检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2025年第2期33卷 355-365页

作者：王哲武嵘峰耿晴晴赵梓多吴一凡程富富席一凡陈欣雨王春慧子牛英杰左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

禽类原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)具有能够从血液迁移而定植于生殖嵴的特点，因此PGCs不仅能替代受精卵开展遗传修饰，而且在禽类的种质资源保护和濒危物种的复原方面都具有重要的应用前景。现有的PGCs体外培养体系对于... 详细信息

禽类原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)具有能够从血液迁移而定植于生殖嵴的特点，因此PGCs不仅能替代受精卵开展遗传修饰，而且在禽类的种质资源保护和濒危物种的复原方面都具有重要的应用前景。现有的PGCs体外培养体系对于支持雌雄PGCs生长之间存在差异，满足不了PGCs在种质资源保护中的需求。针对这一问题，本研究以鸡(Gallus gallus domesticus) PGCs为研究对象，探究脂肪酸氧化(fatty acid oxidation, FAO)在PGCs形成中的功能，旨在为后续建立完善的PGCs体外培养体系提供理论参考。基于转录组学分析FAO在胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)向PGCs分化过程中的作用，通过CCK8与EdU实验探究FAO激活剂BMS-687453 (BMS)和抑制剂马来酸哌克昔林(perhexiline maleate, Per)的最适添加浓度；分别通过观察细胞形态、qRT-PCR检测FAO关键基因和PGCs特异标记基因的表达、间接免疫荧光和流式细胞分析等检测FAO在ESCs向PGCs分化过程中的作用。转录组学分析显示，参与FAO的相关基因在ESCs与PGCs中差异表达，且富集于生殖细胞分化相关通路(MAPK signaling pathway, GnRH signaling pathway, PI3K-Akt signaling pathway);qRT-PCR结果表明，乙酰辅酶A酰基转移酶2 (acetyl-Coacyltransferase 2, ACAA2)和烯酰辅酶A水合酶1 (enoyl-CoA hydratase 1, ECH1)在PGCs高表达。CCK8与EdU实验确定了BMS和Per的最适添加浓度分别为80和160 nmol/L。细胞形态观察结果显示，BMS组在培养6 d的细胞中，类胚体数目显著高于Per组(P<0.05);BMS组中鸡核糖核酸同源蛋白(chicken VASA Homolog, CVH)和酪氨酸激酶受体蛋白(c-Kit proto-oncogene receptor tyrosine kinase, C-KIT)的表达量显著高于Per组(P<0.05)；间接免疫荧光和流式细胞分析结果显示，BMS组的DDX4阳性细胞数显著高于Per组(P<0.05)。以上结果表明，高水平FAO能够促进PGCs的形成。本研究为建立完善的体外培养家禽PGCs体系提供理论依据，有助于从细胞能量代谢的角度系统地阐明PGCs的发生机理。

关键词：家禽脂肪酸氧化(FAO) 转录组分析原始生殖细胞(PGCs)

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代谢产物泛酸的筛选及其在原始生殖细胞形成过程中的功能验证

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中国家禽 2025年第1期47卷 15-23页

作者：程富富武嵘峰耿晴晴赵梓多王哲牛英杰左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后... 详细信息

研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后,分别通过观察细胞形态、qRT-PCR检测PGCs特异标记基因、间接免疫荧光和流式细胞分析等分析PA代谢在ESCs向PGCs分化过程中的作用。结果显示:参与PA代谢相关的基因在ESCs与PGCs中呈现差异性表达,且富集于生殖细胞分化相关的通路(Pantothenate and CoA biosynthesis、TGF-beta signaling pathway和AMPK signaling pathway);PA和PZ的适宜添加浓度分别为20μmol/L和80 nmol/L;PA组在第6天的类胚体数目显著低于PZ组,PA组中CVH和C-KIT3的表达量显著低于PZ组(P<0.01);PA组的DDX4阳性细胞数显著低于PZ组(P<0.01)。结果表明添加PA抑制PGCs的形成,添加PZ促进PGCs的形成。

