检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2011年第8期33卷 14-18页

作者：张文俊薛涛吴小伟张妍钟蕾彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

本文就2008年在江苏某鸡场分离到的一株发生抗原变异的H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)开展如下研究:利用反向遗传技术,删除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,再与wt-DT株的神经氨酸... 详细信息

本文就2008年在江苏某鸡场分离到的一株发生抗原变异的H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)开展如下研究:利用反向遗传技术,删除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,再与wt-DT株的神经氨酸酶(NA)基因组合,结合鸡胚高产病毒PR8株的6个内部片段骨架,构建针对此种变异H5亚型禽流感的疫苗株,结果成功拯救出重组病毒rH5N1/PR8。病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,相对于wt-DT株,rH5N1/PR8在MDCK细胞上的繁殖能力明显提高。rH5N1/PR8对SPF鸡和鸡胚无致病性,在鸡体内的免疫保护效果良好,符合疫苗候选株的标准。

关键词：禽流感病毒反向遗传 H5亚型疫苗

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鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2011年第2期32卷 1-5页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装... 详细信息

选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。

关键词：新城疫病毒鸡胚成纤维细胞酵母双杂交 cDNA文库 SMART技术

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鹅源新城疫病毒M蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 331-335页

作者：段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵... 详细信息

为了筛选鹅源新城疫病毒(JS/5/05/Go)M蛋白与鸡胚成纤维细胞作用的靶蛋白,应用酵母双杂交技术构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M。采用RT-PCR方法从鹅源新城疫病毒中扩增了M基因片段,将其克隆到pGEM-T载体中,经测序鉴定正确后,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酿酒酵母Y187,并验证其在酵母细胞中有无自激活和毒性作用。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-M,并证明其对报告基因无自激活作用,且对酵母细胞无毒性。表明诱饵载体pGBKT7-M可用于酵母双杂交系统寻找与M蛋白相互作用的蛋白质。

关键词：新城疫病毒 M蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用

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细胞悬浮培养技术生产疫苗的研究进展

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中国家禽 2011年第13期33卷 45-47页

作者：张妍张文俊赵坤坤李群辉刘晓文刘文博刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

传统的疫苗生产方法受很多因素的限制,为了适应扩大化工业生产的需要,细胞悬浮培养技术已经在工业生产上日益成熟,本文就此项技术中关于悬浮培养的细胞性能、细胞悬浮培养驯化的方法、悬浮培养细胞培养基的优化、生物反应器种类等要素... 详细信息

传统的疫苗生产方法受很多因素的限制,为了适应扩大化工业生产的需要,细胞悬浮培养技术已经在工业生产上日益成熟,本文就此项技术中关于悬浮培养的细胞性能、细胞悬浮培养驯化的方法、悬浮培养细胞培养基的优化、生物反应器种类等要素进行概述,并对此技术在疫苗生产中的应用作了展望。

关键词：细胞悬浮培养疫苗生产

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不同禽类在H5N1亚型高致病性禽流感流行中的作用

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中国家禽 2011年第10期33卷 38-41页

作者：赵国刘金彪刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

H5亚型高致病性禽流感在野生水禽中进化很慢,传给陆禽后其进化速度大大加快,当一些病毒在陆禽适应且毒力增强后又会反传给野生水禽。虽然野生水禽在感染高致病性禽流感后不能长久维持和储存病毒,但可以促进高致病性禽流感病毒远距离传... 详细信息

H5亚型高致病性禽流感在野生水禽中进化很慢,传给陆禽后其进化速度大大加快,当一些病毒在陆禽适应且毒力增强后又会反传给野生水禽。虽然野生水禽在感染高致病性禽流感后不能长久维持和储存病毒,但可以促进高致病性禽流感病毒远距离传播。与此同时,家养水禽在陆禽与野生水禽之间的流感病毒传播上起着非常重要的媒介和放大器作用,它们既可以携带多种亚型的低致病性禽流感病毒,又能长期储存陆禽来源的高致病性禽流感病毒,尤其是家鸭,无论是否免疫,抗体水平高低,都能带毒排毒,将高致病性禽流感病毒在野生水禽与陆禽间的传播放大。

关键词：高致病性禽流感水禽陆禽

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7种鸭源细菌的分离与16S rDNA测序鉴定

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中国兽医杂志 2011年第10期47卷 13-16页

作者：孙化露陈冰李树纯陈素娟彭大新扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌。根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株。以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌... 详细信息

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌。根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株。以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、铜绿假单胞杆菌、施氏假单胞菌、浅绿气球菌和麦氏棒杆菌。前3种为鸭的常见分离菌,其余的较为少见。因此在鸭病控制过程中应注意可能存在一些不常见细菌的混合感染。

