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农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1471-1482页

作者：侯宇辰曹亚男杜小妹靳俪雅陈振海吴正常包文斌张帅扬州大学兽医学院扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发的猪肠道冠状病毒，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了解PDCoV感染新生仔猪(Sus scrofa domesticus)的致病性及肠道的病理超微结构变化，本研究对1日龄新生仔猪攻毒PDC... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发的猪肠道冠状病毒，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了解PDCoV感染新生仔猪(Sus scrofa domesticus)的致病性及肠道的病理超微结构变化，本研究对1日龄新生仔猪攻毒PDCoV CHN-GD16-05毒株后的临床表现、剖检与组织病理学变化、组织嗜性、肠道超微结构变化进行观察及分析。结果发现，新生仔猪攻毒PDCoV后第3天出现严重呕吐、腹泻、精神萎靡、嗜睡等临床症状；剖检发现，攻毒仔猪肠道胀气，肠管扩张，肠壁出血变薄甚至透明，肠腔内积聚黄色液体；PDCoV主要感染仔猪的十二指肠、空肠和回肠；荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示，空肠中PDCoV核衣壳蛋白(nucleocapsid, N)基因及其蛋白水平均极显著高于十二指肠和回肠(P<0.01)；进一步空肠组织切片的苏木精伊红染色结果显示，PDCoV感染后破坏肠绒毛结构，引起弥漫性的肠绒毛萎缩甚至融合，隐窝上皮细胞增殖及隐窝深度增加；电镜观察也发现PDCoV感染后的仔猪肠绒毛萎缩，肠上皮细胞的微绒毛断裂脱落，细胞间紧密连接被破坏，胞质空泡状细胞增多，线粒体数目减少且体积增大；此外，PDCoV感染刺激宿主的抗病毒相关基因表达，促进干扰素α (interferon α, IFN-α)、IFN-β、IFN-λ和其下游干扰素刺激基因黏病毒抗性蛋白1 (myxovirus resistance 1, MX-1)、干扰素刺激基因15 (interferon-stimulating gene 15, ISG-15)、干扰素诱导的四肽重复蛋白1 (interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 1, IFIT1)、2'-5'-寡腺苷酸合成酶1 (2'-5'-oligoadenylate synthetase 1, OAS1)、2'-5'寡腺苷酸合成酶样蛋白(2'-5'-oligoadenylate synthetase like, OASL)及炎症因子肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α, TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin 1β, IL-1β)、IL-6、C-C基序趋化因子配体20 (C-C motif chemokine ligand 20, CCL-20)基因的表达。以上结果表明，PDCoV感染新生仔猪后能够迅速入侵小肠，尤其在空肠上皮细胞中大量复制，导致感染的肠上皮细胞变性坏死进而引起肠绒毛萎缩，造成渗透性腹泻。本研究为阐明PDCoV感染仔猪的致病机制提供理论基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 新生仔猪肠道超微结构

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猪肉组织的电阻抗响应特性研究

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扬州大学学报(农业与生命科学版) 2025年

作者：张燕军张建民杨坚周树泽吴伟伟俞亮龚道清缪宏扬州大学机械工程学院宿迁学院江苏省家禽智慧养殖与智能装备工程研究中心扬州大学江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学动物科学与技术学院

为研究不同生物电阻抗检测条件的猪肉组织阻抗响应特性规律,以猪肉为对象进行研究,采用不同的激励电流幅值和激励信号频率进行阻抗测量试验,对激励电流幅值大小及激励信号频率进行选择,确定猪肉阻抗测量条件,并建立脂肪含量的预测模型... 详细信息

