检索结果-内蒙古大学图书馆

2017中国长三角遗传学大会

作者：娄秋宏李婷婷张跟喜王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

为探讨生长分化因子-9基因(GDF9)和骨形态发生蛋白-15(BMP15)基因的多态性与京海黄鸡生长及繁殖性状的关系,本研究以江苏京海集团育种场376只京海黄鸡为材料,利用PCR-SSCP技术检测GDF9基因和BMP15基因的SNPs,并分析基因多态性与京海黄... 详细信息

为探讨生长分化因子-9基因(GDF9)和骨形态发生蛋白-15(BMP15)基因的多态性与京海黄鸡生长及繁殖性状的关系,本研究以江苏京海集团育种场376只京海黄鸡为材料,利用PCR-SSCP技术检测GDF9基因和BMP15基因的SNPs,并分析基因多态性与京海黄鸡各周龄体重和开产体重、开产日龄、开产蛋重、300日龄总产蛋数以及300日龄平均蛋重之间的关系。结果显示,GDF9基因中共检测到2个突变位点,其中,g.2053G>A位点在京海黄鸡群体中共检测到3种基因型,分别为GG、AG和AA;其中,GG基因型个体的开产体重显著高于AA型个体(P<0.05),300日龄体重极显著高于AA型个体(P<0.01);g.2420T>C位点在京海黄鸡群体中也检测到3种基因型TT、CC和CT,TT基因型个体的300日龄蛋重显著低于CT基因型个体(P<0.05)。另外,对生长性状进行关联分析发现CC基因型个体2周龄体重显著高于CT基因型个体(P<0.05)。BM P15基因中检测到4个突变位点,其中,g.474A>G位点在京海黄鸡群体中存在三种基因型,分别为:AA、GG和AG,AA基因型个体6周龄体重显著高于AG基因型个体(P<0.05)。研究结果提示,GDF9基因g.2053G>A、g.2420T>C突变位点可作为京海黄鸡繁殖性状改良的候选分子标记,而GDF9基因g.2420T>C突变位点以及BMP15基因g.474A>G突变位点可作为京海黄鸡早期生长性状改良的候选分子标记。

关键词： GDF9 BMP15 分子标记京海黄鸡生长繁殖

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亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔血液生化指标的影响

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中国养兔 2017年第5期 4-6,15页

作者：朱杰郝晔赵博昊胡帅帅赵斌穆琳陈阳潘雨来朱慈根胡春晖吴信生扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏省金陵种兔场南京211103

为研究亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔血液生化指标的影响,选用35日龄同期断奶新西兰白兔300只,公母各半,分为5个处理组,每个处理3个重复,每个重复20只,分别是BMD高剂量组(H,100mg/kg)、中剂量组(M,50mg/kg)、低剂量组(L,25mg/kg)、杆菌... 详细信息

为研究亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔血液生化指标的影响,选用35日龄同期断奶新西兰白兔300只,公母各半,分为5个处理组,每个处理3个重复,每个重复20只,分别是BMD高剂量组(H,100mg/kg)、中剂量组(M,50mg/kg)、低剂量组(L,25mg/kg)、杆菌肽锌对照组(BZ,50mg/kg)、空白对照组(C,无添加),每个重复随机抽取6只,测定血液生化指标。结果发现各剂量组血清总蛋白(TP)和葡萄糖(GLU)高于空白对照组,其中高剂量组和中剂量组显著高于空白组(P<0.05),高剂量组碱性磷酸酶(ALP)和尿素氮(UN)显著低于空白组(P<0.05);剂量组Ig G显著高于空白组(P<0.05),剂量组IgM与空白对照组差异不显著(P>0.05);高剂量组、中剂量组和杆菌肽锌组TNF-α、IL-2和IL-6均显著高于空白组(P<0.05)。结果表明亚甲基水杨酸杆菌肽对断奶仔兔的免疫功能起到促进作用,且中剂量组的添加剂量(50mg/kg)效果最好。

关键词：亚甲基水杨酸杆菌肽免疫功能断奶仔兔

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鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立

鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立

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江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：赵瑞丰靳锴张晨金晶王颖洁左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州 225009

目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培养不稳定对试验准确性带来的问题. 方法：采用... 详细信息