关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞代谢物泛酸鸡

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柔嫩艾美耳球虫感染对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官和肠道形态的影响

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中国畜牧兽医 2025年第3期52卷 1263-1271页

作者：董理月范作堃唐美慧汤建强于海亮张涛张跟喜谢恺舟赵振华戴国俊扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 中国农业科学院家禽研究所扬州225125

【目的】探究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官及盲肠肠道形态结构的影响。【方法】7个半同胞家系黄羽肉鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后,根据球虫敏感性指标筛选出抗性和易感家系,组成抗性组和易感组,分别... 详细信息

【目的】探究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)感染对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官及盲肠肠道形态结构的影响。【方法】7个半同胞家系黄羽肉鸡在感染柔嫩艾美耳球虫后,根据球虫敏感性指标筛选出抗性和易感家系,组成抗性组和易感组,分别在感染期和恢复期比较分析不同抗性组间的生产性能、免疫器官和肠道形态结构的差异。【结果】无论是感染期还是恢复期,抗性与易感鸡平均体重和平均日增重均极显著低于对照组(P<0.01),料重比均极显著高于对照组(P<0.01)。在感染的不同时期,抗性组、易感组和对照组鸡胸腺、脾脏等7种免疫器官指数均差异不显著(P>0.05),但恢复期免疫器官指数高于感染期。此外,感染期抗性组与易感组鸡均出现盲肠黏膜坏死,肌层不完整、断裂等病理变化,易感组鸡盲肠上皮可见球虫配子;而恢复期抗性组鸡盲肠组织结构逐渐恢复至正常,易感组鸡盲肠组织各层结构仍呈现明显变性或坏死。【结论】无论处于感染期还是恢复期,感染柔嫩艾美耳球虫后抗性或易感鸡的生产性能均降低且肠道形态发生改变,但处于恢复期时,抗性鸡能逐渐恢复至健康状态,而易感鸡盲肠则出现不可逆的损伤。本研究结果为深入探究柔嫩艾美耳球虫感染恢复后对鸡的生产性能和肠道的影响提供了参考。

关键词：柔嫩艾美耳球虫黄羽肉鸡抗性生产性能肠道形态

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睾丸注射法制备携带山羊H-FABP基因的转基因小鼠

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遗传 2012年第6期34卷 727-735页

作者：阴彦辉孙敏陈庭锋张亚妮朱才业李伟李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

为探究睾丸注射法制备转基因动物的可能性,文章将携带有山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和绿色荧光蛋白标签的重组载体经脂质体包裹后随机打点注射小鼠睾丸。对实验小鼠进行睾丸切片、精子荧光检测以及精子DNA检测,证实外源基因在亲... 详细信息

为探究睾丸注射法制备转基因动物的可能性,文章将携带有山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和绿色荧光蛋白标签的重组载体经脂质体包裹后随机打点注射小鼠睾丸。对实验小鼠进行睾丸切片、精子荧光检测以及精子DNA检测,证实外源基因在亲代小鼠体内成功表达。睾丸注射后小鼠与正常母鼠交配产生的F1代,以及F1代自交产生的F2代在不同水平均可检测到外源基因的成功表达,阳性率分别为4%和30.23%。研究结果说明睾丸注射是一种制备转基因动物行之有效的方法,且外源基因可以稳定遗传。该方法的完善和成熟对于动物转基因以及动物性状改良和育种具有理论和实践意义。

关键词：睾丸注射转基因小鼠心脏型脂肪酸结合蛋白

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徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析

