检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第5期23卷 388-392页

作者：季明春陈红菊严华申厚凤扬州大学医学院微生物学及免疫学教研室 225001

目的　克隆耐药性淋病奈瑟球菌菌株与标准参考菌株之间的差异核苷酸序列。方法应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌与标准参考菌株差异DNA消减文库。结果　成功地构建了高特异性的淋球菌耐药菌株DNA消减文库。经对消减文库初步筛选 ... 详细信息

目的　克隆耐药性淋病奈瑟球菌菌株与标准参考菌株之间的差异核苷酸序列。方法应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌与标准参考菌株差异DNA消减文库。结果　成功地构建了高特异性的淋球菌耐药菌株DNA消减文库。经对消减文库初步筛选 ,对其中 5个克隆插入的DNA片段进行测序 ,经GenBank和淋球菌基因组序列库检索分析 ,证明 5个片段均为未知新序列。结论　淋球菌耐药性相关核苷酸序列的发现将为防治淋球菌感染和研究抗淋球菌抗生素提供新的实验工具。

关键词：淋球菌核苷酸序列耐药性抗生素抑制性消减杂交技术

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HCMV pp150抗原基因在蚕豆中的遗传转化及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1150-1154页

作者：严华李国才焦红梅陈红菊扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室 225001

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信... 详细信息

目的研制人巨细胞病毒(HCMV)口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物,PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游,3′端引入了内质网滞留信号KDEL序列,将修饰后的基因片段克隆进载体pBI121,构建了带潮霉素(Hyg)选择抗性基因的植物表达载体pCAM- BIA1300/pp150和根癌农杆菌工程菌EHA105;采用叶盘法转化蚕豆,获得了5株抗性植株,通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分析鉴定,确认了3株为转基因植株。通过ELISA和Western blot对这3株的蛋白萃取物进行分析,以鉴定其免疫学活性。结果这3株转基因植株表达的PP150蛋白具有免疫原活性。结论这些转基因植株为HCMV口服疫苗的研究提供了条件。

关键词：人巨细胞病毒 pp150 口服疫苗转基因蚕豆

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D3细胞的制备及其对几种病原体的敏感性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第4期26卷 343-347页

作者：严华李国才陈红菊龚卫娟季明春扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室 225001

目的制备基因转染(D3)细胞并测定能引起先天性感染的几种病原体的敏感性。方法HEP-2细胞的DNA转染人胚肺细胞(HEL),得到基因转染细胞,命名为D3细胞。分析D3细胞的核型。研究丹参对D3细胞促增殖作用和丹参对病原体不同的促增殖作用。普... 详细信息

目的制备基因转染(D3)细胞并测定能引起先天性感染的几种病原体的敏感性。方法HEP-2细胞的DNA转染人胚肺细胞(HEL),得到基因转染细胞,命名为D3细胞。分析D3细胞的核型。研究丹参对D3细胞促增殖作用和丹参对病原体不同的促增殖作用。普通显微镜观察病原体感染D3细胞后的细胞病变。免疫荧光试验研究D3细胞对病原体的敏感性。电子显微镜观察由D3 细胞培养物纯化的病原体形态。在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,分别纯化病原体制作抗原,检测 1196份孕妇血清特异性抗体(IgG、IgM)。结果传代5-100代的D3细胞的染色体数均是96。丹参 (SMB,100 μg／ml)对D3细胞和病原体有明显的促增殖作用。D3细胞感染病原体后72 h,均出现明显的细胞病变效应(CPE)和荧光阳性细胞。电镜下见到了病原体典型的形态。结论永生性的D3细胞可用于培养病原体,所培养的病原体可制备用于诊断的抗原。

关键词：先天性感染 DNA转染 HEL HEP-2 丹参

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耐药淋球菌相关核苷酸序列的克隆与初步分析

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微生物学通报 2004年第1期31卷 75-78页

作者：季明春钱莉陈红菊扬州大学医学院微生物学及免疫学教研室扬州225001

为克隆淋球菌染色体耐药相关核苷酸序列 ,我们利用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌与标准参考菌株差异DNA消减文库 ,从中筛选淋球菌耐药相关核苷酸序列。通过初步筛选 ,对克隆得到的DNA片段进行测序 ,经GenBank和淋球菌基因组序列... 详细信息

