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中国家禽 2022年第3期44卷 17-22页

作者：胡菜王颖洁靳锴吴宇慧赵宗仪李熠张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 温州肯恩大学理工学院浙江温州325000

研究旨在对鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向鸡精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSC)分化过程中显著差异基因——丝裂原活化蛋白激酶8(Mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)进行生物信息学分析,验证MAPK8慢病毒干扰载体活性及干扰效率,为后期验证MAPK8在ESC向SSC分化过程中的调控方式以及功能研究奠定基础。试验采用RNA-seq和qRT-PCR分析和检测鸡ESC、PGC和SSC的差异表达基因;利用生物信息学在线预测软件对其进行理化性质及结构特征分析;比较鸡MAPK8基因序列与其它物种的同源性并进行组织表达谱检测;验证MAPK8慢病毒干扰载体的活性与干扰效率。结果显示:MAPK8在SSC上特异高表达;生物信息学分析显示鸡MAPK8是一种亲水性的无信号脂溶性蛋白,存在2个N-糖基化位点、13个O-糖基化位点和45个磷酸化位点,与其它物种高度同源(序列一致性达到80%),保守性较高;表达谱分析发现其在性腺中高表达;MAPK8慢病毒干扰载体能够稳定表达EGFP荧光蛋白且shRNA-1干扰效率最佳。该结果为深入探究MAPK8在鸡ESC向SSC分化过程中的功能奠定了基础。

关键词：鸡 MAPK8 生物信息学分析慢病毒干扰载体

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柔嫩艾美耳球虫感染对不同球虫抗性鸡群体炎性相关因子的影响

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中国兽医杂志 2025年第6期 39-46页

作者：唐美慧 Areej Arif 董理月于海亮汤建强范作堃张涛张跟喜谢恺舟赵振华戴国俊扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室中国农业科学院家禽研究所

为了探究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染后不同球虫抗性鸡群体对免疫、氧化应激反应和炎症相关基因表达量的影响，本试验将京海黄鸡随机分为对照组和攻毒组，根据柔嫩艾美耳球虫感染后的相对增重率、粪便卵囊数、卵囊值、盲肠... 详细信息

为了探究柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）感染后不同球虫抗性鸡群体对免疫、氧化应激反应和炎症相关基因表达量的影响，本试验将京海黄鸡随机分为对照组和攻毒组，根据柔嫩艾美耳球虫感染后的相对增重率、粪便卵囊数、卵囊值、盲肠病变值和抗球虫指数等抗性评价指标，筛选出抗性组和易感组鸡群体，测定柔嫩艾美耳球虫感染后不同球虫抗性鸡群体血液炎性因子和抗氧化指标以及不同组织中炎性相关基因的表达量。结果显示，抗性组和易感组血液中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性及活性氧（ROS）浓度与对照组相比差异极显著（P <0.01），但不同球虫抗性组间血液中SOD和CAT活性及ROS和一氧化氮（NO）浓度无显著差异（P> 0.05）；抗性组和易感组血液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度极显著高于对照组（P <0.01），且易感组IL-1β和TNF-α浓度极显著高于抗性组（P <0.01）；抗性组和易感组盲肠和胸腺中IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α基因表达量极显著高于对照组（P <0.01），且易感组盲肠和胸腺中IL-1β、TNF-α基因表达量极显著高于抗性组（P <0.01）。抗性组与易感组之间进行比较发现，2个组血液中IL-1β和TNF-α浓度与盲肠和胸腺组织中IL-1β和TNF-α基因表达量的变化规律高度一致。结果表明，柔嫩艾美耳球虫感染促进了不同球虫抗性鸡群体免疫、氧化应激反应和炎症相关基因表达量。

关键词：柔嫩艾美耳球虫京海黄鸡抗氧化指标炎性因子

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干扰MAP3K1基因对山羊毛囊干细胞增殖和凋亡的影响

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东北农业大学学报 2020年第10期51卷 56-62页

作者：马金亮王健冯云奎王强张柳明李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在探讨促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1,MAP3K1)基因对体外培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞(HFSCs)增殖和凋亡的影响。针对MAP3K1基因设计3个干扰靶点,构建pDNA316-ZsGreen-ShRN... 详细信息

研究旨在探讨促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1,MAP3K1)基因对体外培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞(HFSCs)增殖和凋亡的影响。针对MAP3K1基因设计3个干扰靶点,构建pDNA316-ZsGreen-ShRNA腺病毒干扰载体。转染HFSCs,以空载体细胞为对照,RT-qPCR技术检测干扰MAP3K1效果及增殖相关基因(PCNA、CDK1、CCND2)、凋亡相关基因(Bax、Bcl-2)表达水平,CCK-8和EdU法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果表明,shRNA(MAP3K1-sh)转染HFSCs后,MAP3K1基因相当表达量极显著下降(P<0.01);增殖相关基因mRNA表达水平显著下降,促凋亡基因Bax的mRNA表达水平显著提高,相反,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达显著降低;CCK-8和EdU结果发现细胞增殖受抑制,S期细胞数量显著上升;细胞总凋亡量显著上升。综上,干扰MAP3K1基因表达显著抑制HFSCs增殖并促进其凋亡,研究为阐明调控长江三角洲白山羊优质笔料毛分子形成机制提供科学参考。

