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作者：王剑锋崔璐璐谢恺舟孙瑛瑛孙礼瑞刘建宇张跟喜戴国俊王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为研究不同日粮蛋能水平对京海黄鸡肌肉中氨基酸含量的影响,以43日龄京海黄鸡为试验素材,随机分为4个组,试验1组(蛋白质15％,代谢能9.951MJ/kg,)为对照组,试验2组(蛋白质16％,代谢能10.95MJ/kg)、试验3组(蛋白质17％,代谢能12.65MJ/kg)... 详细信息

为研究不同日粮蛋能水平对京海黄鸡肌肉中氨基酸含量的影响,以43日龄京海黄鸡为试验素材,随机分为4个组,试验1组(蛋白质15％,代谢能9.951MJ/kg,)为对照组,试验2组(蛋白质16％,代谢能10.95MJ/kg)、试验3组(蛋白质17％,代谢能12.65MJ/kg)和试验4组(蛋白质18％,代谢能13.95MJ/kg)为试验组.饲养至112日龄屠宰,分别取其胸肌和腿肌,采用高效液相色谱法测定肌肉中氨基酸含量.结果表明:高蛋能水平的试验4组胸肌肌肉中Arg、Phe、Pro、Val和必需氨基酸(EAA)含量显著低于对照组(P＜0.05);母鸡腿肌中,试验2组Ser、鲜味氨基酸(DFAA)和总氨基酸(TAA)含量显著高于对照组(P＜0.05),EAA和Lys含量显著高于试验3组(P＜0.05).但不同组别间氨基酸含量差异显著(P＜0.05),试验设计日粮蛋能水平对京海黄鸡肌肉中TAA、EAA和DFAA含量的影响并不显著(P＞0.05).本试验设计的高蛋能水平日粮对京海黄鸡胸肌肌肉中氨基酸的积累有负面影响,试验2组(蛋白质16％,代谢能10.95MJ/kg)蛋能水平能促进母鸡腿肌中部分氨基酸的积累.

关键词：京海黄鸡氨基酸饲养日粮蛋能水平

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高效液相色谱荧光检测法检测鸡组织中氨苄西林残留量

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安徽农业科学 2014年第20期42卷 6615-6617,6620页

作者：孙礼瑞马晓萌谢恺舟张小杰王剑锋刘建宇崔璐璐张跟喜戴国俊王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 青岛农业大学动物科技学院山东青岛266000

[目的]为氨苄西林在鸡组织中的残留检测标准的制定提供科学依据。[方法]建立检测鸡组织中氨苄西林残留量的高效液相色谱荧光法。[结果]氨苄西林在25～1000μg／kg浓度范围内，色谱峰面积与浓度呈线性关系，且线性关系良好。当氨苄西林... 详细信息

[目的]为氨苄西林在鸡组织中的残留检测标准的制定提供科学依据。[方法]建立检测鸡组织中氨苄西林残留量的高效液相色谱荧光法。[结果]氨苄西林在25～1000μg／kg浓度范围内，色谱峰面积与浓度呈线性关系，且线性关系良好。当氨苄西林添加量为10．0～125．0μg／ml时，鸡组织中AMP的平均回收率为71．23％～88．86％，相对标准偏差均低于10．74％；检测限和定量限分别为3．5（S／N=3）和10．0μg／kg（S／N=10）。[结论]该方法操作简便快速，可适用于鸡组织中氨苄西林的提取和检测，且准确度和精密度均符合残留分析的要求。

关键词：高效液相色谱氨苄西林荧光检测法

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高效液相色谱荧光法检测鸡组织中阿莫西林残留

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中国兽药杂志 2014年第9期48卷 40-45页

作者：张金玲孙礼瑞谢恺舟张小杰李凯潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261401 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

建立了高效液相色谱荧光法检测鸡组织中阿莫西林（AMO）的残留量。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化。以0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈溶液为流动... 详细信息

