检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2015年第7期35卷 1074-1078页

作者：林雨鑫张菁菁戴国俊孙明明张跟喜王金玉俞亚波王永娟扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏京海禽业集团有限公司江苏海门226103

为了有效评价京海黄鸡杂交配套系亲本BB、FF、WW对柔嫩艾美耳球虫的敏感性,本试验采用存活率、体增重、卵囊脱落数、盲肠记分、抗球虫指数(ACI)及一氧化氮(NO)、过氧化氢酶(CAT)、γ干扰素(IFN-γ)等10项血浆指标对其进行综合评价。结... 详细信息

为了有效评价京海黄鸡杂交配套系亲本BB、FF、WW对柔嫩艾美耳球虫的敏感性,本试验采用存活率、体增重、卵囊脱落数、盲肠记分、抗球虫指数(ACI)及一氧化氮(NO)、过氧化氢酶(CAT)、γ干扰素(IFN-γ)等10项血浆指标对其进行综合评价。结果显示,WW感染组ACI值最高为143.1,BB感染组ACI值为142.6,两者均为抗球虫低效,FF感染组ACI值最低为119.3,为抗球虫无效。ACI值与CAT、超氧化物歧化酶(SOD)、白介素17(IL-17)、IFN-γ4个免疫指标相关显著(P<0.05)。在BB、FF、WW 3个感染组中,BB感染组NO、白介素12(IL-2)、IL-17、SOD含量显著高于FF感染组(P<0.05),BB、WW感染组差异不显著。结果表明,京海黄鸡杂交配套亲本BB鸡对柔嫩艾美耳球虫抗性显著高于FF鸡,略高于WW鸡。

关键词：京海黄鸡杂交配套柔嫩艾美耳球虫敏感性

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鸡IGF1、IGF2基因的遗传互作效应

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江苏农业科学 2015年第11期43卷 285-286页

作者：金崇富王金玉张跟喜杨智青时凯陈长宽陈应江江苏沿海地区农业科学研究所江苏盐城224002 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

以IGF1、IGF2基因作为影响鸡生产性能的候选基因,采用DNA测序和PCR-SSCP技术分析2个基因的单核苷酸多态性及互作效应。结果表明,IGF1基因P1位点与IGF2基因P2位点对12、16周龄鸡的质量存在互作效应。

关键词：鸡遗传多样性 IGF1R基因 IGFBP-3基因互作效应

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阿莫西林在鸡组织中的残留消除规律

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中国兽医学报 2015年第5期35卷 767-773页

作者：孙礼瑞谢星张金玲谢恺舟张小杰王剑锋刘建宇崔璐璐张跟喜戴国俊王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261401

本试验旨在研究阿莫西林在鸡组织中残留消除规律。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化后,在激发波长358nm、发射波长440nm处用高效液相色谱荧光检测器... 详细信息

本试验旨在研究阿莫西林在鸡组织中残留消除规律。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化后,在激发波长358nm、发射波长440nm处用高效液相色谱荧光检测器检测。该方法测定鸡组织中阿莫西林的检测限为5μg/kg、定量限为13μg/kg。阿莫西林在鸡组织样品中平均回收率为73.64%~88.82%,相对标准差为6.21%~9.63%。各试验组京海黄鸡分别按体质量以30、60mg/kg剂量内服阿莫西林,每天1次,连续给药7d,休药4h后(零休药期)各组织中阿莫西林残留量最高,休药第3天各组织中阿莫西林残留量均迅速降低;休药后第5天阿莫西林残留量低于最高残留限量(50μg/kg);休药第9天所有组织中阿莫西林残留量均低于检测限;休药后相同时间点鸡肌肉中药物残留量最低,肝脏中的药物残留量最高;阿莫西林在鸡肾脏中残留比鸡肌肉、肝脏消除缓慢且消除时间长;阿莫西林在鸡组织中的残留量与给药剂量呈正相关。根据WT1.4软件计算所得,建议黄羽肉鸡按体质量以30、60mg/kg剂量给药,每天1次,连续7d后,其休药期(WT)分别为3、4d。

