检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2017年第11期48卷 2034-2045页

作者：孙丽宗秋芳吴森吴嘉韵吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

旨在细胞水平上进一步探讨FUT2基因的功能及其在猪小肠上皮细胞受到F18大肠杆菌(Escherichia coli,***)侵染时的调控机制,为提高仔猪对F18大肠杆菌病抵抗力的分子选育提供理论基础。运用Real-time PCR方法检测分析FUT2基因在大肠杆菌F1... 详细信息

旨在细胞水平上进一步探讨FUT2基因的功能及其在猪小肠上皮细胞受到F18大肠杆菌(Escherichia coli,***)侵染时的调控机制,为提高仔猪对F18大肠杆菌病抵抗力的分子选育提供理论基础。运用Real-time PCR方法检测分析FUT2基因在大肠杆菌F18ab、F18ac感染和脂多糖(LPS)诱导小肠上皮细胞前后的mRNA表达差异,并采用Western blotting方法检测大肠杆菌F18ab、F18ac感染小肠上皮细胞前后FUT2的蛋白表达差异;同时设计并构建猪FUT2基因慢病毒干扰载体,筛选并获得FUT2基因稳定沉默的小肠上皮细胞系,检测FUT2基因沉默对其所在球系列鞘糖脂生物合成通路其他关键基因(FUT1、ST3GAL1、HEXA、HEXB、B3GALNT1、NAGA)表达以及小肠上皮细胞*** F18黏附能力的影响。结果表明,在F18大肠杆菌感染和LPS诱导小肠上皮细胞后,FUT2基因的mRNA相对表达水平均极显著升高(P<0.01),同时大肠杆菌感染后小肠上皮细胞的FUT2蛋白表达上升。此外,本研究成功构建FUT2基因慢病毒干扰载体,并获得FUT2基因稳定沉默的小肠上皮细胞系;FUT2基因沉默后,其所在的球系列鞘糖脂生物合成通路其他关键基因的表达都存在不同程度的下降,其中FUT1基因表达水平显著下调(P<0.05),ST3GAL1、HEXA和HEXB基因表达水平极显著下调(P<0.01),而B3GALNT1和NAGA基因表达水平未发生显著变化,同时FUT2基因沉默后F18大肠杆菌对小肠上皮细胞的黏附能力显著降低。结果显示,FUT2基因低表达可能不利于仔猪大肠杆菌受体的形成,以增强猪小肠上皮细胞抵抗*** F18感染的能力,本试验结果同时为球系列鞘糖脂生物合成通路在仔猪抗大肠杆菌感染过程中的作用机制研究提供一定的理论基础和依据。

关键词：猪 FUT2基因 RNAi 大肠杆菌球系列鞘糖脂生物合成通路

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大肠杆菌刺激猪肠上皮细胞后Nramp1基因的表达变化分析

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中国畜牧杂志 2017年第6期53卷 40-43页

作者：戴超辉吴嘉韵孙丽吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心江苏扬州225009

猪天然抗性相关巨噬细胞蛋白基因1(Naturalresistance-associated Marophage Protein 1,Nramp1)作为影响抗病力的重要候选基因之一,在机体的免疫过程中发挥着重要的调控作用。为了在细胞水平上探讨Nramp1基因与引起仔猪腹泻的致病性大... 详细信息

猪天然抗性相关巨噬细胞蛋白基因1(Naturalresistance-associated Marophage Protein 1,Nramp1)作为影响抗病力的重要候选基因之一,在机体的免疫过程中发挥着重要的调控作用。为了在细胞水平上探讨Nramp1基因与引起仔猪腹泻的致病性大肠杆菌的关系及其在大肠杆菌感染过程中发挥的免疫调控作用,本研究利用F18ab、F18ac和K88ac等3种致病性大肠杆菌刺激体外培养的猪肠上皮细胞IPEC-J2,并利用实时荧光定量PCR检测3种菌体刺激IPEC-J2后Nramp1基因的表达变化情况。结果表明:F18ab、F18ac和K88ac 3种大肠杆菌刺激IPEC-J2后,Nramp1基因的表达均发生极显著(P<0.01)上调,差异倍数分别为10、8、11倍,且F18ab和K88ac 2种菌体刺激后Nramp1基因的表达上调程度均极显著高于F18ac。本研究结果提示,Nramp1基因的表达与大肠杆菌的侵染有很大的相关性,其在大肠杆菌侵袭猪肠道中发挥了重要的免疫调控作用。本研究在细胞水平分析探讨了Nramp1基因的表达与3种致病性大肠杆菌侵袭的关系,为Nramp1基因在大肠杆菌侵染机体的过程中发挥的免疫调控作用研究提供了参考依据。