目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培养不稳定对试验准确性带来的问题. 方法：采用口吸管法收集度过危相期的单个鸡胚成纤维细胞,传代培养形成单克隆细胞系CSC.通过稀释法克隆形成试验确立CEF单克隆最适培养体系,并比较两种方法的克隆形成效率;对单克隆细胞系的基本生物学特性进行了检测,比较摸索Fugene介导的最佳转染体系;利用Edu染色法检测CSC对胚胎干细胞的促增殖能力. 结果：经过传代培养,少数CEF度过危相期并形成连续细胞系,稀释法克隆形成实验结果表明Ham's F12培养基为CEF形成克隆的最适培养基,形成效率为25％±0.006;口吸管法分离能高效分离单细胞,单克隆形成率为32.29％±0.04,显著高于有限稀释法6.95％±0.01,传代建系后其中一株命名为CSC-1-5;CSC-1-5细胞系具有二倍体核型,无致瘤性,增殖能力稳定,且细胞周期G2/M期细胞比率显著高于***-N1转染CSC-1-5效率为51.3％±0.009较pCEF有显著提升且能促进鸡胚胎干细胞的增殖. 结论：度过危相期的CEF可通过单细胞克隆形成能稳定增殖的单克隆细胞系CSC,这种细胞系具有更高的均一度能够用于外源基因的转染和制备饲养层细胞.

关键词：鸡胚成纤维细胞单细胞克隆系均一度培养稳定性

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口吸管法制备DF-1单细胞克隆

口吸管法制备DF-1单细胞克隆

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：赵瑞丰靳锴金晶王颖洁李东左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

取对数期末的DF-1细胞,通过手工拉针连接橡皮管制备的单细胞分离装置,于倒置显微镜下收集DF-1单细胞.收集的单细胞培养于同源条件培养基中,形成单细胞克隆之后传代并建立DF-1单克隆细胞系;采用连续细胞计数绘制DF-1单克隆细胞系生长曲线... 详细信息

取对数期末的DF-1细胞,通过手工拉针连接橡皮管制备的单细胞分离装置,于倒置显微镜下收集DF-1单细胞.收集的单细胞培养于同源条件培养基中,形成单细胞克隆之后传代并建立DF-1单克隆细胞系;采用连续细胞计数绘制DF-1单克隆细胞系生长曲线;秋水仙素处理后吉姆萨染色进行染色体核型分析;软琼脂克隆法检测致瘤性.克隆形成试验结果表明:条件培养基组单细胞克隆形成率为2.93％±0.23与普通培养基组的0.07％±1.65相比有极显著提高(P＜0.01);口吸管分离形成克隆效率为3.6％,与平板克隆实验结果没有差异.DF-1单克隆细胞系生长曲线为倒S型,能正常增殖;染色体核型分析显示DF-1单克隆细胞系核型为正常的鸡二倍体核型;软琼脂克隆检测表明没有出现可见克隆.口吸管法成功制备了DF-1单克隆细胞系,条件培养体系对单个DF-1细胞增殖有明显的促进作用,且DF-1单克隆细胞系具有正常的增殖能力和二倍体核型,不具有致瘤性.

关键词： DF-1单克隆细胞系口吸管法条件培养基染色体核型分析

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京海黄鸡G蛋白偶联受体1基因生物信息学及组织表达分析

京海黄鸡G蛋白偶联受体1基因生物信息学及组织表达分析

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江苏省遗传学会2017年学术研讨会——“技术创新与遗传学发展”

作者：袁曼曼张涛张向前李婷婷凌娇娇吴鹏飞王金玉施会强扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏京海集团

试验旨在研究参与激素调节并调控卵巢功能的可能基因,挑选候选基因G蛋白偶联受体1(Gprotein-coupledreceptor1),深入研究其是否参与激素调节。根据转录组测序获得的京海黄鸡GPR1基因的CDS序列设计一对引物,利用实时荧光定量RTPCR方法,检... 详细信息

试验旨在研究参与激素调节并调控卵巢功能的可能基因,挑选候选基因G蛋白偶联受体1(Gprotein-coupledreceptor1),深入研究其是否参与激素调节。根据转录组测序获得的京海黄鸡GPR1基因的CDS序列设计一对引物,利用实时荧光定量RTPCR方法,检测GPR1基因在高低产京海黄鸡卵巢组织中的表达情况,并与生物信息学进行关联,使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析GPR1基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因所编码蛋白质的二级、三级结构。结果显示,京海黄鸡与GenBank中原鸡、人、牛、野猪、黑猩猩、家兔、马、绵羊、藏羚羊、大鼠、小鼠、斑马鱼的同源性分别为100.0%、69.0%、69.1%、69.3%、68.9%、69.6%、69.2%、68.8%、68.9%、67.5%、69.0%和50.3%;氨基酸分析发现GPR1蛋白为疏水性蛋白,分子质量为40.41ku,理论等电点为6.91,为7次跨膜蛋白;亚细胞定位显示,该蛋白属于非分泌蛋白;预测该蛋白含有25个潜在的磷酸化位点,1糖基化位点;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构为7次跨膜螺旋结构;组织表达分析显示,GPR1基因在低产组的表达情况极显著高于高产组(P<0.01)。本试验结果将有利于GPR1基因功能的进一步分析,为进一步研究该基因对京海黄鸡产蛋性状的调控机理提供理论依据。

