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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：张惠子刘然云皓琪陈阳黄正洋张扬徐琪陈国宏顾国庆扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏经贸职业技术学院南京210007

本研究旨在探明miRNA-34 基因家族(miRNA-34s)系统进化历程及其在鹅生殖周期内的表达变化规律.通过文献和miRBase 检索脊椎动物的miRNA-34s 序列，利用Ensembl 数据库信息，确定了miRNA-34s 在基因组中的位置，采用MEGA 6.0 构建了miRNA... 详细信息

本研究旨在探明miRNA-34 基因家族(miRNA-34s)系统进化历程及其在鹅生殖周期内的表达变化规律.通过文献和miRBase 检索脊椎动物的miRNA-34s 序列，利用Ensembl 数据库信息，确定了miRNA-34s 在基因组中的位置，采用MEGA 6.0 构建了miRNA-34s 的系统进化树;并利用RT-qPCR 检测了鹅卵巢组织miRNA-34s 在生殖周期内的表达变化.

关键词：鹅 miRNA-34 进化定量表达

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桑叶粉对新西兰白兔生长性能及血清生化指标的影响

桑叶粉对新西兰白兔生长性能及血清生化指标的影响

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：闫晓荣赵博昊郝晔朱杰陈阳潘雨来朱慈根吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州 225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州 225009 江苏省金陵种兔场江苏江宁 210041

试验旨在研究桑叶粉对新西兰白兔生长性能及血清生化指标的影响.选用120 只35 d 断奶的新西兰白兔，随机分为4 个处理组，每个处理3 个重复，每个重复10 只;桑叶粉的添加水平为0％(对照组)、15％(试验Ⅰ 组)、20％(试验Ⅱ 组)、25％(试... 详细信息

试验旨在研究桑叶粉对新西兰白兔生长性能及血清生化指标的影响.选用120 只35 d 断奶的新西兰白兔，随机分为4 个处理组，每个处理3 个重复，每个重复10 只;桑叶粉的添加水平为0％(对照组)、15％(试验Ⅰ 组)、20％(试验Ⅱ 组)、25％(试验Ⅲ 组)，试验期为35 d.结果显示：(1)试验Ⅰ组日增重和70 日龄体重极显著高于对照组(P＜0.01)，料重比极显著低于对照组(P＜0.01)，整个试验期采食量差异不显著(P＞0.05).

关键词：桑叶粉新西兰白兔生长性能血液生化指标

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京海黄鸡杂交配套系亲本两种球虫疫苗免疫效果的比较

京海黄鸡杂交配套系亲本两种球虫疫苗免疫效果的比较

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江苏省畜牧兽医学会成立60周年庆典暨2015年学术年会

作者：林雨鑫孙明明戴国俊张菁菁张跟喜谢恺舟王金玉宋野王永娟扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州 225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州 225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州 225009 江苏京海禽业集团有限公司江苏海门 226103

为评价两种球虫疫苗对京海黄鸡杂交配套系亲本BB 鸡和FF 鸡的免疫效果.本研究对9 日龄试验鸡接种两种疫苗[500 个孢子化卵囊(V1 组)与正典球虫苗(V2 组)],24 d 后攻柔嫩艾美耳球虫(***)2.5 万个/只,攻虫后8 d 检测各项评价指标.

关键词： BB鸡 FF鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗

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不同獭兔群体Tyrp1基因外显子多态性分析

不同獭兔群体Tyrp1基因外显子多态性分析

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：郝晔施丽娟闫晓荣赵博昊朱杰陈阳翁巧琴吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室浙江省余姚市欣农兔业有限公司

Tyrp1基因是第一个克隆成功的色素基因,该基因编码的5,6-二羟基吲哚羧酸氧化酶,是酪氨酸酶重要的协同因子,在黑色素的形成中具有十分重要的作用。本课题组在前期獭兔青紫蓝毛色候选基因筛选实验中,获得了关键差异表达基因Tyrp1,并发现... 详细信息