建立了高效液相色谱荧光法检测鸡组织中阿莫西林（AMO）的残留量。鸡组织样品经磷酸二氢钠溶液提取,乙腈去蛋白,正己烷去脂肪,饱和二氯甲烷萃取,上清液经水杨醛在酸性条件下沸水浴衍生化。以0.01 mol/L的磷酸二氢钾溶液和乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL/min,高效液相色谱荧光检测,激发波长为358 nm,发射波长为440 nm。阿莫西林在25~1000μg/kg质量浓度范围内,线性关系良好。当阿莫西林添加水平为13~125μg/kg时,鸡组织中AMO的平均回收率在72.82%~88.82%,相对标准偏差在6.21%~9.63%;检测限、定量限分别为5μg/kg（S/N≥3）、13μg/kg（S/N≥10）。该方法操作简便,可适用于鸡组织中阿莫西林的提取和检测,且准确度和精密度均符合残留分析的要求。

关键词：阿莫西林荧光法鸡组织高效液相色谱

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氨苄西林在鸡血浆中的残留消除规律

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上海畜牧兽医通讯 2014年第2期 2-5页

作者：孙礼瑞李爱华谢恺舟郭辉生赵敏谢星王剑锋倪海球张跟喜戴国俊王金玉扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为建立鸡血浆中氨苄西林的高效液相色谱检测方法并研究氨苄西林在鸡血浆中残留消除规律。本试验将鸡血浆经乙腈提取、饱和二氯甲烷萃取，在酸性条件下与水杨醛沸水浴衍生化后，进行高效液相色谱荧光检测。结果显示：该方法测定鸡血浆中... 详细信息

为建立鸡血浆中氨苄西林的高效液相色谱检测方法并研究氨苄西林在鸡血浆中残留消除规律。本试验将鸡血浆经乙腈提取、饱和二氯甲烷萃取，在酸性条件下与水杨醛沸水浴衍生化后，进行高效液相色谱荧光检测。结果显示：该方法测定鸡血浆中氨苄西林的检测限为1．0ng／mL（S／N＝3）、定量限为2．5ng／mL（S／N＝10）；血浆样品中氨苄西林的平均回收率在82．46％～88．72％范围内，相对标准差在3．65％～5．10％范围内；试验组鸡分别以60、120mg／kg体重的剂量内服AMP，1次／d，连续5d，给药期间血浆中AMP浓度呈上升趋势，在给药第5d时AMP浓度达到峰值；休药第1d时，AMP浓度急剧下降，到休药第3d，AMP浓度低于检测限（1．0ng／mL）。表明氨苄西林在鸡血浆中的浓度与给药剂量呈正相关。

关键词：鸡血浆氨苄西林残留消除高效液相色谱荧光检测法

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兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

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畜牧兽医学报 2013年第5期44卷 788-795页

作者：万小颖秦立志施丽娟王文洲李挺李碧春吴信生扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体。运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大... 详细信息

白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体。运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果表明:克隆得到了兔IL-10基因,大小为537bp,经核苷酸测序与GenBank已登录的基因序列(NM_001082045)相似性为99%;重组载体pET-IL-10构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶56 000,且具有很高的特异性。成功实现了兔IL-10基因的原核表达,并制备了豚鼠抗兔IL-10多克隆抗体,为深入研究兔IL-10基因的功能奠定了基础。

关键词：白细胞介素-10基因克隆表达抗体制备

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卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达

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昆虫学报 2013年第10期56卷 1117-1126页

作者：沈杰刘振国沈芳吉挺扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从... 详细信息

【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。

关键词：卡尼鄂拉蜂王浆腺锌转运蛋白-7相似蛋白基因克隆抗体制备差异表达

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BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

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畜牧兽医学报 2013年第11期44卷 1749-1757页

作者：施青青张振韬李鹏程郑蒙蒙王丹黄晓梅张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室扬州225009

旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式，分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞，通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态... 详细信息

旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式，分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞，通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态变化和差异基因表达量变化，确定了BMP4的适宜诱导浓度为40ng·mL-1。在适宜浓度诱导过程中，诱导4d类胚体开始出现，6～8d类胚体逐渐增大，数量增多，10d部分类胚体开始散开，变为小的圆形细胞，12d在散开后的类胚体周围可观察到少量生殖样细胞，14d生殖样细胞数目增多，且呈聚团生长的趋势。诱导过程中相应基因表达量也发生变化：胚胎干细胞标记基因Nanog、Sox2表达量显著下降（P〈O．01），生殖细胞特异基因Stra8、Dazl、integrina6、c-kit表达量均呈显著上升趋势（P〈O．01）。BMP4可以引起生殖细胞相应基因的表达，促进雄性鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞方向分化，结果为雄性生殖细胞的体外诱导研究提供试验参考，为进一步研究雄性生殖细胞发生和调控机制提供理论基础。

关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化 BMP4

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兔IL-10重组基因表达及其亚细胞定位的研究

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中国畜牧杂志 2013年第15期49卷 7-12页

作者：万小颖李挺王文洲施丽娟李碧春吴信生扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构... 详细信息

本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10。脂质体(LTX)介导基因转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:实验成功克隆出兔IL-10基因537 bp长的完整编码区(CDS),共编码178个氨基酸,GenBank登录号为NM_001082045;IL-10蛋白的分子量为20.15 ku,理论等电点为8.20;信号肽区域预测结果显示,IL-10蛋白含有一小段信号肽序列,属于分泌型蛋白,并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间;荧光倒置显微镜观察结果发现,融合蛋白在细胞质中表达,而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞;RT-PCR检测mRNA表达明显。结果显示,融合表达载体pEGFP-IL-10构建成功,并在细胞中明显表达,为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础。

关键词：白介素10基因绿色荧光蛋白 NIH-3T3细胞亚细胞定位细胞外及细胞膜兔

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白细胞介素-10研究进展

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畜牧与兽医 2013年第3期45卷 90-94页

作者：万小颖李挺秦立志吴信生扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

白细胞介素-10(IL-10)是一种重要的抑炎性细胞因子,主要由Th2类细胞产生,抑制IFN-γ等细胞因子的产生。IL-10对机体的免疫功能和炎症过程均具有重要的调节活性,并且国内外最新研究均表明IL-10基因的多态性与多种疾病相关。本文综合近年... 详细信息

白细胞介素-10(IL-10)是一种重要的抑炎性细胞因子,主要由Th2类细胞产生,抑制IFN-γ等细胞因子的产生。IL-10对机体的免疫功能和炎症过程均具有重要的调节活性,并且国内外最新研究均表明IL-10基因的多态性与多种疾病相关。本文综合近年来国内外有关IL-10的应用研究状况作一综述,阐述其在不同疾病方面的应用。

关键词： IL-10 免疫多态性疾病

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扬州鹅及其杂交配套组合肌肉中硫胺素和胆固醇含量的比较

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中国畜牧杂志 2013年第15期49卷 26-29页

作者：谢恺舟孙瑛瑛陈学森陈书琴戴国俊赵万里扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为比较扬州鹅及其杂交配套组合肌肉中硫胺素和胆固醇含量,以70日龄扬州鹅(A×A)及其4个杂交配套组合(K×B、K×A、C×A、S×A)共5个群体,分别取其胸肌和腿肌,采用高效液相色谱和气相色谱法分别测定鹅肌肉中硫胺素... 详细信息

为比较扬州鹅及其杂交配套组合肌肉中硫胺素和胆固醇含量,以70日龄扬州鹅(A×A)及其4个杂交配套组合(K×B、K×A、C×A、S×A)共5个群体,分别取其胸肌和腿肌,采用高效液相色谱和气相色谱法分别测定鹅肌肉中硫胺素和胆固醇含量。结果表明:5个群体中,同一群体鹅肌肉中的硫胺素含量在部位和性别间均无显著差异(P>0.05);公、母鹅混合后,A×A群体胸肌、腿肌中的硫胺素含量均显著高于其他4个群体(P<0.05)。5个鹅群体中,胸肌中胆固醇含量显著高于腿肌(P<0.05);K×A和A×A群体公鹅腿肌中的胆固醇含量显著小于母鹅腿肌(P<0.05);公、母鹅混合后,5个鹅群体胸肌中胆固醇含量差异不显著(P>0.05)。

关键词：杂交配套组合肌肉硫胺素胆固醇扬州鹅

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