关键词：鸭细菌致病 16S rDNA

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鸭源H5亚型禽流感全禽源分子标记疫苗候选株的构建

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畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 685-691页

作者：张文俊薛涛吴小伟唐应华彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

为了开发用于南方水禽且适合血清学监测的H5亚型禽流感疫苗,作者通过反向遗传技术,删除A/mal-lard/Huadong/S/2005(H5N1,S株)病毒HA编码多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,分别与A/duck/Eng-land/1/1956(H11N6,E株)和A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2,F株)的NA组合,再以本室禽源高产病毒F株的6个内部片段为骨架,构建全部基因都来自禽流感的疫苗株。成功拯救出2株重组病毒,分别命名为rH5N6/F和rH5N2/F,并引入分子标记N6和N2。重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,且rH5N6/F更适合在鸡胚中生产,对SPF鸡和鸡胚无致病性。重组病毒在clade2.3.4毒株中具有很好的抗原代表性,引入的分子标记有利于血清学监测的区分,为防控水禽H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株。

关键词：禽流感病毒反向遗传 H5 DIVA疫苗

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鸭肠炎病毒囊膜蛋白gB和gC主要抗原域的原核表达与鉴定

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中国家禽 2011年第2期34卷 22-25,28页

作者：张小荣董广阔成大荣朱善元吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300

根据GenBank中已经发表的鸭肠炎病毒(DEV)基因组序列,在抗原性分析的基础上,设计5对引物,以DEV标准强毒株DPV-F37基因组DNA作为模板分别扩增DEVgB基因主要抗原域编码区(328～552nt、667～1164nt和1519～1797nt)和gC基因主要抗原域编码区... 详细信息

根据GenBank中已经发表的鸭肠炎病毒(DEV)基因组序列,在抗原性分析的基础上,设计5对引物,以DEV标准强毒株DPV-F37基因组DNA作为模板分别扩增DEVgB基因主要抗原域编码区(328～552nt、667～1164nt和1519～1797nt)和gC基因主要抗原域编码区(67～402nt和472～837nt)。将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-gB1、pGEX-6P1-gB2、pGEX-6P1-gB3、pGEX-6P1-gC1和pGEX-6P1-gC2。将重组表达载体转化至BL21宿主菌,经IPTG诱导,外源基因获得了良好表达,融合蛋白大小分别为35、45、37、38和40ku左右。以兔抗DEV多抗血清进行Western blot分析,抗血清与表达的5种融合蛋白均能发生特异性反应。结果提示所有表达出的目的蛋白均具有与天然蛋白相似的反应原性。

关键词：鸭肠炎病毒 gB基因 gC基因原核表达

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体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第10期27卷 1098-1102页

作者：孔桂美张小荣刁亚利吴克艳刘秋云卜平扬州大学医学院中医系中西医结合临床教研室江苏扬州225001 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学医学院附属第二医院胸心外科江苏扬州225001

目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得... 详细信息

目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础。方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1-VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb。通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定。结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链。5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成。结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础。

关键词：人VEGF165 单克隆抗体 HUVEC 血管形成细胞迁移

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蛋鸡血管瘤型J亚群禽白血病病毒的分离与鉴定

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中国家禽 2011年第3期33卷 26-29页

作者：侯新华申茂欣鹿欣伦楚电峰刘东孙健左青山杜元钊扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266032

通过临床观察、剖检、接种DF-1细胞、间接免疫荧光试验和PCR等方法,从安徽父母代种鸡场、青岛平度和沙子口某商品蛋鸡场分离到3株血管瘤型J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为AH-101、PD-101、SZK-101。采集病鸡的血液、肝脏和脾脏组织... 详细信息

通过临床观察、剖检、接种DF-1细胞、间接免疫荧光试验和PCR等方法,从安徽父母代种鸡场、青岛平度和沙子口某商品蛋鸡场分离到3株血管瘤型J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为AH-101、PD-101、SZK-101。采集病鸡的血液、肝脏和脾脏组织,接种DF-1细胞分离病毒,提取DNA,用PJ1/PJ2ALV-J引物进行PCR扩增结果为阳性,IFA检测为阳性。用J3/J4引物扩增gp85并测序,序列分析发现,3株毒株与国内外各ALV-J的相应核苷酸相似性为91.6%～96.9%,氨基酸序列的同源性为83.4%～96.9%。系统进化分析表明,AH-101和PD-101与原型株HPRS-103的亲缘关系最近,SZK-101与美国株AF247391的亲缘关系最近。

关键词：禽白血病病毒 J亚群血管瘤分离鉴定

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