关键词：阿莫西林高效液相色谱荧光检测法残留消除鸡组织

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基于DAZL基因提高鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化诱导剂筛选

基于DAZL基因提高鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化诱导剂筛选

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会

作者：张蕾扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

(引言)旨在确定Dazl 基因启动子的核心活性调控区,并比较不同诱导剂对Dazl 基因启动子活性的影响,筛选出最佳基因诱导剂,以提高胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化效率.(材料与方法)采用PCR 法扩增不同长度的Dazl 启动子,插入到p... 详细信息

(引言)旨在确定Dazl 基因启动子的核心活性调控区,并比较不同诱导剂对Dazl 基因启动子活性的影响,筛选出最佳基因诱导剂,以提高胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化效率.(材料与方法)采用PCR 法扩增不同长度的Dazl 启动子,插入到pEGFP-N1 和/或pGL3-basic 载体,构建重组载体.将重组载体转染GC-1 细胞系,检测双荧光素酶活性以确定Dazl 启动子核心活性区域;比较添加不同诱导剂(维甲酸(RA)、全反式维甲酸(ATRA)、他米巴罗汀(Am80)、骨形成蛋白4(BMP4)、卵泡刺激素(FSH)、雌激素(E2)、睾酮和睾丸提取液)对Dazl 启动子活性的影响,筛选最佳诱导剂;通过形态学,qRT-PCR和免疫细胞化学检测法比较诱导剂添加后,对鸡ESCs 向精原干细胞分化的效果.(结果)确定苏禽黄鸡Dazl 基因的启动子核心调控区域为-383～- 186 bp.双荧光素酶报告基因检测系统检测结果表明,与对照组相比,诱导剂ATRA 和E2 分别使Dazl 基因启动子活性提高至1.06 和1.08,差异显著(P＜0.05＝;诱导剂Am80 使Dazl 基因启动子活性提高至1.32,差异极显著(P＜0.01＝;而其他诱导剂与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).体外诱导实验证明,经ATRA 诱导后的第6d Dazl 表达量达到最高,随后呈缓慢下降趋势;Am80 诱导后Dazl 的持续表达,且在10d 达到最大值;E2 诱导至后第8d Dazl 表达量显著上升;ATRA,Am80 和E2诱导后的第10d 均观察到生殖样细胞生成.(讨论)体外诱导条件下诱导剂ATRA、Am80 和E2 均可提高鸡Dazl 基因的表达量,促进ESCs 向生殖样细胞分化.本研究将为通过Dazl 基因的表达而诱导鸡ESCs 向精原干细胞分化奠定基础.

关键词： Dazl基因核心启动子基因诱导剂筛选雄性生殖细胞

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Am80和TSA对鸡Stra8基因启动子活性的调控作用

Am80和TSA对鸡Stra8基因启动子活性的调控作用

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会

作者：王飞扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

[目的]确定苏秦黄鸡Stra8 基因启动子的主要调控区域和预测调控元件的结合位点,探索用他米巴洛丁(Am80)或曲古抑菌素(TSA)诱导对Stra8 启动子活性的调控作用。[方法]将苏秦黄鸡Stra8 基因5'侧翼系列缺失片段插入到pGL3-basic 载体... 详细信息

