检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2013年第1期44卷 78-86页

作者：傅德智张亚妮陈昊李伟郑蒙蒙王丹张振韬施青青李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 苏州大学第一附属医院苏州215006

拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因... 详细信息

拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。

关键词： NA Mx 双基因表达载体抗病毒活性抗NDV

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猪脂多糖结合蛋白基因(LBP)的密码子偏好性分析

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农业生物技术学报 2013年第10期21卷 1135-1144页

作者：吴正常王靖赵乔辉朱世平訾臣吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心

脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP)是机体识别革兰氏阴性菌内毒素并启动免疫反应的关键因子。为了了解LBP基因的密码子使用特性,为其选择合适的受体动物以及最佳外源表达系统提供依据,本研究运用CHIPS、CUSP和Cod... 详细信息

脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein,LBP)是机体识别革兰氏阴性菌内毒素并启动免疫反应的关键因子。为了了解LBP基因的密码子使用特性,为其选择合适的受体动物以及最佳外源表达系统提供依据,本研究运用CHIPS、CUSP和CodonW在线程序分析自主电子克隆的猪(Sus scrofa)LBP基因(GenBank登录号:NM-001128435.1)的密码子偏好性,并与猪8种抗病相关基因、模式生物基因组以及其他物种LBP基因相比较。结果表明,猪LBP基因大部分偏好使用以G/C结尾的密码子,27种偏好密码子(相对使用度(RSCU)>1)中偏好性较强的有GCC、CAC、CTG和TCC(RSCU≥2),而猪8种抗病相关基因有23种偏好密码子,全部以G/C结尾,并且偏好性较强的密码子有GCC、ATC、CTG和GTG;通过比较14种动物的LBP基因密码子偏好性,发现14个物种的LBP基因表达水平一般,并且都偏好以G/C结尾的密码子;聚类分析发现,偶蹄目猪与2种食肉目动物(猫(Felis catus)和狗(Canis))聚为一类,与系统分类关系不一致;在密码子的使用频率上,猪LBP基因与小鼠(Mus musculus)基因组的差异小于大肠杆菌(Escherichia coli)和酵母菌(Saccharomyces)等2种模式生物基因组,故小鼠更适合作为该LBP基因的外源表达宿主。本研究结果为LBP基因在动物遗传改良中选择合适的受体动物、选择最佳的外源表达系统以及提高其表达水平提供一定的理论依据。

关键词：猪脂多糖结合蛋白基因(LBP) 密码子偏好性

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猪BPI基因部分cSNPs检测及其对蛋白结构功能的影响

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畜牧兽医学报 2013年第7期44卷 1000-1007页

作者：吴正常王靖朱世平赵乔辉刘璐訾臣吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心常州213149

本试验以98头苏太猪为研究对象,检测BPI基因部分编码区的单核苷酸多态性(SNPs),并预测分析碱基突变对BPI蛋白结构和功能的影响。利用PCR-SSCP和PCR-RFLP结合测序的方法检测BPI基因外显子1、4和10的SNPs,运用生物信息学比较分析原蛋白和... 详细信息

本试验以98头苏太猪为研究对象,检测BPI基因部分编码区的单核苷酸多态性(SNPs),并预测分析碱基突变对BPI蛋白结构和功能的影响。利用PCR-SSCP和PCR-RFLP结合测序的方法检测BPI基因外显子1、4和10的SNPs,运用生物信息学比较分析原蛋白和突变型蛋白的理化性质和结构。结果表明,以BPI基因cDNA序列作为参照,BPI外显子1、4和10存在6个SNPs,3个同义突变(c.24A>G、c.54T>C和c.522C>T)和3个错义突变(c.433C>T(Arg145Trp)、c.1060A>G(Thr354Ala)和c.1151T>G(Leu384Arg))。3种错义突变未改变BPI蛋白的理化性质、信号肽、跨膜区、糖基化位点以及二、三级结构,但是导致磷酸化位点的改变或存在其他潜在功能位点区域。Western blot试验发现,BPI蛋白的分子量为53ku,苏太猪F18大肠杆菌抗性型猪的BPI蛋白表达量显著高于敏感型猪。猪BPI外显子4和10的碱基突变不同程度影响到蛋白功能,并可能对机体疾病的抗性/易感性产生影响。

关键词：猪 BPI基因 SNPs 生物信息学蛋白结构和功能

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鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选

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畜牧兽医学报 2013年第8期44卷 1330-1336页

作者：戴国俊孙大辉林雨鑫孙明明王翔王金玉张跟喜谢恺舟施会强侍苗苗扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏京海禽业集团有限公司南通226103

本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体... 详细信息

本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装。将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选。构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。