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遗传 2014年第8期36卷 793-799页

作者：韦光辉李东左其生张亚妮朱睿张蕾刘志永邱峰龙李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

为确定徐淮山羊Oct4(Octamer-binding transcription factor 4)基因启动子活性区域,并初步探讨TSA(Trichostatin A)和VPA(Valproic acid)对Oct4基因启动子活性的调控作用,文章采用Primer5.0设计包含Oct4基因启动子不同长度片段的特异性PCR引物,扩增并定向克隆至PGL3-Bacic荧光素酶报告载体,分别转染gEF、P19和COS7细胞,通过TSA和VPA诱导,进行双荧光报告基因活性检测。同时用Oct4启动子–1516^+30 bp片段替换pEGFP-N1中的CMV启动子,通过GFP荧光表达检测Oct4启动子的活性。结果表明:在gEF、P19和COS7细胞中Oct4启动子各片段均表现出不同程度的活性,且最强活性区域为上游–1516^+30 bp,基本活性区域为–238^+30 bp;在–1516~–946 bp、–615~–96 bp区域存在正调控元件,在–1936~–1516 bp、–946~–615 bp区域存在负调控元件;终浓度为1μmol/L的TSA和4 mmol/L的VPA为诱导的最佳浓度,均能显著增强Oct4基因启动子的活性;–1516^+30 bp片段能够启动GFP的表达。研究结果为揭示Oct4基因的转录调控机制奠定了基础。

关键词： Oct4 启动子活性 TSA VPA 诱导

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鸡CREPT基因的克隆及其在鸡DF-1细胞中的表达

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农业生物技术学报 2017年第2期25卷 186-195页

作者：靳锴余昕健赵瑞丰王颖洁左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

本研究旨在检测CREPT(cell-cycle related and expression-elevated protein in tumor)基因的组织表达特异性,克隆其编码区并构建重组载体转染DF-1(D fibroblast-1,DF-1)细胞并制备多克隆抗体,为初步研究鸡(Gallus gallus)CREPT基因参与调控细胞周期的生物学功能提供理论依据。以鸡生殖嵴cDNA为模板扩增CREPT基因CDS区,并对该基因进行了蛋白质结构预测和组织表达谱分析。将该基因与pcDNA3.1和pEGFP-N1载体相连获得重组表达载体pcDNA3.1-CREPT和pEGFP-CREPT之后,转染鸡DF-1细胞,并采用基因免疫法制备CREPT基因多克隆抗体并检测效价,利用qRT-PCR检测过表达CREPT基因后DF-1细胞内相关基因的表达情况。生物信息学分析发现,鸡CREPT编码区序列总长978bp,编码325个氨基酸,该氨基酸序列中存在一个RPR结构域(regulation of nuclear pre-m RNA domain)和卷曲结构域;以原鸡(***)CDS序列为模板成功克隆的如皋黄鸡(***)CREPT基因长978 bp,测序结果准确,与原鸡CDS序列一致,同源性100%;组织表达谱分析显示,CREPT在睾丸、卵巢和大脑中m RNA表达量较高(P<0.01),而在肠组织(P<0.01)、骨骼肌(P<0.05)和脾脏(P<0.05)中的m RNA表达量较低;成功构建重组表达载体pcDNA3.1-CREPT和pEGFP-CREPT;转染融合表达载体pEGFP-CREPT后显示,CREPT表达于DF-1细胞质中;使用基因免疫法制备多克隆抗体血清,免疫荧光检测(immunogen fluorescent assay,IFA)检测显示,制备的多克隆抗体最佳效价为1∶10,Western blot证实,pcDNA3.1-CREPT真核表达载体成功表达且抗血清效果良好,qPCR检测结果表明,pcDNA3.1-CREPT载体能够在DF-1上过表达CREPT基因,并引起细胞周期调控相关基因p15RS(P15 related gene on G1/S progression)、转录因子4(transcription factor 4,TCF4)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和β-链蛋白(b-catein)的表达变化。本研究成功克隆了鸡CREPT基因,并制备了具有特异性的多克隆抗体,该基因在DF-1细胞质中表达,CREPT基因的表达能下调p15RS基因的表达(P<0.01),上调TCF4(P<0.05)、cyclinD1(P<0.01)和b-catein(P<0.01)的表达,该研究结果为进一步研究鸡CREPT基因的生物学功能提供了理论依据。