为克隆淋球菌染色体耐药相关核苷酸序列 ,我们利用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌与标准参考菌株差异DNA消减文库 ,从中筛选淋球菌耐药相关核苷酸序列。通过初步筛选 ,对克隆得到的DNA片段进行测序 ,经GenBank和淋球菌基因组序列库检索分析 ,发现 5个未知新核苷酸序列。这些核苷酸序列可能与淋球菌染色体耐药性相关 ,将为研究淋球菌耐药性提供新的实验对象。

关键词：淋球菌染色体耐药核苷酸序列

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耐药淋球菌差异DNA消减文库的构建及初步筛选

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中华皮肤科杂志 2003年第5期36卷 264-266页

作者：季明春严华陈红菊申厚凤扬州大学医学院微生物学及免疫学教研室225001

目的克隆和研究耐药性淋球菌相关基因.方法从耐药淋球菌株RSM292C4和淋球菌标准参考菌株WHO-A细胞中提取DNA,经Rsa Ⅰ酶切后,应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌差异DNA消减文库并进行初步筛选.结果耐药淋球菌差异DNA消减文库经扩... 详细信息

目的克隆和研究耐药性淋球菌相关基因.方法从耐药淋球菌株RSM292C4和淋球菌标准参考菌株WHO-A细胞中提取DNA,经Rsa Ⅰ酶切后,应用抑制性消减杂交技术构建耐药性淋球菌差异DNA消减文库并进行初步筛选.结果耐药淋球菌差异DNA消减文库经扩增获得约2 500个白色克隆,随机挑取96个白色克隆,进行PCR扩增鉴定,发现克隆中插有100～600 bp大小的片段.分别以RsaI酶切样本和参照DNA为探针,与随机挑取的96个白色菌落质粒作点杂交,有5个克隆仅能与样本DNA探针杂交,而不能与参照DNA探针杂交,表明它们为RSM292C4基因组DNA所特有,可能代表某些淋球菌新基因.对这5个克隆插入的DNA片段进行测序,经送基因库和淋球菌基因组部分测序基因库检索分析,发现5个片段均为未知新序列.结论淋球菌耐药菌株DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆淋球菌耐药的新基因奠定了基础.

关键词：耐药淋球菌抑制性消减杂交基因文库药物耐受 DNA序列分析

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淋病奈瑟菌rmp基因缺失突变株的构建及其抗体杀菌作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第8期33卷 578-582页

作者：李国才解如山冒艳丽刘双喜焦红梅陈红菊严华季明春扬州大学医学院微生物学与免疫学教研室 225001 菏泽医学专科学校

目的研究淋病奈瑟菌的外膜蛋白Rmp在免疫阻抑中的作用及其消除策略。方法PCR扩增淋病奈瑟菌rmp基因，将rmp中间200个核苷酸残基用卡那霉素抗性基因Kan取代，含rmp两侧侧翼区和Kan的DNA片段△rmp：Kan转化淋病奈瑟菌WHO—A菌株，PCR和Wes... 详细信息

目的研究淋病奈瑟菌的外膜蛋白Rmp在免疫阻抑中的作用及其消除策略。方法PCR扩增淋病奈瑟菌rmp基因，将rmp中间200个核苷酸残基用卡那霉素抗性基因Kan取代，含rmp两侧侧翼区和Kan的DNA片段△rmp：Kan转化淋病奈瑟菌WHO—A菌株，PCR和Westernblot鉴定野生rmp被突变基因（△rmp：：Kan）取代并不能表达Rmp的突变株。突变株免疫小鼠，并用抗体介导的补体杀菌作用研究免疫血清的抗菌活性。结果构建了珊p基因缺失的淋病奈瑟菌突变株，突变株诱生的抗体具有更强的杀伤淋病奈瑟菌活性。结论淋病奈瑟菌丌印基因缺失突变株可能消除了野生株中Rmp的免疫阻抑作用，在新型全细胞减毒活疫苗研制中具有潜在应用价值。