关键词： zyxin基因 RNAi 慢病毒干扰载体真核表达载体鸡

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促卵泡激素β基因在家兔不同生殖器官中的差异表达研究

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中国畜牧杂志 2013年第15期49卷 23-26页

作者：石福岳孙露露秦立志王文洲潘雨来吴信生江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省金陵种兔场江苏江宁210041

本实验以新西兰白兔为研究对象,采用实时荧光定量PCR方法,研究不同周龄时FSHβ基因在卵巢、输卵管、子宫、睾丸和输精管等5个生殖器官中的表达情况,进而分析FSHβ亚基基因对家兔繁殖性能的影响。结果表明:FSHβ基因在卵巢、输卵管、子... 详细信息

本实验以新西兰白兔为研究对象,采用实时荧光定量PCR方法,研究不同周龄时FSHβ基因在卵巢、输卵管、子宫、睾丸和输精管等5个生殖器官中的表达情况,进而分析FSHβ亚基基因对家兔繁殖性能的影响。结果表明:FSHβ基因在卵巢、输卵管、子宫、睾丸和输精管中均有一定程度的表达,但各组织内表达量之间差异不显著(P>0.05);各生殖器官中FSHβ基因的表达量在13～15周龄时都较高,卵巢中15周龄时的表达量除与13周龄无显著性差异外,与其余各周龄均存在显著性差异(P<0.05),与23周龄表达量的差异极显著(P<0.01);输精管在13周龄时表达量达到最大,显著高于17、19、23周龄表达量(P<0.05)。其余各周龄间表达量差异均不显著(P>0.05)。该研究可为研究FSHβ基因与家兔繁殖性能之间的关系提供理论参考。

关键词： FSHβ基因表达差异荧光定量PCR 家兔

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MyoG基因外显子1多态性与京海黄鸡生长性状的相关性分析

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中国畜牧杂志 2013年第23期49卷 5-8页

作者：唐莹王金玉张跟喜施会强张涛扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏京海集团江苏南通226103

本研究旨在探讨MyoG基因与鸡生长性状之间的关联性。本实验以379只京海黄鸡群体为研究对象,采用PCR-SSCP技术研究该群体MyoG基因的部分外显子单核苷酸多态性(SNPs),研究各基因型与京海黄鸡生长性状的遗传相关性。结果表明:MyoG基因第1... 详细信息

本研究旨在探讨MyoG基因与鸡生长性状之间的关联性。本实验以379只京海黄鸡群体为研究对象,采用PCR-SSCP技术研究该群体MyoG基因的部分外显子单核苷酸多态性(SNPs),研究各基因型与京海黄鸡生长性状的遗传相关性。结果表明:MyoG基因第1外显子102 bp处存在1个G-A突变位点,形成3种基因型,其中A等位基因频率为0.1346,B等位基因频率为0.8654;MyoG基因BB型个体2、4、6周龄体重显著高于AB型个体(P<0.05),BB型个体8周龄体重显著高于AA型个体(P<0.05);在整个生长过程中,BB型个体为优势个体。因此,推测MyoG基因对京海黄鸡的生长尤其是早期生长有一定的影响,为探索鸡育种过程中的标记辅助选择提供参考资料。

关键词： MyoG基因多态性相关性京海黄鸡

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zyxin基因外显子7(exon7)SNP位点与京海黄鸡屠宰及肉品质性能的相关性

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中国兽医学报 2013年第8期33卷 1288-1291,1300页

作者：戴国俊孙大辉王翔孙明明王金玉张跟喜谢恺舟施会强侍苗苗扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏京海禽业集团有限公司江苏海门226103

以京海黄鸡为试验材料,采用PCR-SSCP技术检测斑联蛋白(zyxin)基因第7外显子SNP,探讨zyxin基因该位点多态性与京海黄鸡屠宰性能以及肉品质之间的关系。结果发现该位点存在1个SNP突变位点,表现为3种基因型,分别为AA、AB和BB。统计分析表... 详细信息

以京海黄鸡为试验材料,采用PCR-SSCP技术检测斑联蛋白(zyxin)基因第7外显子SNP,探讨zyxin基因该位点多态性与京海黄鸡屠宰性能以及肉品质之间的关系。结果发现该位点存在1个SNP突变位点,表现为3种基因型,分别为AA、AB和BB。统计分析表明公鸡的肝质量、屠宰率,BB基因型显著高于AA型(P<0.05);腹脂质量、胸肌率、腿肌率,AA型显著高于BB型(P<0.05)。母鸡群体中,只有爪质量AA型显著高于BB型(P<0.05)。3种基因型对肉品质的影响均不显著(P>0.05)。

关键词： zyxin基因 SNPs 屠宰性能肉品质京海黄鸡

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TAP1基因在F18大肠杆菌抗性型和敏感型断奶仔猪间的差异表达分析

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中国畜牧杂志 2013年第23期49卷 9-12页

作者：王瑾朱世平赵乔辉訾臣吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院、江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心江苏常州213149