关键词： CREPT基因鸡真核表达载体多克隆抗体 DF-1细胞表达调控

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鸡gga-miR-31-5p启动子真核表达载体的构建及其转录因子结合位点预测

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浙江农业学报 2022年第4期34卷 713-719页

作者：邓哲宇王乙婷王颖洁胡菜吴宇慧赵宗仪左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。... 详细信息

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性。利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点。结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体。体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点。研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡 gga-miR-31-5p 启动子转录因子

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光照时间和环境温度对种鹅繁殖系统及相关激素mRNA表达、分泌的影响

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中国农业科学 2015年第13期48卷 2635-2644页

作者：杨海明巨晓军王志跃丁家桐王信喜陈永华扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室

【目的】研究光照时间和环境温度对扬州鹅种鹅繁殖系统及相关激素m RNA表达、分泌的影响,探明光照时间和环境温度对种鹅繁殖机能的作用特点。【方法】取接受自然光照且日照时长逐渐缩短的200日龄种鹅作为试验对象,试验初期日照时长约为9... 详细信息

【目的】研究光照时间和环境温度对扬州鹅种鹅繁殖系统及相关激素m RNA表达、分泌的影响,探明光照时间和环境温度对种鹅繁殖机能的作用特点。【方法】取接受自然光照且日照时长逐渐缩短的200日龄种鹅作为试验对象,试验初期日照时长约为9.7 h·d-1、气温5℃左右。采用2×3完全随机试验设计,设2个温度处理(0—5℃、25—30℃)和3个光照时间处理(8、12、16 h),其中光照时间处理在正常白昼基础上进行增减,将120只成年母鹅随机分至6个处理组,每个处理组20只,全封闭饲养,自由采食、饮水。试验第30天,从每个处理随机取5只鹅翅静脉采血3 m L,用于测定相关激素指标,同时从每个处理中随机取3只鹅,屠宰,取下丘脑和垂体速冻、超低温保存,用于测定相关基因表达量;分离生殖系统,进行重量或长度测定,同时取输卵管膨大部制作组织切片。【结果】116 h光照处理组种鹅血清促黄体素(LH)浓度显著高于8 h和12 h光照处理组(P<0.05),16 h光照处理组种鹅血清催乳素(PRL)浓度显著高于12 h光照处理组(P<0.05)。高温(25—30℃)处理组种鹅血清PRL浓度显著高于低温(0—5℃)组(P<0.05)。光照时间和环境温度处理对种鹅血清LH、PRL和雌二醇(E2)浓度的影响存在显著互作效应(P<0.05)。212 h光照处理组种鹅卵巢指数、卵泡指数均显著大于16 h光照处理组(P<0.05),8 h光照处理组种鹅卵泡数显著大于16 h光照处理组(P<0.05),12 h光照处理组种鹅输卵管长显著大于8 h、16 h光照处理组(P<0.05);环境温度对种鹅卵巢指数、卵泡指数、卵泡数、输卵管指数和输卵管长未产生显著影响(P>0.05)。38、12 h光照处理组和高温处理组种鹅的输卵管膨大部颜色鲜红,假复层柱状上皮和固有层均较厚,皱褶明显,分泌腺丰富;16 h光照处理组、低温处理组种鹅的输卵管膨大部颜色暗红,假复层柱状上皮和固有层较薄,皱褶模糊,分泌腺较少。416 h光照处理组种鹅垂体PRL基因表达量极显著高于8、12 h光照处理组(P<0.01)。5光照时间与环境温度对种鹅生殖系统、激素基因表达影响的互作效应不显著(P>0.05)。【结论】16 h长光照抑制了卵巢、卵泡的生长发育,12 h光照增长了输卵管的长度;16 h长光照提高了PRL基因的表达丰度。综合各方面的情况,长光照抑制了种鹅的繁殖机能,扬州鹅种鹅的最适光照时间为12 h。高温提高了种鹅血清LH、PRL浓度,低温影响了输卵管组织结构,故种鹅饲养期间要适当控温,尽量避免种鹅暴露于极端温度环境。