为研究不同生物电阻抗检测条件的猪肉组织阻抗响应特性规律,以猪肉为对象进行研究,采用不同的激励电流幅值和激励信号频率进行阻抗测量试验,对激励电流幅值大小及激励信号频率进行选择,确定猪肉阻抗测量条件,并建立脂肪含量的预测模型。结果表明:在1、3、5 mA 3种激励电流幅值中,幅值较强的激励电流得到的猪肉组织阻抗响应的稳定性更好;在0～400 kHz的频率区间内,随着激励信号频率的增加阻抗响应的稳定性呈现先减小后增大的变化趋势。当激励电流幅值为5 mA、激励信号的频率为50 kHz时,可得到稳定性较好的猪肉阻抗信息,阻抗值和相位角与脂肪含量显著相关(P<0.01)。综上,利用生物电阻抗技术可对猪肉组织的脂肪含量进行准确测量,可用于猪肉的脂肪含量预测,为智能化体成分检测提供技术支撑。

关键词：猪肉组织阻抗测量检测条件脂肪含量预测模型

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鸡gga-miR-31-5p启动子真核表达载体的构建及其转录因子结合位点预测

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浙江农业学报 2022年第4期34卷 713-719页

作者：邓哲宇王乙婷王颖洁胡菜吴宇慧赵宗仪左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。... 详细信息

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性。利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点。结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体。体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点。研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡 gga-miR-31-5p 启动子转录因子

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不同稀释液对湖羊精液低温保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2022年第12期58卷 183-188页

作者：康言王彦虎张柳明王健吴希李拥军孙晓梅扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为研究低温环境下不同稀释液对湖羊精液保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集精液样本,经品质检查筛选出合格精液,分别用A、B、C、D、E 5种低温保存稀释液按1:10的比例进行稀释,保存在4℃环境条件下,每隔12 h检测分析精子活率、活力... 详细信息

为研究低温环境下不同稀释液对湖羊精液保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集精液样本,经品质检查筛选出合格精液,分别用A、B、C、D、E 5种低温保存稀释液按1:10的比例进行稀释,保存在4℃环境条件下,每隔12 h检测分析精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)和路径速率(VAP)等指标。结果表明:精液经稀释液C(果糖-柠檬酸钠-卵黄)低温保存后的各项指标下降最为缓慢;自保存12 h开始,稀释液C的精子质膜完整率高于其他各组(P<0.05);在保存24~36 h时,稀释液B、C、D的VCL和VAP均高于其他2组(P<0.05);保存60~72 h时,稀释液B、C和D的顶体完整率高于其他2组(P<0.05);随着时间的推移,C组稀释液的优势逐渐明显,当保存60~120 h时,稀释液C的精子活率和精子活力高于其他4种稀释液(P<0.05)。因此,稀释液C对湖羊精液的4℃低温保存效果较好。

关键词：稀释液配方湖羊低温保存运动性能

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miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

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中国家禽 2023年第2期45卷 20-26页

作者：吴宇慧席一凡张文慧程富富胡菜赵宗仪陈欣雨李熠张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 温州肯恩大学计算机科学与技术学院浙江温州325035

试验旨在探究精原干细胞(SSCs)形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体(mi R-302d mimics);合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体(mi R-302d inhibitor)。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型(WT)和突变型载体(MT);将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞,检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示:成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体;预测结果显示Tle4为mi R-302d的潜在靶基因,且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因;双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中,与转染WT+mi R-NC组相比,转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降(P<0.05),而共转染MT+mi R-302d组的荧光素酶活性差异不显著(P>0.05),且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达,而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明,miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

关键词： miR-302d Tle4 双荧光素酶报告检测

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circRNA-13096通过miR-24-3p调控鸡卵泡颗粒细胞增殖和孕酮生成

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中国畜牧杂志 2024年第9期60卷 228-235页

作者：李德慧李涛丰源曲亮沈曼曼江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室江苏镇江212100 中国农业科学院家禽研究所江苏扬州225212 扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本研究通过敲低circRNA-13096后利用CCK8、ELISA技术检测细胞增殖和孕酮水平,利用RT-qPCR技术分析卵泡发育相关基因的表达水平变化,并利用生物信息学技术预测circRNA-13096结合的miRNA,通过RNAhybrid预测以及双荧光素酶验证circRNA-1309... 详细信息