关键词：淋病奈瑟菌同源重组 rmp基因缺失突变株减毒活疫苗

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人巨细胞病毒pp150抗原区的原核表达及初步应用

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病毒学报 2004年第2期20卷 169-171页

作者：李国才严华季明春申厚凤陈红菊焦红梅万兵扬州大学医学院微生物学免疫学教研室扬州225001

To make up an engineered *** strain for expression of antigenic determinants of pp150 of human cytomegalovirus,the gene encoding the 420-752 amino acid peptides of pp150 was amplified from human cytomegalovirus AD169 by RT-PCR and cloned into Nde I/BamHⅠ sites in *** recombinant plasmid was transformed into *** BL21(DE3)and a foreign protein about 35 kD were detected by SDS-PAGE and Western blotting *** antiserum prepared by using prokaryotic expressed product as antigen turned to be against pp150 specifically and had low neutralization effect to HCMV.

关键词：人巨细胞病毒 pp150 抗原原核表达疫苗 HCMV

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岩黄连总生物碱对小鼠免疫功能的影响

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免疫学杂志 1995年第4期11卷 238-241页

作者：童鲲吴练中梁益永扬州大学医学院免疫学和微生物学教研室

本文研究了岩黄连总生物碱（ＣＳＢＴＡ）对小鼠免疫功能的调节作用，发现ＣＳＢＴＡ在体内增强溶血空斑值和增强小鼠的迟发型超敏反应。在体外增强同种异型小鼠脾细胞的混合培养反应和增强有丝分裂原刺激脾细胞的增殖反应，另外ＣＳＢ... 详细信息

本文研究了岩黄连总生物碱（ＣＳＢＴＡ）对小鼠免疫功能的调节作用，发现ＣＳＢＴＡ在体内增强溶血空斑值和增强小鼠的迟发型超敏反应。在体外增强同种异型小鼠脾细胞的混合培养反应和增强有丝分裂原刺激脾细胞的增殖反应，另外ＣＳＢＴＡ增强Ｔ细胞产生ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ的水平，提示ＣＳＢＴＡ在免疫调节中是一种增强剂。

关键词：岩黄连总生物碱迟发型超敏反应白细胞介素2

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奈瑟氏淋球菌表面蛋白A基因克隆及在真核细胞中的表达研究

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微生物学报 2004年第1期44卷 104-106页

作者：季明春陈红菊扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室扬州225001

为了研制奈瑟氏淋球菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(NeisseriasurfaceProteinA ,NspA)的核酸疫苗 ,根据淋球菌NspA的基因序列 ,设计一对寡核苷酸引物。以淋球菌WHO A菌株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得具有完整开放读码框架 (ORF)的Nsp... 详细信息

为了研制奈瑟氏淋球菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(NeisseriasurfaceProteinA ,NspA)的核酸疫苗 ,根据淋球菌NspA的基因序列 ,设计一对寡核苷酸引物。以淋球菌WHO A菌株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得具有完整开放读码框架 (ORF)的NspA基因 ,并将其正向插入真核表达载体pCMVscript,成功构建了表达NspA基因的真核细胞表达载体pcNspA。用脂质体包裹pcNspA重组质粒转染COS细胞 ,以间接免疫荧光分析法分析NspA基因的表达 ,发现转染pcNspA的COS细胞能高表达NspA抗原。淋球菌免疫保护性抗原NspA基因的克隆与真核细胞表达。

关键词：奈瑟氏淋球菌表面蛋白A 克隆表达

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淋球菌NspA基因克隆及序列分析

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中华皮肤科杂志 2004年第5期37卷 299-300页

作者：季明春蒋桂花扬州大学医学院微生物学和免疫学教研室 225001

奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria Surface Protein A,NspA)是新近发现的一个具有较强免疫原性和保守性的抗原,是淋球菌疫苗研究的理想侯选者之一[1].现克隆淋球菌NspA全长基因,为进一步的淋球菌基因疫苗研究奠定基础。

关键词：淋球菌 NspA 基因克隆序列分析奈瑟菌表面蛋白A

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