关键词：京海黄鸡 G蛋白偶联受体1 生物信息学分析蛋白组织表达

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京海黄鸡G蛋白偶联受体1基因生物信息学及组织表达分析

京海黄鸡G蛋白偶联受体1基因生物信息学及组织表达分析

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江苏省遗传学会2017年学术研讨会

作者：袁曼曼张涛张向前李婷婷凌娇娇吴鹏飞王金玉施会强扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 江苏京海集团南通226103

试验旨在研究参与激素调节并调控卵巢功能的可能基因,挑选候选基因G 蛋白偶联受体1(G protein-coupled receptor 1),深入研究其是否参与激素调节.根据转录组测序获得的京海黄鸡GPR1 基因的CDS 序列设计一对引物,利用实时荧光定量RTPCR... 详细信息

试验旨在研究参与激素调节并调控卵巢功能的可能基因,挑选候选基因G 蛋白偶联受体1(G protein-coupled receptor 1),深入研究其是否参与激素调节.根据转录组测序获得的京海黄鸡GPR1 基因的CDS 序列设计一对引物,利用实时荧光定量RTPCR 方法,检测GPR1 基因在高低产京海黄鸡卵巢组织中的表达情况,并与生物信息学进行关联,使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析 GPR1 基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因所编码蛋白质的二级、三级结构.结果显示,京海黄鸡与GenBank 中原鸡、人、牛、野猪、黑猩猩、家兔、马、绵羊、藏羚羊、大鼠、小鼠、斑马鱼的同源性分别为100.0％、69.0％、69.1％、69.3％、68.9％、69.6％、69.2％、68.8％、68.9％、67.5％、69.0％和50.3％;氨基酸分析发现 GPR1 蛋白为疏水性蛋白,分子质量为40.41 ku,理论等电点为6.91,为7 次跨膜蛋白;亚细胞定位显示,该蛋白属于非分泌蛋白;预测该蛋白含有25 个潜在的磷酸化位点,1 糖基化位点;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构为7 次跨膜螺旋结构;组织表达分析显示,GPR1 基因在低产组的表达情况极显著高于高产组(P<0.01).本试验结果将有利于GPR1 基因功能的进一步分析,为进一步研究该基因对京海黄鸡产蛋性状的调控机理提供理论依据.

关键词：京海黄鸡 G蛋白偶联受体1 生物信息学分析蛋白组织表达

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miRNA-34基因家族进化分析及其在鹅生殖周期内的表达变化

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畜牧兽医学报 2016年第2期47卷 260-267页

作者：刘然张惠子云皓琪陈阳黄正洋张扬徐琪陈国宏扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

旨在探明miRNA-34基因家族(miRNA-34s)系统进化历程及其在鹅生殖周期内的表达变化规律。通过文献和miRBase数据库检索脊椎动物的miRNA-34s序列,利用Ensembl数据库信息,确定miRNA-34s在基因组中的位置,采用MEGA 6.0构建miRNA-34s的系统... 详细信息

旨在探明miRNA-34基因家族(miRNA-34s)系统进化历程及其在鹅生殖周期内的表达变化规律。通过文献和miRBase数据库检索脊椎动物的miRNA-34s序列,利用Ensembl数据库信息,确定miRNA-34s在基因组中的位置,采用MEGA 6.0构建miRNA-34s的系统进化树;并利用RT-qPCR检测鹅卵巢组织miRNA-34s在生殖周期内的表达变化。结果在脊椎动物中共搜索70余条miRNA-34s序列,miRNA-34s3个成员(miRNA-34a、miRNA-34b和miRNA-34c)在脊椎动物中分布广泛,高度保守,均位于基因间隔区(Intergenic region,IGR),且miRNA-34b和miRNA-34c两个基因位于同一染色体上,在进化过程中紧密相连,可能是由于串联重复所致。RTqPCR检测结果显示,miRNA-34s3个成员在鹅的开产前期、排卵期、排卵后期和就巢期卵巢组织中表现出相同趋势的表达,即在排卵期、排卵后期表达水平高于或显著高于开产前期和就巢期。miRNA-34家族在进化中高度保守,且在调控鹅生殖周期中发挥一定的作用。

关键词：鹅 miRNA-34 进化定量表达

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猪FUT1基因启动子区的确定及活性分析

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农业生物技术学报 2016年第2期24卷 168-175页

作者：甘丽娜董文华王靖孙寿永朱国强吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学兽医学院

F18大肠杆菌(Escherichia coli F18,*** F18)是养猪(Sus scrofa)业中发生最普遍、危害最大的病原菌之一,球系列鞘糖脂生物合成通路及通路中α-(1,2)岩藻糖转移酶1基因(alpha(1,2)fucose transferase 1,FUT1)对断奶仔猪F18抗性具有重要... 详细信息