关键词： MAP3K1基因 HFSCs 细胞增殖细胞凋亡长江三角洲白山羊

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谷胱甘肽对湖羊精液低温保存效果的影响

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中国草食动物科学 2021年第5期41卷 23-26,36页

作者：龚常亮张柳明王彦虎康言郭裕娇 Tariq Sohail 李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

为探究谷胱甘肽(GSH)对湖羊精液低温保存效果的影响,在基础稀释液中分别添加了0(对照组)、2、4、8、10 mM的GSH,在4℃保存过程中对精子的活率、活力及直线速率等运动性能指标进行了检测。结果表明,与对照组相比,在保存1~3 d时,4~8 mM的... 详细信息

为探究谷胱甘肽(GSH)对湖羊精液低温保存效果的影响,在基础稀释液中分别添加了0(对照组)、2、4、8、10 mM的GSH,在4℃保存过程中对精子的活率、活力及直线速率等运动性能指标进行了检测。结果表明,与对照组相比,在保存1~3 d时,4~8 mM的GSH显著提高了精子活率(P<0.05),10 mM的GSH对精子活率没有显著影响(P>0.05);保存4~6 d时,4 mM的GSH显著提高了精子活率和精子运动性能(P<0.05)。说明GSH可以提高湖羊精液在低温保存下的质量,且以4 mM的GSH对湖羊精液的低温保存效果最好。

关键词：湖羊精液低温保存谷胱甘肽活率运动性能

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卵黄在湖羊精液常温保存中的作用效果

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中国畜牧杂志 2020年第8期56卷 125-131页

作者：张柳明 Tariq Sohail 马金亮冯云奎褚长江李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究常温保存稀释液中添加卵黄对湖羊精液保存效果的影响,本实验在基础稀释液中添加0(对照组)、5%、10%、15%和20%卵黄,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存0~72 h,5%和10%卵... 详细信息

为探究常温保存稀释液中添加卵黄对湖羊精液保存效果的影响,本实验在基础稀释液中添加0(对照组)、5%、10%、15%和20%卵黄,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存0~72 h,5%和10%卵黄添加组精子活率增强(P>0.05),15%和20%卵黄添加组精子活率降低(P>0.05);与对照组相比,保存96 h,5%、10%和15%卵黄添加组精子活率增强(P>0.05),20%卵黄添加组精子活率降低(P>0.05);与对照组相比,保存120~240 h,各卵黄添加组的精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率和侧摆幅度较对照组均有显著提高。因此,在本实验条件下,不同浓度卵黄在常温保存条件下保存不同时间对湖羊精液的保存效果不同,保存144 h内,添加5%卵黄的保存效果最好;保存144~216 h,添加15%卵黄量的保存效果最好;保存216 h后,添加20%卵黄的保存效果最好。

关键词：湖羊精液卵黄常温保存活力运动性能

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甘油在湖羊精液常温保存中作用效果研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2020年第5期41卷 69-74页

作者：张柳明马金亮冯云奎褚长江胡慧茹 TARIQ Sohail 王彦虎李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究甘油对湖羊精液常温保存效果的影响,在基础稀释液中添加0 (对照组)、2%、4%、6%和8%甘油,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存48~120 h时, 2%甘... 详细信息

为探究甘油对湖羊精液常温保存效果的影响,在基础稀释液中添加0 (对照组)、2%、4%、6%和8%甘油,检测16℃保存过程中湖羊精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和直线速率等运动性能指标。结果表明:与对照组相比,保存48~120 h时, 2%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P<0.05)和顶体完整率(P>0.05)提高;保存144~168 h时, 2%和4%甘油组精子活率(P>0.05)、质膜完整率(P<0.05)和顶体完整率(P>0.05)提高;保存192 h时,各甘油组精子活率(P<0.05)提高。随着甘油浓度的增加,直线速率、曲线速率、平均路径速率和侧摆幅度也表现为先升高后降低的趋势。在试验条件下,保存24 h内各甘油组均降低精液品质,保存48~120 h时2%甘油组精液品质提高,保存144~168 h时2%和4%甘油组精液品质提高,保存192 h时各甘油组精液品质均提高。

关键词：湖羊甘油精液常温保存精子运动性能

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GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白

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中国家禽 2020年第9期42卷 19-25页

作者：周鑫琦王颖洁张文慧张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到31... 详细信息

为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。

关键词： NOS2 GST pull-down 质谱分析技术蛋白质相互作用

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猪FUT3基因序列分析及其表达水平与F18大肠杆菌抗性的关系

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农业生物技术学报 2020年第11期28卷 2002-2010页