关键词：光照温度种鹅生殖激素繁殖机能

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靶向鸡Stra8基因的miRNA预测及鉴定

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浙江农业学报 2017年第5期29卷 729-736页

作者：王颖洁左其生张良良张文慧金晶王飞纪艳芹靳锴何娜娜李碧春张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为克隆如皋黄鸡Stra8基因的3’UTR,寻找靶向Stra8基因的microRNA(miRNA),以鸡精原干细胞的c DNA为模板,根据NCBI数据库Stra8的CDS序列设计引物,通过3’RACE技术克隆Stra8基因的3’UTR,并构建相应的荧光素酶表达载体和突变载体;利用生物... 详细信息

为克隆如皋黄鸡Stra8基因的3’UTR,寻找靶向Stra8基因的microRNA(miRNA),以鸡精原干细胞的c DNA为模板,根据NCBI数据库Stra8的CDS序列设计引物,通过3’RACE技术克隆Stra8基因的3’UTR,并构建相应的荧光素酶表达载体和突变载体;利用生物学预测软件对靶向Stra8 3’UTR的miRNA进行预测,选择评分最高的miRNA进行慢病毒载体构建;以pRL-TK为内参,分别将miRNA与Stra8 3’UTR荧光素酶表达载体和突变载体共转染DF-1细胞,利用双荧光素酶基因报告系统对miRNA进行活性检测。结果表明,采用3’RACE技术成功克隆Stra8基因的3’UTR;Targetscan生物在线软件预测到靶向Stra8基因的4个特异性较高的miRNA,并成功构建其相应的慢病毒载体;双荧光素酶活性检测结果显示,gga-miR-1a、gga-miR-31、ggamiR-218均可通过3’UTR序列抑制Stra8基因的表达,其中gga-miR-31抑制效果最佳。该结果可为后续深入探讨gga-miR-31介导调控的Stra8基因在雄性生殖细胞分化中的调控网络提供依据。

关键词：鸡 miRNA Stra8 gga-miR-31 双荧光素酶活性检测系统

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徐淮山羊c-Myc基因启动子的克隆及其功能的初步分析

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畜牧兽医学报 2014年第4期45卷 533-540页

作者：韦光辉左其生李东张亚妮刘志永朱睿邱峰龙李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

本研究旨在确定徐淮山羊c-Myc基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨c-Myc基因的表达调控机制。根据UCSC基因组数据库已公布的绵羊c-Myc基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增c-Myc基因的一系列启动子缺失片段,定向... 详细信息

本研究旨在确定徐淮山羊c-Myc基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨c-Myc基因的表达调控机制。根据UCSC基因组数据库已公布的绵羊c-Myc基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增c-Myc基因的一系列启动子缺失片段,定向克隆至pEGFP-N1和PGL3-c-Myc,分别转染gFF、COS7及P19细胞,并进行TSA和NFAT1诱导,同时对-402^-249bp区域的转录因子SP1结合位点进行定点突变,最后进行双荧光报告基因活性检测。结果表明,徐淮山羊c-Myc基因5′侧翼区-1 334^+1bp区域的启动子活性最强,-402^+1bp区域为c-Myc基因启动子基本活性区域。进一步研究发现,-1 334^-971bp、-587^-147bp区域存在正调控元件,-1 976^-1 334bp、-971^-587bp区域存在负调控元件。TSA和NFAT1均能增强cMyc启动子的活性,SP1结合位点定点突变后,启动子活性降低。本试验通过构建包含c-Myc基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性,确定了c-Myc基因启动子的核心区域,发现转录因子SP1是c-Myc基因启动子核心区域的调控元件,为进一步研究c-Myc基因的表达调控机制奠定了基础。

关键词： c-Myc基因启动子 TSA NFAT1 SP1 定点突变活性分析

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