Tyrp1基因是第一个克隆成功的色素基因,该基因编码的5,6-二羟基吲哚羧酸氧化酶,是酪氨酸酶重要的协同因子,在黑色素的形成中具有十分重要的作用。本课题组在前期獭兔青紫蓝毛色候选基因筛选实验中,获得了关键差异表达基因Tyrp1,并发现其存在SNPs位点,为验证前期转录组SNPs检测结果,开展了不同獭兔群体Tyrp1基因外显子多态性检验,分析獭兔Tyrp1基因多态性,确定其等位基因数、核苷酸多态位点以及氨基酸多态位点等,以期为研究獭兔毛色形成机制提供分子生物学基础。本试验随机抽取同批出生、健康的6月龄青紫蓝色獭兔420只、白色獭兔180只,共计600只獭兔作为试验对象,利用PCR-SSCP结合生物信息学分析,检测Tyrp1基因7个外显子的序列多态性。结果表明:（1）Tyrp1基因全长20595 bp,有7个外显子和6个内含子,编码序列由1614个碱基组成,编码537个氨基酸残基。（2）在Tyrp1基因外显子1、3、4、5、6、7中没有检测到多态位点,仅Tyrp1基因外显子2在29bp（整个基因CDS的483bp）处有一个C>T的无义突变,碱基的突变并没有造成氨基酸的改变（AUC>AUT,异亮氨酸）,是一个较为保守的基因。（3）在青紫蓝色獭兔和白色獭兔群体中,外显子2有2种基因、3种基因型,BB基因型频率在青紫蓝色獭兔群体中较高,在白色獭兔群体中较低,表明等位基因B是青紫蓝色獭兔群体中的优势等位基因,而在白色獭兔群体中等位基因A是优势等位基因。HardyWeinberg平衡检验表明,青紫蓝色獭兔群体处于非平衡状态,白色獭兔群体处于平衡状态。青紫蓝兔群体为中度多态信息含量（0.25

关键词：青紫蓝色獭兔白色獭兔 Tyrp1基因 SNPs

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獭兔Tyr基因外显子2、3突变对蛋白结构和功能的影响

獭兔Tyr基因外显子2、3突变对蛋白结构和功能的影响

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：赵博吴施丽娟闫晓荣郝晔朱杰陈阳翁巧琴吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室浙江省余姚市欣农兔业有限公司

Tyr基因编码的酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是黑色素形成过程中的限速酶,在黑色素合成的过程中催化特定反应。家兔的Tyr基因位于1号染色体上,全长135510 bp,有5个外显子和4个内含子。本试验随机抽取同批出生、健康的6月龄青紫蓝色獭兔420... 详细信息

Tyr基因编码的酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是黑色素形成过程中的限速酶,在黑色素合成的过程中催化特定反应。家兔的Tyr基因位于1号染色体上,全长135510 bp,有5个外显子和4个内含子。本试验随机抽取同批出生、健康的6月龄青紫蓝色獭兔420只、白色獭兔180只,共计600只獭兔作为试验对象,采用PCR-SSCP技术,检测兔Tyr基因的5个外显子,根据不同基因型,通过直接测序法检测该基因的SNPs位点和碱基突变类型,并运用生物信息学方法预测并比较分析野生型和突变型蛋白的理化性质和结构。结果表明:(1)在青紫蓝色獭兔和白色獭兔群体中,Tyr基因外显子1、4和5均没有检测到突变位点。(2)在外显子2中,存在A881G的突变,导致编码的谷氨酸变成了甘氨酸;白色和青紫蓝色獭兔外显子2基因型和基因型频率经卡方适合性检验,B1B1基因型频率在青紫蓝色獭兔中较高,在白色獭兔中较低,表明等位基因B1是青紫蓝色獭兔群体中的优势等位基因,而在白色獭兔中等位基因A1是优势等位基因;Hardy-Weinberg平衡检验表明,两个群体均处于非平衡状态;青紫蓝色獭兔群体为中度多态信息含量(0.25

关键词： Tyr基因外显子2 外显子3 蛋白质结构

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徐淮山羊c-Myc基因启动子的克隆及其功能的初步分析

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畜牧兽医学报 2014年第4期45卷 533-540页

作者：韦光辉左其生李东张亚妮刘志永朱睿邱峰龙李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

本研究旨在确定徐淮山羊c-Myc基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨c-Myc基因的表达调控机制。根据UCSC基因组数据库已公布的绵羊c-Myc基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增c-Myc基因的一系列启动子缺失片段,定向... 详细信息

本研究旨在确定徐淮山羊c-Myc基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨c-Myc基因的表达调控机制。根据UCSC基因组数据库已公布的绵羊c-Myc基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增c-Myc基因的一系列启动子缺失片段,定向克隆至pEGFP-N1和PGL3-c-Myc,分别转染gFF、COS7及P19细胞,并进行TSA和NFAT1诱导,同时对-402^-249bp区域的转录因子SP1结合位点进行定点突变,最后进行双荧光报告基因活性检测。结果表明,徐淮山羊c-Myc基因5′侧翼区-1 334^+1bp区域的启动子活性最强,-402^+1bp区域为c-Myc基因启动子基本活性区域。进一步研究发现,-1 334^-971bp、-587^-147bp区域存在正调控元件,-1 976^-1 334bp、-971^-587bp区域存在负调控元件。TSA和NFAT1均能增强cMyc启动子的活性,SP1结合位点定点突变后,启动子活性降低。本试验通过构建包含c-Myc基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性,确定了c-Myc基因启动子的核心区域,发现转录因子SP1是c-Myc基因启动子核心区域的调控元件,为进一步研究c-Myc基因的表达调控机制奠定了基础。