本研究通过敲低circRNA-13096后利用CCK8、ELISA技术检测细胞增殖和孕酮水平,利用RT-qPCR技术分析卵泡发育相关基因的表达水平变化,并利用生物信息学技术预测circRNA-13096结合的miRNA,通过RNAhybrid预测以及双荧光素酶验证circRNA-13096与miR-24-3p结合位点;利用KOBAS网站分析miR-24-3p靶基因及富集的信号通路。结果显示:敲低circRNA-13096后促进了颗粒细胞增殖和孕酮分泌(P<0.05);STAR和CYP11A1基因表达水平上升(P<0.05),而FST表达水平下降(P<0.05);双荧光素酶结果显示,野生型circRNA-13096与miR-24-3p共转染荧光素酶活性降低(P<0.05);miR-24-3p mimic转染细胞可促进孕酮水平提高(P<0.05),通过miRDB和targetScan预测miR-24-3p靶基因,共预测到87个交集靶基因,富集在多个重要生物过程中,其中最显著的信号通路是MAPK信号通路(P<0.05)。由此可见,circRNA-13096在颗粒细胞中通过与miR-24-3p结合后发挥调控鸡卵泡颗粒细胞的增殖和孕酮分泌。

关键词：鸡环状RNA 颗粒细胞 miR-24-3p 卵泡

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如皋黄鸡miR-1458与TBX6靶向关系验证

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中国家禽 2023年第8期45卷 31-37页

作者：耿晴晴程富富胡菜武嵘峰吴宇慧赵宗仪赵梓多张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

研究旨在探究miR-1458与TBX6的靶向调控关系。试验基于前期建立视黄酸(Retinoic acid,RA)体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化模型,通过RNA-seq测序结果发现ESCs向SSCs分化过程中差异表达的miR-1458,采用miRNA定量检测miR... 详细信息

研究旨在探究miR-1458与TBX6的靶向调控关系。试验基于前期建立视黄酸(Retinoic acid,RA)体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化模型,通过RNA-seq测序结果发现ESCs向SSCs分化过程中差异表达的miR-1458,采用miRNA定量检测miR-1458在ESCs/SSCs中的表达量,miR-1458靶基因富集通路分析筛选出富集通路,分析其与生殖细胞发育的相关性。基于前期联合分析RA诱导ESCs的mRNA-seq数据中|log2(fold change)|>8筛选出的与miR-1458互作的差异性mRNA,依据靶基因预测软件数据库在线预测该基因与miR-1458是否存在结合位点,利用qRT-PCR验证两者的关系,同时利用同源重组法将靶基因的3′UTR及点突变序列插入pMIR-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,共转染DF-1细胞,通过双荧光素酶报告载体确定miR-1458与TBX6的靶向调控关系。结果显示:ESCs向SSCs分化过程中差异表达miR-1458,miR-1458在生殖细胞分化过程中发挥重要作用;miR-1458与TBX63′UTR存在结合位点;miR-1458和TBX6分别在ESCs和SSCs中呈现此消彼长的表达趋势;miR-1458能够抑制TBX6的表达;miR-1458可靶向TBX63′UTR区调节TBX6的表达。研究表明miR-1458在鸡的ESCs和SSCs中呈现差异性高表达,并且miR-1458能够直接靶向调控TBX63′UTR区从而调节TBX6的表达,为后续研究miR-1458在SSCs形成过程中的机制探究奠定基础。

关键词：如皋黄鸡 miR-1458 TBX6 SSCs 双荧光素酶报告检测

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褪黑素体内缓解急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟的研究

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中国兽医科学 2024年第11期54卷 1554-1559页

作者：张天颖牛浩原瞿静雯李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院江苏省妇幼保健院江苏南京210029

为探究注射褪黑素对急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以6~8周龄体况相近的ICR小鼠卵母细胞为研究对象,腹腔注射不同剂量的褪黑素(20、30、40 mg/kg体重),以第一极体排出作为卵母细胞成熟的标志,筛选出褪黑素适宜注射剂量继续进行... 详细信息