关键词：猪大肠杆菌 Nramp1基因抗病育种

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产肠毒素性大肠杆菌侵染猪肠上皮细胞后DLG5基因的表达变化分析

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江苏农业科学 2017年第9期45卷 127-129页

作者：吴嘉韵吴森戴超辉吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心江苏扬州225009

为了揭示DLG5基因在机体抵抗大肠杆菌刺激过程中发挥的功能,本试验利用产肠毒素性大肠杆菌(F18ab、F18ac和K88ac)侵染猪肠上皮细胞系(IPEC-J2)模拟个体的致病过程,用实时荧光定量检测DLG5基因在感染前后的表达变化情况,在细胞水平上探讨... 详细信息

为了揭示DLG5基因在机体抵抗大肠杆菌刺激过程中发挥的功能,本试验利用产肠毒素性大肠杆菌(F18ab、F18ac和K88ac)侵染猪肠上皮细胞系(IPEC-J2)模拟个体的致病过程,用实时荧光定量检测DLG5基因在感染前后的表达变化情况,在细胞水平上探讨DLG5基因表达水平与产肠毒素性大肠杆菌抗性的关系。结果表明,3种大肠杆菌的菌清和菌体刺激IPEC-J2后,DLG5基因表达水平均发生显著或极显著上调;并且由F18ab和K88ac这2种菌体刺激后DLG5基因表达水平上调的程度要极显著高于F18ac菌体刺激后的表达水平。本研究结果提示,猪DLG5基因表达和大肠杆菌的抗性具有密切关系,可能与其在一定程度上能够促进肠道屏障的结构稳定和功能发挥有关。

关键词：猪 DLG5基因产肠毒素性大肠杆菌抗病育种表达水平肠上皮细胞

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大肠杆菌侵染猪肠上皮细胞IPEC-J2后TAP1基因表达量的变化分析

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畜牧与兽医 2017年第8期49卷 53-56页

作者：吴森吴嘉韵戴超辉吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省种猪繁育和健康养殖工程技术研究中心江苏扬州225009

为了在细胞水平上探究抗原处理相关转运体1(TAP1)基因与仔猪大肠杆菌性腹泻间的关系以及在机体抗大肠杆菌侵染过程中是否发挥了作用,选用3种主要产肠毒素大肠杆菌(F18ab,F18ac和K88ac)刺激离体培养的猪肠上皮细胞(IPEC-J2),用实时荧光定... 详细信息

为了在细胞水平上探究抗原处理相关转运体1(TAP1)基因与仔猪大肠杆菌性腹泻间的关系以及在机体抗大肠杆菌侵染过程中是否发挥了作用,选用3种主要产肠毒素大肠杆菌(F18ab,F18ac和K88ac)刺激离体培养的猪肠上皮细胞(IPEC-J2),用实时荧光定量PCR检测3种大肠杆菌刺激后IPEC-J2细胞中TAP1基因表达量的变化。结果显示:IPEC-J2细胞经过3种大肠杆菌刺激后,TAP1基因在细胞中的表达量均显著高于对照组(P<0.05),差异倍数分别是对照组的1.7,1.8和1.5倍;3种不同的大肠杆菌刺激,TAP1基因在IPEC-J2细胞中的表达量不存在显著差异(P>0.05)。通过分析3种大肠杆菌侵染离体培养的猪肠上皮细胞后TAP1基因表达量的变化,在细胞水平上验证了TAP1基因的表达对仔猪抗细菌性腹泻具有一定的作用,为TAP1基因作为机体免疫调控的相关基因提供了一定的理论依据。

关键词：猪 TAP1基因大肠杆菌抗病育种

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BMPR-IB基因多态性与湖羊产羔性能的关系

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安徽农业科学 2017年第26期45卷 113-115页

作者：杨媛翁恺麒李拥军顾祝荣郭海燕扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

[目的]研究骨形态发生蛋白受体IB(Bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因多态性与湖羊产羔性能的关系。[方法]采用PCR扩增、酶切和序列测定等方法对湖羊BMPR-IB基因型进行鉴定,并分析BMPR-IB基因型与湖羊产羔数的关系。... 详细信息

[目的]研究骨形态发生蛋白受体IB(Bone morphogenetic protein receptor IB,BMPR-IB)基因多态性与湖羊产羔性能的关系。[方法]采用PCR扩增、酶切和序列测定等方法对湖羊BMPR-IB基因型进行鉴定,并分析BMPR-IB基因型与湖羊产羔数的关系。[结果]共检测出3种基因型,并将其分别定义为AA、AG、GG。测序结果表明,等位基因A与G相比发生了1处碱基突变(A746G)。BMPR-IB基因在湖羊中存在多态性(AA、AG和GG);湖羊中A等位基因的频率为0.032,G等位基因的频率为0.968。AA、AG和GG基因型频率分别为0.006、0.053和0.941。AA、AG和GG基因型湖羊的平均产羔数分别为1.25、1.81和1.96。[结论]BMPR-IB基因可能是湖羊多胎性能的主效基因,可用于对湖羊产羔数的选择。