关键词： c-Myc基因启动子 TSA NFAT1 SP1 定点突变活性分析

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利用高通量测序技术筛选獭兔毛色相关基因的研究

利用高通量测序技术筛选獭兔毛色相关基因的研究

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中国畜牧兽医学会养兔学分会成立大会暨第一届学术交流大会

作者：赵博昊陈阳闫晓荣郝晔朱杰翁巧琴吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室浙江省余姚市欣农兔业有限公司

为了研究獭兔毛色相关基因,选取3只20日龄全同胞青紫蓝獭兔个体分别取其背部和腹部皮肤。抽提并纯化样品总RNA,对纯化后的总RNA进行mRNA的分离或rRNA去除、片段化、第一链cDNA合成、第二链cDNA合成、末端修复、3'末端加A、连接接头... 详细信息

为了研究獭兔毛色相关基因,选取3只20日龄全同胞青紫蓝獭兔个体分别取其背部和腹部皮肤。抽提并纯化样品总RNA,对纯化后的总RNA进行mRNA的分离或rRNA去除、片段化、第一链cDNA合成、第二链cDNA合成、末端修复、3'末端加A、连接接头、富集等步骤,完成测序样本文库构建。样本文库在Illummina HiSeq 2500测序仪配套的cBot上完成Cluster生成和第一向测序引物杂交,将携有cluster的flow cell上机通过Illumina测序平台进行转录组分析。应用cufflinks中的Cuffdiff将基因表达定量归一化得到的FPKM值进行样本间差异基因分析。采用FoldChange(表达差异倍数)以及Fisher-test精确检验统计学方法对差异基因差异程度进行筛选。基于测序所得到差异表达基因的序列,与数据库(NCBI、Ensemble、GO、KEGG)中的各个条目映射,计算每个条目的基因数目,然后应用超几何检验,与整个基因组背景相比,筛选在差异表达基因中显著富集的GO条目以及KEGG通路,利用生物信息学对所得到的GO条目与KEGG通路进行分析,并通过实时荧光定量PCR方法对部分差异显著基因进行验证。结果显示,转录组分析共筛选出17327个差异基因,其中包括上调基因8445个,下调基因8882个,在这些差异基因当中,包含与毛色形成的相关基因,例如TYR、TYRP1、ASIP、WNT2和CREB1等,这些毛色相关基因都与酪氨酸及黑色素形成密切联系。GO分类(生物学过程、分子功能和细胞组分)表明,差异基因的表达主要集中在离子活动、形态发生、生命调节、细胞活动、代谢过程、氧化还原、脂代谢分解、酶活性等。KEGG通路分析显示,差异基因主要参与Wnt信号通路、糖酵解通路、离子信号通路、氨基酸合成与代谢途径、激素调控通路等,其中Wnt信号通路与毛色形成存在联系,通路中的上游基因如SFRP2、CTNNB1等对下游黑色素的相关形成密切相关,对毛囊生长发育存在影响从而对毛色起到调控作用,另外,氨基酸合成与代谢途径通过调控毛色相关氨基酸对毛色形成造成了影响。荧光定量PCR结果与转录组分析结果基本吻合,说明转录组分析结果可靠。综上所述,转录组中的TYR、TYRP1、ASIP、WNT2和CREB1等基因与毛色形成相关,SFRP2和CTNNB1等基因与黑色素形成以及毛囊的生长发育相关,对毛色形成有影响,Wnt信号通路、糖酵解通路、离子信号通路、氨基酸合成与代谢途径、激素调控等通路也可能对毛色形成存在影响。

关键词：獭兔毛色转录组

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不同培养系统对鸡精原干细胞体外增殖作用的比较

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农业生物技术学报 2014年第6期22卷 736-743页

