保存7 d。检测精子的活率、活力、质膜完整率... 详细信息

为探究安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响,本实验采集3只1~2岁健康成年湖羊精液,混匀后取5份等量精液,按1:9的比例加入不同安石榴甙浓度(0、5、15、30、45μmol/L安石榴甙)的稀释液,4℃保存7 d。检测精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性等指标。结果显示:保存4~7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子活率、活力显著高于其他各组;保存2~7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子的MMP显著高于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组精子ROS含量显著低于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液MDA含量显著低于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液CAT活性显著高于其他各组。本研究结果表明,在稀释液中添加30μmol/L安石榴甙可以显著提高精液保存质量。

关键词：湖羊安石榴甙精液低温保存

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降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2024年第7期60卷 312-316页

作者：张柳明王旭洋江才雨孙宇轩王健孙晓梅李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

试验旨在研究降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存的影响。设计毛巾包裹(1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h)和37℃水浴(50、100、150、200、250mL)2种降温方式并探究最佳试验条件,在此基础上各自添加冷冻II液后平衡0、0.5、1.5、2.... 详细信息

试验旨在研究降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存的影响。设计毛巾包裹(1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h)和37℃水浴(50、100、150、200、250mL)2种降温方式并探究最佳试验条件,在此基础上各自添加冷冻II液后平衡0、0.5、1.5、2.5、3.5 h,并确定最优平衡时间,最后比较2种最优方式下湖羊冷冻精液的精子活率、活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量。结果表明:毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);添加200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h处理与200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h处理的精子活率、活力、质膜完整率和顶体完整率均不存在显著差异,但毛巾包裹降温处理的精子ROS含低于水浴降温处理(P<0.05)。由此可见,毛巾包裹降温2.5 h后添加冷冻II液继续平衡2.5 h是湖羊精液冷冻保存较适宜的处理方式,湖羊精液冷冻保存效果显著提高。

关键词：冷冻精液降温方式平衡时间精液品质湖羊

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鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测

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中国家禽 2023年第10期45卷 12-18页

作者：武嵘峰陈欣雨胡菜耿晴晴程富富席一凡左其生张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。

关键词： TBX6 过表达载体干扰载体

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褪黑素对急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟质量的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2023年第2期44卷 68-74页

作者：牛浩原瞿静雯胡慧茹吴希李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究褪黑素(melatonin)对铅中毒小鼠卵母细胞质量的的影响,以6~8周龄体况相近的ICR雌鼠卵母细胞为研究对象,将其分为5组,分别为生理盐水对照组及4个铅中毒组,并在铅中毒组的卵母细胞体外成熟培养液中分别添加浓度为0、10^(-5)、10^(-7... 详细信息

为探究褪黑素(melatonin)对铅中毒小鼠卵母细胞质量的的影响,以6~8周龄体况相近的ICR雌鼠卵母细胞为研究对象,将其分为5组,分别为生理盐水对照组及4个铅中毒组,并在铅中毒组的卵母细胞体外成熟培养液中分别添加浓度为0、10^(-5)、10^(-7)、10-9mol·L^(-1)的褪黑素,根据第1极体排出率作为体外成熟的标志,筛选出最佳的褪黑素浓度,再检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、三磷酸腺苷(ATP)水平,最后通过细胞凋亡试验分析褪黑素对铅中毒卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:体外添加1×10^(-7)mol·L^(-1)的褪黑素能显著降低铅中毒小鼠的ROS水平和早期细胞凋亡率,显著提高第1极体排出率及GSH、ATP含量。综上,在培养液中添加1×10^(-7)mol·L^(-1)的褪黑素能在体外成熟过程中显著改善铅中毒雌鼠卵母细胞的质量。

关键词：卵母细胞铅中毒褪黑素体外成熟

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稀释倍数对湖羊精液低温保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2023年第4期59卷 181-185页

作者：张柳明孙晓梅康言王旭洋王健王强李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响,本实验使用3只1~2岁体况良好的公羊,将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后,检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明:保存3~5 d,10倍稀释保存的精... 详细信息

为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响,本实验使用3只1~2岁体况良好的公羊,将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后,检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明:保存3~5 d,10倍稀释保存的精子活率和活力显著高于其他各组;保存1~4 d,25倍高倍稀释的精子活力下降最快,且显著低于其他组;保存1~3 d,10倍稀释保存的精子曲线速率(VCL)和路径速率(VAP)显著高于20和25倍稀释组;保存期间,10倍稀释保存的精子质膜完整性最高,且在第4天显著高于其他组;保存3~5 d,5和10倍稀释保存的精子顶体完整性显著高于15~25倍稀释组。因此,在本实验条件下,5~10倍为湖羊精液4℃保存的最适宜稀释倍数,过低或者过高的稀释倍数都不利于湖羊精液4℃保存。

关键词：稀释倍数 4℃保存湖羊运动性能功能完整性

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