关键词：湖羊 BMPR-IB基因产羔数

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家兔Myh7基因生物信息学分析及表达规律研究

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安徽农业科学 2017年第16期45卷 130-132页

作者：赵斌李挺赵博昊穆琳胡帅帅陈阳吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

[目的]对家兔Myh7基因进行生物信息学分析及表达规律研究。[方法]利用RT-PCR技术检测了Myh7在肌肉发育过程中的表达规律,并结合生物信息学方法对家兔Myh7的序列进行深入分析。[结果]Myh7蛋白为不稳定亲水性蛋白,有Myosin_N和MYSc_class... 详细信息

[目的]对家兔Myh7基因进行生物信息学分析及表达规律研究。[方法]利用RT-PCR技术检测了Myh7在肌肉发育过程中的表达规律,并结合生物信息学方法对家兔Myh7的序列进行深入分析。[结果]Myh7蛋白为不稳定亲水性蛋白,有Myosin_N和MYSc_class_II这2个结构区域,其中MYSc_class_II是肌球蛋白重链家族特有结构域。MEGA软件分析家兔Myh7分子进化,发现其与人、猩猩等物种间同源性较高,与其亲缘关系的远近一致。定量分析显示:在整个肌肉发育过程中,Mhy7表达量在腿肌中基本维持在较低水平,在背肌中的表达量相对波动较大,而在11周龄时出现表达量上升的趋势。[结论]该研究为进一步研究Myh7基因在肌肉生长过程中的功能奠定了分子基础,为研究家兔的肌肉发育分子机制提供了一定的参考依据。

关键词：兔肌肉 Mhy7基因生物信息学分析表达规律

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GDF9和BMP15基因多态性与京海黄鸡生长及繁殖性状的关联性分析

GDF9和BMP15基因多态性与京海黄鸡生长及繁殖性状的关联性分析

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2017中国长三角遗传学大会

作者：娄秋宏李婷婷张跟喜王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

为探讨生长分化因子-9基因(GDF9)和骨形态发生蛋白-15(BMP15)基因的多态性与京海黄鸡生长及繁殖性状的关系,本研究以江苏京海集团育种场376只京海黄鸡为材料,利用PCR-SSCP技术检测GDF9基因和BMP15基因的SNPs,并分析基因多态性与京海黄... 详细信息

为探讨生长分化因子-9基因(GDF9)和骨形态发生蛋白-15(BMP15)基因的多态性与京海黄鸡生长及繁殖性状的关系,本研究以江苏京海集团育种场376只京海黄鸡为材料,利用PCR-SSCP技术检测GDF9基因和BMP15基因的SNPs,并分析基因多态性与京海黄鸡各周龄体重和开产体重、开产日龄、开产蛋重、300日龄总产蛋数以及300日龄平均蛋重之间的关系。结果显示,GDF9基因中共检测到2个突变位点,其中,g.2053G>A位点在京海黄鸡群体中共检测到3种基因型,分别为GG、AG和AA;其中,GG基因型个体的开产体重显著高于AA型个体(P<0.05),300日龄体重极显著高于AA型个体(P<0.01);g.2420T>C位点在京海黄鸡群体中也检测到3种基因型TT、CC和CT,TT基因型个体的300日龄蛋重显著低于CT基因型个体(P<0.05)。另外,对生长性状进行关联分析发现CC基因型个体2周龄体重显著高于CT基因型个体(P<0.05)。BM P15基因中检测到4个突变位点,其中,g.474A>G位点在京海黄鸡群体中存在三种基因型,分别为:AA、GG和AG,AA基因型个体6周龄体重显著高于AG基因型个体(P<0.05)。研究结果提示,GDF9基因g.2053G>A、g.2420T>C突变位点可作为京海黄鸡繁殖性状改良的候选分子标记,而GDF9基因g.2420T>C突变位点以及BMP15基因g.474A>G突变位点可作为京海黄鸡早期生长性状改良的候选分子标记。

关键词： GDF9 BMP15 分子标记京海黄鸡生长繁殖

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鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立

鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立

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江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：赵瑞丰靳锴张晨金晶王颖洁左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州 225009

目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培养不稳定对试验准确性带来的问题. 方法：采用... 详细信息