为探究注射褪黑素对急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以6~8周龄体况相近的ICR小鼠卵母细胞为研究对象,腹腔注射不同剂量的褪黑素(20、30、40 mg/kg体重),以第一极体排出作为卵母细胞成熟的标志,筛选出褪黑素适宜注射剂量继续进行后续试验。通过活性氧水平、ATP含量、线粒体分布以及细胞凋亡检测,分析注射褪黑素对急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟的影响。结果显示,腹腔注射40 mg/kg的褪黑素可显著降低卵母细胞内活性氧水平、卵母细胞线粒体异常分布比率以及早期卵母细胞凋亡率,显著提高卵母细胞第一极体排出率及ATP含量。结果表明,腹腔注射40 mg/kg褪黑素可以提高急性铅中毒小鼠卵母细胞体外成熟的效果。

关键词：卵母细胞体外成熟褪黑素急性铅中毒小鼠

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LncRNA PGCT8正向调控鸡原始生殖细胞形成

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中国家禽 2023年第1期45卷 16-22页

作者：刘广政丁颖邹艺琛高嘉晨徐显帅左其生李碧春扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 扬州大学农业与农产品安全教育部联合国际研究实验室江苏扬州225009

研究旨在对前期测序筛选到的关键LncPGCT8对鸡原始生殖细胞(PGCs)形成的影响进行深入探究。试验通过qRT-PCR和组织表达谱分析LncPGCT8在鸡PGCs和生殖嵴中的表达量。在体内外过表达/干扰LncPGCT8,通过qRT-PCR、流式细胞术、间接免疫荧光... 详细信息

研究旨在对前期测序筛选到的关键LncPGCT8对鸡原始生殖细胞(PGCs)形成的影响进行深入探究。试验通过qRT-PCR和组织表达谱分析LncPGCT8在鸡PGCs和生殖嵴中的表达量。在体内外过表达/干扰LncPGCT8,通过qRT-PCR、流式细胞术、间接免疫荧光和免疫组织化学染色检测体内外PGC形成效率。结果显示:LncPGCT8在鸡PGCs和性腺中均显著高表达(P<0.05),过表达LncPGCT8组PGCs形成效率显著高于对照组(P<0.05),干扰LncPGCT8则会显著降低PGCs形成数量(P<0.05)。结果表明LncPGCT8在体内/外均促进鸡PGCs形成,为提高体外诱导PGCs效率奠定理论基础。

关键词：鸡 LncPGCT8 原始生殖细胞

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鸭circ＿MBNL1在脂肪细胞分化过程中的功能预测

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农业生物技术学报 2023年第10期31卷 2140-2149页

作者：张傲王来娣杨婷江勇王志秀陈国宏白皓常国斌江苏省动物遗传育种与分子设计重点实验室/扬州大学动物科学与技术学院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室/扬州大学农业科技发展研究院

环状RNA (circular RNAs, circRNAs)是一种新型内源性非编码RNA，在各种组织中均有表达。本研究以樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domesticus)胚原代细胞分化过程中circRNA测序结果为基础，针对由肌肉盲样剪接调节因子1 (musblind-like 1,... 详细信息

环状RNA (circular RNAs, circRNAs)是一种新型内源性非编码RNA，在各种组织中均有表达。本研究以樱桃谷鸭(Anas platyrhynchos domesticus)胚原代细胞分化过程中circRNA测序结果为基础，针对由肌肉盲样剪接调节因子1 (musblind-like 1, MBNL1)基因编码的circ＿MBNL1进行鉴定与功能分析。通过PCR扩增和焦磷酸测序技术获得接合序列，采用核质分离消化实验验证了鸭circ＿MBNL1主要定位在细胞核中。组织表达谱结果提示，circ＿MBNL1主要在鸭脾脏、脂肪和肺组织中表达。生物信息学分析结果表明，circ＿MBNL1与预测的靶基因主要富集在脂肪细胞因子信号通路、FoxO信号等通路，推测circ＿MBNL1可能参与调控鸭脂肪细胞的分化过程。本研究为深入探究circ＿MBNL1在鸭脂肪细胞分化过程中的调控作用提供了理论基础。

关键词：鸭肌肉盲样剪接调节因子1 (MBNL1) 脂肪细胞功能预测

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