F18大肠杆菌(Escherichia coli F18,*** F18)是养猪(Sus scrofa)业中发生最普遍、危害最大的病原菌之一,球系列鞘糖脂生物合成通路及通路中α-(1,2)岩藻糖转移酶1基因(alpha(1,2)fucose transferase 1,FUT1)对断奶仔猪F18抗性具有重要调控作用。本研究运用生物信息学技术挖掘课题组前期获得的断奶仔猪转录组测序结果,确定FUT1基因的转录起始位点和启动子区。同时对启动子区序列进行Cp G岛分析;采用双荧光素酶报告基因以及Ali Baba 2.0软件,分别分析启动子区活性和Cp G岛序列潜在的转录结合位点。通过比对人类(Homo sapiens)和猪的基因序列信息数据库,结果表明,FUT1基因转录起始区域具有5种可变剪接(AS-1,AS-2,AS-3,AS-4和AS-5)和2个启动子区域(启动子1和启动子2);双荧光素酶报告基因检测结果进一步显示,FUT1基因启动子2的转录活性极显著高于启动子1的转录活性(P<0.01),启动子2的活性是启动子1的2.75倍,根据结果可以推测启动子2在转录过程中起主导作用;Cp G岛分析显示,猪FUT1基因启动子1和启动子2分别存在一个Cp G岛。FUT1启动子1扩增片转录因子预测分析表明,FUT1基因启动子1存在20个潜在的转录因子结合位点,并且Sp1出现在多个转录结合位点处。本研究结果为猪FUT1基因的甲基化检测和调控机制分析提供一定的基础和依据。

关键词：猪 α-(1,2)岩藻糖转移酶1基因(FUT1) 启动子区 CpG岛

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性激素促进鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化

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中国家禽 2016年第8期38卷 10-16页

作者：张文慧蒋一秀王颖洁左其生李东连超汤贝贝张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

试验分别探讨了睾酮和FSH诱导鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先筛选睾酮和卵泡刺激素(FSH)的适宜诱导浓度,在RA和支持细胞的诱导基础上分别添加适宜浓度的睾酮和FSH对传至2代的ESCs进行诱导... 详细信息

试验分别探讨了睾酮和FSH诱导鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先筛选睾酮和卵泡刺激素(FSH)的适宜诱导浓度,在RA和支持细胞的诱导基础上分别添加适宜浓度的睾酮和FSH对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果显示:睾酮和FSH的适宜诱导浓度分别为15 ng/m L和25 ng/m L,单独使用睾酮和FSH诱导均未出现类SSCs样细胞;二者联合支持细胞和RA诱导,诱导2 d出现类胚体,随后类胚体体积逐渐变大,诱导12 d类胚体解体出现类SSC样细胞;实时荧光定量PCR结果显示,睾酮和FSH分别与支持细胞和RA共同诱导组中,Stra8表达量持续上调,integrinβ1、Dazl表达量显著上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下降趋势;睾酮的多因素诱导组中,Dazl的表达量明显高于RA和支持细胞诱导组;而FSH的多因素诱导组中Stra8的表达量相对于RA和支持细胞诱导组也显著升高。结果表明睾酮和FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但可以促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。

关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化睾酮卵泡刺激素

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京海黄鸡卵巢转录组研究:基因结构分析与新基因发掘注释

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中国畜牧兽医 2016年第4期43卷 854-861页

作者：韩昆鹏段炼李婷婷王金玉张涛李国辉张跟喜薛倩扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

本试验通过对京海黄鸡卵巢组织进行转录组分析,旨在为完善京海黄鸡部分基因结构和发掘新基因提供参考。选取高、低产京海黄鸡各4只,利用转录组测序(RNA-Seq)技术对其卵巢转录组进行测序,然后对得到的测序数据进行生物信息学分析。测序... 详细信息

本试验通过对京海黄鸡卵巢组织进行转录组分析,旨在为完善京海黄鸡部分基因结构和发掘新基因提供参考。选取高、低产京海黄鸡各4只,利用转录组测序(RNA-Seq)技术对其卵巢转录组进行测序,然后对得到的测序数据进行生物信息学分析。测序数据经过质量控制后,8个样品共得到484 992 074条有效数据(Clean Reads),总计61.09Gb。筛选出1 445 264个京海黄鸡品种内SNP位点,其中位于基因区的SNP位点916 108个,位于基因间区的SNP位点552 168个。8个样品中平均新预测的可变剪接12 883个,并对7 481个基因结构进行了优化。与所选的参考基因组序列对比分析,共发掘4 431个新基因,通过与各数据库进行序列对比,1 809个新基因得到功能注释。本研究通过转录组测序技术检测了京海黄鸡卵巢组织的基因结构,为进一步完善京海黄鸡的基因结构信息及发掘潜在的新基因提供分子水平的依据。

关键词：转录组测序京海黄鸡基因结构 SNP 新基因

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