目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培养不稳定对试验准确性带来的问题. 方法：采用口吸管法收集度过危相期的单个鸡胚成纤维细胞,传代培养形成单克隆细胞系CSC.通过稀释法克隆形成试验确立CEF单克隆最适培养体系,并比较两种方法的克隆形成效率;对单克隆细胞系的基本生物学特性进行了检测,比较摸索Fugene介导的最佳转染体系;利用Edu染色法检测CSC对胚胎干细胞的促增殖能力. 结果：经过传代培养,少数CEF度过危相期并形成连续细胞系,稀释法克隆形成实验结果表明Ham's F12培养基为CEF形成克隆的最适培养基,形成效率为25％±0.006;口吸管法分离能高效分离单细胞,单克隆形成率为32.29％±0.04,显著高于有限稀释法6.95％±0.01,传代建系后其中一株命名为CSC-1-5;CSC-1-5细胞系具有二倍体核型,无致瘤性,增殖能力稳定,且细胞周期G2/M期细胞比率显著高于***-N1转染CSC-1-5效率为51.3％±0.009较pCEF有显著提升且能促进鸡胚胎干细胞的增殖. 结论：度过危相期的CEF可通过单细胞克隆形成能稳定增殖的单克隆细胞系CSC,这种细胞系具有更高的均一度能够用于外源基因的转染和制备饲养层细胞.

关键词：鸡胚成纤维细胞单细胞克隆系均一度培养稳定性

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口吸管法制备DF-1单细胞克隆

口吸管法制备DF-1单细胞克隆

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：赵瑞丰靳锴金晶王颖洁李东左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

取对数期末的DF-1细胞,通过手工拉针连接橡皮管制备的单细胞分离装置,于倒置显微镜下收集DF-1单细胞.收集的单细胞培养于同源条件培养基中,形成单细胞克隆之后传代并建立DF-1单克隆细胞系;采用连续细胞计数绘制DF-1单克隆细胞系生长曲线... 详细信息

取对数期末的DF-1细胞,通过手工拉针连接橡皮管制备的单细胞分离装置,于倒置显微镜下收集DF-1单细胞.收集的单细胞培养于同源条件培养基中,形成单细胞克隆之后传代并建立DF-1单克隆细胞系;采用连续细胞计数绘制DF-1单克隆细胞系生长曲线;秋水仙素处理后吉姆萨染色进行染色体核型分析;软琼脂克隆法检测致瘤性.克隆形成试验结果表明:条件培养基组单细胞克隆形成率为2.93％±0.23与普通培养基组的0.07％±1.65相比有极显著提高(P＜0.01);口吸管分离形成克隆效率为3.6％,与平板克隆实验结果没有差异.DF-1单克隆细胞系生长曲线为倒S型,能正常增殖;染色体核型分析显示DF-1单克隆细胞系核型为正常的鸡二倍体核型;软琼脂克隆检测表明没有出现可见克隆.口吸管法成功制备了DF-1单克隆细胞系,条件培养体系对单个DF-1细胞增殖有明显的促进作用,且DF-1单克隆细胞系具有正常的增殖能力和二倍体核型,不具有致瘤性.

关键词： DF-1单克隆细胞系口吸管法条件培养基染色体核型分析

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亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔血液生化指标的影响

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中国养兔 2017年第5期 4-6,15页

作者：朱杰郝晔赵博昊胡帅帅赵斌穆琳陈阳潘雨来朱慈根胡春晖吴信生扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏省金陵种兔场南京211103

为研究亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔血液生化指标的影响,选用35日龄同期断奶新西兰白兔300只,公母各半,分为5个处理组,每个处理3个重复,每个重复20只,分别是BMD高剂量组(H,100mg/kg)、中剂量组(M,50mg/kg)、低剂量组(L,25mg/kg)、杆菌... 详细信息

为研究亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔血液生化指标的影响,选用35日龄同期断奶新西兰白兔300只,公母各半,分为5个处理组,每个处理3个重复,每个重复20只,分别是BMD高剂量组(H,100mg/kg)、中剂量组(M,50mg/kg)、低剂量组(L,25mg/kg)、杆菌肽锌对照组(BZ,50mg/kg)、空白对照组(C,无添加),每个重复随机抽取6只,测定血液生化指标。结果发现各剂量组血清总蛋白(TP)和葡萄糖(GLU)高于空白对照组,其中高剂量组和中剂量组显著高于空白组(P<0.05),高剂量组碱性磷酸酶(ALP)和尿素氮(UN)显著低于空白组(P<0.05);剂量组Ig G显著高于空白组(P<0.05),剂量组IgM与空白对照组差异不显著(P>0.05);高剂量组、中剂量组和杆菌肽锌组TNF-α、IL-2和IL-6均显著高于空白组(P<0.05)。结果表明亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔的免疫功能起到促进作用,且中剂量组的添加剂量(50mg/kg)效果最好。

关键词：亚甲基水杨酸杆菌肽免疫功能断奶仔兔

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