作者：施青青左其生李东张蕾黄晓梅张振韬张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室

本研究比较了层粘连蛋白(laminin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、胶原蛋白(collagen)以及睾丸支持细胞(sertoli cell)4种不同培养系统对鸡(Gallus gallus)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外增殖的作用效果。采用三酶两步消化法分离SSCs,细胞经明胶差速纯化后培养,将传至3代的SSCs重新接种于层粘连蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白包被的培养皿中以及睾丸支持细胞制备的饲养层上,通过形态学、5-乙基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)细胞增殖、qRT-PCR技术检测不同培养系统对鸡精原干细胞体外增殖的作用效果。结果表明,鸡SSCs的碱性磷酸酶(AKP)阳性克隆数在睾丸支持细胞组最高,达到每视野(32±3)个,层粘连蛋白组、纤维连接蛋白组和胶原蛋白组分别为(26±3)、(24±2)和(23±2)个,三组差异不显著(P>0.05);EDU检测睾丸支持细胞组细胞增殖率为(92.82±2.15)%,显著高于三组基质蛋白组(P<0.01);qRT-PCR结果显示,增殖标记基因原癌基因(myconcogene,c-myc)、Kruppel样因子4(kruppel-like factor 4,Klf4)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在睾丸支持细胞组的表达量最高,其次为层粘连蛋白组,c-myc和Klf4在纤维连接蛋白组中的表达要高于胶原蛋白组,PCNA则相反。实验结果表明:三组基质蛋白及睾丸支持细胞都能够促进鸡SSCs的体外增殖,其中睾丸支持细胞作用最佳,其次为层粘连蛋白,纤维连接蛋白和胶原蛋白两者作用效果差异不显著。该结果为进一步优化鸡胚SSCs的体外培养体系,阐明生殖细胞增殖机制提供了实验基础和理论支撑。

关键词：胶原蛋白纤维连接蛋白层粘连蛋白睾丸支持细胞鸡精原干细胞

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幼龄新西兰兔不同成熟阶段卵母细胞体外BMP-15、FSHR基因表达

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中国兽医学报 2014年第12期34卷 2035-2041页

作者：李拥军张光景李太坤张佳慧杨波蔡缪荧扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

从不同成熟阶段的卵母细胞中提取总RNA,反转录后进行PCR扩增,获得BMP-15和FSHR基因条带,进行基因克隆筛选并测序,测序结果表明,目的基因片段序列完全为公布的基因序列且无突变。采用实时荧光定量PCR技术,检测了幼龄兔卵母细胞成熟过程中... 详细信息

从不同成熟阶段的卵母细胞中提取总RNA,反转录后进行PCR扩增,获得BMP-15和FSHR基因条带,进行基因克隆筛选并测序,测序结果表明,目的基因片段序列完全为公布的基因序列且无突变。采用实时荧光定量PCR技术,检测了幼龄兔卵母细胞成熟过程中BMP-15基因、FSHR基因的相对表达丰度。结果显示:BMP-15mRNA在培养初期未成熟卵母细胞中表达水平较低,随着培养时间的推移,其表达量逐渐升高,在培养12h时出现表达量的峰值,并且此后一直维持较高的表达量,直至24h,随后下降;FSHR mRNA在未成熟卵母细胞中有较高表达,其中0、6h表达量较高,随着培养时间的延长,卵母细胞的FSHR mRNA相对表达量呈递减趋势。

关键词：新西兰兔卵母细胞体外成熟 BMP-15基因 FSHR基因

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梅山猪氨肽酶基因N(pAPN)cDNA克隆、序列分析及重要变异位点的筛选

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农业生物技术学报 2014年第9期22卷 1141-1148页

作者：刘颖董文华孙寿永吴正常夏芃芃朱国强包文斌吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学兽医学院

氨肽酶N（aminopeptidase N,APN）蛋白是猪（Sus scrofa）传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）和猪的流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）等一系列冠状病毒的受体蛋白。为探讨梅山猪APN基因的分子结构特征以及重要的变异位点,本研究通过PCR扩增和测序技术,结合生物信息学分析梅山猪APN基因功能区域和重要变异位点,对其蛋白质结构进行预测和分析。结果表明,梅山猪APN基因cDNA全长2 886 bp（GenBank登录号:KF280271）,含有20个外显子,编码961个氨基酸。与GenBank数据库公布的标准序列（登录号:NM;14277.1）相比,梅山猪APN基因编码区变异共引起10处氨基酸突变与2处氨基酸缺失,其中Phe82Asn、Leu107Phe、Leu108 Ile、Ser330Pro、Trp399Arg和Glu465 Gly等6处突变位于APN酶催化活性区域,Gln747His突变、748Tyr和749Ser缺失突变位于APN病毒结合区域。蛋白结构和编码产物功能分析发现,pAPN为不稳定的亲水性蛋白,无信号肽,具有1个跨膜螺旋(跨膜区位于12;4氨基酸,二级结构元件以α螺旋和β折叠为主,编码产物主要参与细胞被膜（cell envelope）、中央中间代谢（central intermediary metabolism）、辅酶因子生物合成（biosynthesis of cofactors）等功能。Gln747His、748Tyr和749Ser缺失突变可能与氨肽酶N结合病毒能力有关。本研究对梅山猪pAPN基因功能的分析及变异位点的筛选,为今后筛选猪抗病毒性腹泻的有效遗传标记提供理论基础。

关键词：猪流行性腹泻氨肽酶N基因(APN) 变异位点

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