[目的]确定苏秦黄鸡Stra8 基因启动子的主要调控区域和预测调控元件的结合位点,探索用他米巴洛丁(Am80)或曲古抑菌素(TSA)诱导对Stra8 启动子活性的调控作用。[方法]将苏秦黄鸡Stra8 基因5'侧翼系列缺失片段插入到pGL3-basic 载体构建重组质粒并转染DF-1 和GC-1 细胞,通过检测双荧光素酶活性和预测启动子区域调控元件的结合位点,选取适宜的启动子片段并构建其重组质粒Stra8-EGFP;将Am 80 和TSA 分别按一定的浓度梯度诱导经转染细胞,进行荧光素酶活性检测以筛选Am 80 和TSA 的最佳诱导浓度;用最适剂量的Am 80 和TSA 分别单独或联合诱导转染重组质粒Stra8-EGFP 的DF-1 细胞,通过观察绿色荧光表达程度检测Am 80 和TSA 在细胞水平对Stra8 启动活性的影响;选取生长至第三代的ESCs,培养基中添加最适浓度的Am 80 和TSA,每隔2 天观察细胞分析其对ESCs 体外分化的影响,并对诱导至第十天的细胞进行间接免疫荧光检测和荧光定量诱导不同天数生殖标记基因的变化。[结果]双荧光素酶活性检测结果显示,鸡Stra8基因启动子区-1055～+54 片段的活性较强,且含有RARα、RXRα和RARβ的结合位点;使用不同浓度的Am80 和TSA 对其进行诱导后发现二者分别在浓度为10-5mol/L 和10-6mol/L 时相对荧光素酶活性值最高,说明此浓度是Am80 和TSA 最佳诱导浓度;分别采用Am 80 和TSA 单独或联合对转染的细胞进行诱导后发现,Am 80 和TSA 协同作用的荧光素酶活性最高;重组质粒Stra8-EGFP转染DF-1 细胞后,用最佳浓度的Am 80 和TSA 联合诱导可见最强绿色荧光程度;诱导至第10 天的细胞能够表达integrinβ1 蛋白,表明Am80 和TSA 可促进ESCs 向SSCs 分化。对诱导不同天数的细胞进行生殖特异标记基因检测,结果表明Am80 和TSA 能够促进ESCs 向PGCs 和SSCs 样细胞分化,二者联合诱导组SSCs 样细胞生成效率显著高于对照组或单独诱导组。[结论]成功分析了鸡Stra8 基因启动子的活性和调控元件的结合位点,确定Am 80 和TSA 联合诱导可显著提高Stra8基因启动活性,促进ESCs 向PGCs 和SSsC 样细胞分化。该结果为通过提高Stra8 的表达量而促进雄性生殖细胞生成的效率提供参考依据。

关键词： Stra8基因启动子活性调控元件 Am80 TSA

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CRISPR/Cas介导鸡XM_001233327.1的基因敲除研究

CRISPR/Cas介导鸡XM_001233327.1的基因敲除研究

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会

作者：左其生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

(目的)本研究探讨了CRISPR/Cas 系统在鸡物种中的应用并通过CRISPR/Cas 介导基因敲除和过表达的方法验证从RNA-seq 测序过程中筛选的特异基因XM_001233327.1 的功能.(方法)采用流式细胞分选法获得纯度较高的ESC(Embryonic stem cells,ES... 详细信息