作者：杨荔周雅静包文斌吴正常吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

断奶仔猪腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)对国内外规模猪场造成了严重的经济损失,其中F18大肠杆菌(Escherichia coli F18, E. coli F18)是引起仔猪(Sus scrofa)细菌性腹泻的主要病原,本课题组前期通过测序和验证分析确定了一个E. coli... 详细信息

断奶仔猪腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)对国内外规模猪场造成了严重的经济损失,其中F18大肠杆菌(Escherichia coli F18, E. coli F18)是引起仔猪(Sus scrofa)细菌性腹泻的主要病原,本课题组前期通过测序和验证分析确定了一个E. coli F18受体相关分子—α-1, 3岩藻糖转移酶基因(α-1, 3-fucosyltransferase, FUT3)。为了探究猪FUT3基因的基本结构特征和功能,本研究以梅山猪为实验材料,利用PCR扩增克隆FUT3基因编码区,并结合生物信息学方法预测其蛋白质结构与功能,q RT-PCR检测其组织表达谱,免疫组化方法分析其组织定位与表达分布情况,同时检测E. coli F18菌体感染猪小肠上皮细胞(intestinal porcine epithelial cell line J2, IPEC-J2)前后FUT3 mRNA和蛋白质表达变化。结果显示,梅山猪FUT3基因编码区全长1 068 bp,编码361个氨基酸,为脂溶亲水性、不稳定的非分泌蛋白,其蛋白质序列中包括2个糖基化位点、29个磷酸化位点和2个不同的保守结构域(Glycotran10N和Glycotransf10);组织表达谱显示,FUT3基因在各个组织中均有一定表达,尤其在肠道组织(十二指肠,空肠和回肠)中表达水平较高;免疫组化显示,FUT3在E. coli F18敏感型仔猪十二指肠中表达水平显著高于抗性型(P<0.05),并且FUT3主要分布在小肠上皮细胞黏膜表面;不同E. coli F18菌体刺激IPEC-J2细胞后,FUT3 mRNA和其蛋白质表达水平均表现出极显著的上调(P<0.01);FUT3基因在E. coli F18敏感型断奶仔猪十二指肠中的表达水平极显著高于抗性组(P<0.01)。本研究成功克隆获得了梅山猪FUT3基因编码序列全长,从生物信息学层面了解其蛋白结构和功能,并在个体和细胞水平上初步证实了猪FUT3表达水平对E. coli F18抗性具有重要的调控作用,为今后深入探究猪FUT3基因功能和表达调控机制提供了一定的基础资料。

关键词：猪 α-(1,2)岩藻糖转移酶基因3(FUT3) 表达调控 F18大肠杆菌(E. coli F18)

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鸡lncRNA-CEPT8启动子验证及活性核心区域筛选

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中国家禽 2020年第6期42卷 15-20页

作者：金晶余昕健靳锴李婷婷张晨左其生李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223

研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观... 详细信息

研究旨在筛选鸡lncRNA-CEPT8启动子核心区域并验证其启动活性。采用qRT-PCR检测lncRNA-CEPT8在鸡不同组织中表达情况。生物信息学预测lncRNA-CEPT8启动子区域,PCR扩增启动子并构建pEGFP-lncCEPT8重组载体,转染DF-1细胞后48 h进行荧光观察。再构建启动子系列缺失载体(pGL3-p1、pGL3-p2、pGL3-p3、pGL3-p4、pGL3-p5),分别转染DF-1细胞后48 h检测双荧光素酶活性,分析缺失载体的启动活性。结果表明,lncRNA-CEPT8在鸡生殖嵴中特异性高表达,pEGFP-lncCEPT8重组载体转染DF-1细胞后有绿色荧光。缺失载体pGL3-p4与pGL3-p3相比,活性极显著下降(P<0.01)。研究明确了lncRNA-CEPT8上游-1174^-1 bp处为启动子,且-627^-429bp是启动子核心区域,为进一步研究其表达调控机制提供理论依据。

关键词：鸡启动子 lncRNA 核心区域

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猪m^6A去甲基化酶FTO、ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌F18感染抗性的关系分析

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中国畜牧兽医 2020年第9期47卷 2960-2967页

作者：齐晓艺杨荔吴正常包文斌吴圣龙扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRN... 详细信息

为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRNA表达差异,同时分别利用F18ab、F18ac大肠杆菌菌体刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),检测FTO、ALKBH5基因表达变化。结果表明,FTO、ALKBH5基因在抗性型个体十二指肠和空肠中的表达量均极显著或显著高于敏感型个体(P<0.01,P<0.05);不同F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后,FTO基因表达水平均无显著变化(P>0.05),而ALKBH5基因在F18ac刺激后表达量显著上调(P<0.05);LPS诱导4 h时,FTO和ALKBH5基因表达量均显著上调(P<0.05)。本研究在细胞和个体水平上初步验证并发现了m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌感染仔猪密切相关,为今后深入研究RNA去甲基化修饰在仔猪细菌性腹泻调控中的作用机制提供了理论基础。

关键词：猪 m6A甲基化 FTO基因 ALKBH5基因大肠杆菌

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