本研究旨在分析TAP1基因在断奶仔猪抗性型和敏感型个体间的表达差异,探讨TAP1基因在断奶仔猪抗F18大肠杆菌中发挥的潜在作用。挑选35日龄苏太猪F18大肠杆菌抗性型和敏感型仔猪各8头,运用实时荧光定量PCR技术对TAP1基因在11个组织中的表... 详细信息

本研究旨在分析TAP1基因在断奶仔猪抗性型和敏感型个体间的表达差异,探讨TAP1基因在断奶仔猪抗F18大肠杆菌中发挥的潜在作用。挑选35日龄苏太猪F18大肠杆菌抗性型和敏感型仔猪各8头,运用实时荧光定量PCR技术对TAP1基因在11个组织中的表达水平进行测定。结果表明:TAP1基因在抗性型和敏感型个体中的组织表达谱呈现一致性,且在肠道组织(十二指肠、空肠)、免疫组织(脾、淋巴结、胸腺)和肺中表达量较高。在11个组织中,抗性型个体的TAP1基因表达量普遍高于敏感型个体,差异倍数从1.21到2.37不等,其中在脾、肺、淋巴结、胸腺和空肠、十二指肠中,抗性型个体的TAP1基因表达量显著高于敏感型个体(P<0.05)。因此,TAP1基因在免疫组织及肠道内的高表达可能对断奶仔猪抵御*** F18的感染具有重要作用。

关键词： F18大肠杆菌阴川基因差异表达猪

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大白猪TLR4基因外显子1遗传变异及其与细胞因子水平的关系

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中国畜牧杂志 2013年第13期49卷 1-4页

作者：苏先敏王靖赵乔辉刘璐吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 江苏省现代种猪分子选育工程技术研究中心江苏常州213149

本实验运用PCR-SSCP技术对大白猪TLR4基因外显子1遗传变异进行分析,同时利用ELISA方法对外周血重要细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-Beta、IL-10、IL-12)的水平进行测定,旨在分析大白猪TLR4基因外显子1多态性及其与重要细胞因子水平间... 详细信息

本实验运用PCR-SSCP技术对大白猪TLR4基因外显子1遗传变异进行分析,同时利用ELISA方法对外周血重要细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-Beta、IL-10、IL-12)的水平进行测定,旨在分析大白猪TLR4基因外显子1多态性及其与重要细胞因子水平间的关系,探讨将其作为抗F18大肠杆菌病遗传标记的可行性。结果表明:大白猪TLR4基因外显子1存在G93C同义突变位点,共检测到3种基因型,分别定义为BB、BC和CC;关联分析结果表明,大白猪TLR4外显子1变异位点对机体重要细胞因子水平没有显著影响(P>0.05),表明基于该位点的分子选育不会对机体免疫应答和一般抗病力产生不利影响。结果提示,有必要将TLR4基因外显子1的变异位点作为抗大肠杆菌病的重要遗传标记进行深入研究。

关键词： TLR4基因多态性细胞因子大白猪

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猪卵泡抑素基因接拼形式克隆、表达及分析

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生物信息学 2013年第3期11卷 201-208页

作者：谢雨琇宋成义何庆玲周家庆冯晓军李庆平高波王霄燕江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

猪卵泡抑素基因(Follistatin,FS)具有调控动物生殖活动和肌肉生长的生物功能,但对猪的研究报道很少。本研究克隆了猪卵泡抑素基因两种接拼形式、比较分析其蛋白结构特征、进化关系和组织表达特性。研究结果表明,通过两对引物成功克隆了... 详细信息

猪卵泡抑素基因(Follistatin,FS)具有调控动物生殖活动和肌肉生长的生物功能,但对猪的研究报道很少。本研究克隆了猪卵泡抑素基因两种接拼形式、比较分析其蛋白结构特征、进化关系和组织表达特性。研究结果表明,通过两对引物成功克隆了猪卵泡抑素基因的1045bp(FS-L)和964bp(FS-S)的两种接拼形式;与Genbank中的序列比对表明FS-L和FS-S的CDS序列与人、牛、家鼠、沟鼠、斑马鱼的卵泡抑素基因序列相似性在80%以上。对两种蛋白质结构域的比较发现,FS-S蛋白相比FS-L蛋白而言缺失了一个FS结构域。同源性分析表明,猪与牛的亲缘关系较近,与人、小鼠、沟鼠和斑马鱼的关系相对较远。组织表达分析表明,两种拼接形式在梅山猪不同组织中的表达存在差异,FS-L基因在梅山猪肌肉及生殖系统等组织中均有表达,而FS-S基因则主要在生殖系统中表达。表明FS-L在肌肉生长中发挥作用,而FS-S主要调控动物的生殖功能。

关键词：猪卵泡抑素克隆表达生物信息学

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