(目的)本研究探讨了CRISPR/Cas 系统在鸡物种中的应用并通过CRISPR/Cas 介导基因敲除和过表达的方法验证从RNA-seq 测序过程中筛选的特异基因XM_001233327.1 的功能.(方法)采用流式细胞分选法获得纯度较高的ESC(Embryonic stem cells,ESCs)、PGC(Primordial germ cells,PGCs)和SSC(Spermatogonial Stem cells,SSCs),提取RNA 进行转录组水平测序,通过生物信息学分析和GO 功能分析筛选鸡雄性生殖细胞分化过程中生殖细胞特异表达基因;针对筛选的特异表达基因构建Cas9 基因敲除载体,转染状态良好的ESC 并进行鸡胚注射,通过SSA 活性检测、T7E1酶切检测以及TA 克隆检测CRISPR/Cas 系统在鸡物种上的应用情况,分别构建该基因的基因敲除载体和过表达载体在体内和体外同时验证该基因的功能.(结果)RNA-seq 测序结果表明：在雄性生殖细胞分化过程中有2 个未知的转录本在PGC 中特异表达;构建的3 号Cas9 基因敲除载体SSA活性比对照组提高2 倍,将3 号载体转染鸡DF-1 细胞后T7E1 酶切检测和TA 克隆检测表明：该系统在鸡成纤维细胞介导基因XM_001233327.1 敲除效率为27％,3 号载体注射鸡胚上也能够有效的介导基因的敲除;在抑制细胞分化的因子培养条件下通过CRISPR/Cas 介导基因敲除后ESC 与对照组相比Oct4 基因并未出现显著变化,而过表达该基因时细胞在培养过程中Oct4 基因与对照组相比显著下调,Cvh 基因的表达量显著的上调;基因敲除载体和过表达载体转染ESC 后进行体外诱导实验过程中过表达组的类胚体出现的较多且出现生殖样细胞,而空白组和敲除组则没有显著差异.对照组中的Cvh 表达未出现显著性的变化;过表达组中Cvh 表达有明显的上调趋势,说明细胞开始向PGCs 方向分化,敲除组中Cvh 表达有明显的下降趋势,说明候选基因在敲出过后,细胞无法向PGCs 方向分化,而且与正常的RA 诱导组相比ESC 分化为PGC 和SSC 的数量显著减少;而过表达该基因时PGC 和SSC 产生的数量与对照组相比有显著的增加.(结论)本实验结果表明CRISPR/Cas 系统能够在鸡物种上能够有效的介导基因敲除,通过RNA-seq 筛选的未知转录本XM_001233327.1 基因为PGC 特异表达基因,敲除该基因后体外和体内都能有效的抑制PGC 的生成.

关键词：鸡 CRISPR/Cas 基因敲除过表达基因功能验证

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鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中关键lncRNA的筛选

鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中关键lncRNA的筛选

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：李东纪艳芹王颖洁王飞路镇宇何娜娜靳锴汪怡临程少泽王曼张文慧张晨赵瑞丰张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SSC 诱导分化体系提供新的依据。以RNA-Seq 技术对鸡ESC、原始生殖细胞(Pr... 详细信息

本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SSC 诱导分化体系提供新的依据。以RNA-Seq 技术对鸡ESC、原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGC)和SSC进行测序与分析,筛选出显著性差异以及特异性表达的候选lncRNAs,以qRT-PCR 对候选lncRNAs在三种细胞中表达趋势变化进行验证,通过BLAST 和RNAplex 软件对候选lncRNAs 进行靶基因预测,同时以DAVID 数据库、WEGO 以及STRING 等在线软件进行功能和蛋白网络互作分析。

关键词： lncRNA 胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞靶基因信号通路

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基于RNA-seq的家鸡雌雄PGCs的转录组测序对比分析纪艳芹

基于RNA-seq的家鸡雌雄PGCs的转录组测序对比分析纪艳芹

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会

作者：纪艳芹扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

[引言]为了研究鸡雌雄PGCs 分化的差异,筛选参与生殖细胞发育和分化机制的关键基因和信号通路.[材料与方法]试验采用性别鉴定和流式细胞分选法获得纯度较高的PGCs-female 和PGCs-male,提取细胞总RNA.利用Microarray 和RNA-seq 技术对这... 详细信息

[引言]为了研究鸡雌雄PGCs 分化的差异,筛选参与生殖细胞发育和分化机制的关键基因和信号通路.[材料与方法]试验采用性别鉴定和流式细胞分选法获得纯度较高的PGCs-female 和PGCs-male,提取细胞总RNA.利用Microarray 和RNA-seq 技术对这两种种细胞进行转录组水平测序,进行差异表达基因筛选.通过GO 分析和KEGG 通路富集,查找鸡雌雄PGCs 分化过程中显著差异的基因以及信号通路,qRT-PCR 检测差异基因的表达变化,验证RNA-seq 分析结果.[结果]结果表明,差异表达基因筛选和KEGG 通路富集分析结果发现：在PGCs-female 和PGCs-male 中共筛选到979 个差异基因,注释到46 个生物过程,富集到5 条表达显著差异信号通路中,其中包括细胞因子和细胞受体相互作用信号通路.qRT-PCR 结果表明,差异基因表达趋势与RNA-Seq 结果基本一致.[讨论]试验发现了大量的差异表达基因,在细胞途径上富集到相关的生殖细胞分化途径,信号通路富集结果部分也与生殖细胞分化具有紧密联系,本研究为探讨家鸡雌雄生殖细胞发育分化的调节机制奠定了基础.

关键词： RNA-seq 原始生殖细胞雌雄分化对比

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鸡雄性生殖细胞分化过程中相关lncRNA的筛选及其相关机制的研究

鸡雄性生殖细胞分化过程中相关lncRNA的筛选及其相关机制的研究

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会

作者：李东扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是广泛存在于动物细胞中的一类非编码蛋白序列,在动物机体发育过程中起到了重要的调节作用,并且lncRNA 作用机制在许多的哺乳动物细胞中已经被鉴定。然而,鸡作为一个拥有取材方便、数量庞大... 详细信息

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是广泛存在于动物细胞中的一类非编码蛋白序列,在动物机体发育过程中起到了重要的调节作用,并且lncRNA 作用机制在许多的哺乳动物细胞中已经被鉴定。然而,鸡作为一个拥有取材方便、数量庞大等优点的模式动物,其lncRNA 的作用机制尚不明确。这里,我们运用RNA-Seq 技术对鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)、原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGC)和精原干细胞(Spermatogoniastemcell,SSC)三种细胞进行测序与分析,筛选出显著性差异以及特异性表达的lncRNAs,使用qRT-PCR 对测序结果验证,同时对候选lncRNAs 进行靶基因预测以及lncRNA 与靶基因的网络互作分析。结果表明在三组细胞中共存在9657 个lncRNAs,其中3549 个差异显著。通过筛选,三组细胞中差异极显著以及特异性表达的lncRNAs 共有20个,qRT-PCR 结果显示这些lncRNAs 的表达趋势与RNA-Seq 中一致。同时,通过靶基因预测,共预测出25 个cis 靶基因和6 个trans 靶基因,其中的TRIM8、HAT1、CNAQ 和LYSMD3 存在于RNA-Seq 结果中。我们的研究初步揭示了lncRNA 对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制,拓宽了lncRNA 动向机制的研究层面,为鸡lncRNA 的研究奠定了理论基础。

关键词： LncRNA 胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞靶基因

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基于RNA-seq分析鸡原始生殖细胞性别分化关联基因(大摘要)-靳锴扬州大学动物科学与技术学院

基于RNA-seq分析鸡原始生殖细胞性别分化关联基因(大摘要)-靳锴扬...

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第九次全国动物生物技术学术研讨会

作者：靳锴汪怡临张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州 225009

前言原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)是各级生殖细胞和成熟配子的始祖细胞,是精子和卵细胞的前体细胞,在动物胚胎的发育过程中起重要作用。而禽类中PGCs最早出现在上胚层,随着血循环系统的形成迁移进入了生殖嵴,并继续分化为... 详细信息

前言原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)是各级生殖细胞和成熟配子的始祖细胞,是精子和卵细胞的前体细胞,在动物胚胎的发育过程中起重要作用。而禽类中PGCs最早出现在上胚层,随着血循环系统的形成迁移进入了生殖嵴,并继续分化为精原干细胞(SpermatogonialStemcells,SSCs)及卵原细胞。在第28期(孵化132小时)时,PGCs大量位于生殖嵴之中,参与原始性腺的形成,此时对比两性间原始生殖细胞之间的差异研究对于揭示禽类性别分化和生殖细胞发生发育规律具有重要意义。

关键词：鸡原始生殖细胞(PGCs)RNA-seq技术差异表达基因性别分化

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