检索结果-内蒙古大学图书馆

简化cDNA末端快速扩增技术测定基因Ⅲ、Ⅵb和Ⅶd型新城疫病毒基因组末端序列及分析

微生物学报 2009年第7期49卷 965-971页

作者：仇旭升孙庆王伟伟董丽吴双胡顺林吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

【目的】简化cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNAends,RACE)流程,测定基因Ⅲ、Ⅵb和Ⅶd型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因组两侧末端序列,并对NDV的leader和trailer进行分析。【方法】利用T4 RNA连接酶将特定寡聚核苷酸片段的连接于病毒基因组RNA和cDNA,再利用RT-PCR或PCR方法对病毒基因组的末端进行快速的扩增。【结果】建立一套操作简单、低成本、可重复性高的RACE方法,测定了三种基因型5株NDV3’末端leader和5’末端trailer序列比对分析。【结论】本实验测定的鹅源VII型毒株JS/7/05/Ch基因组的15,184 nt由一个T变为了C,5’端trailer与3’端leader的连续互补序列由8 nt变为12 nt,而其它4株基因Ⅲ型和VI型NDV均未发现该突变。通过RNA的二级结构分析,NDV基因组和反向基因组RNA的3’末端形成一个发卡结构。JS/7/05/Ch等3株NDV U→C(T→C)的突变位于发卡环上,不影响二级结构的形成,发卡环的RNA序列突变为3’-UCUC-5’,与基因组3’端发卡环的3’-UCUUA-5’相似,推测可能影响了基因组RNA的复制速度。

关键词： cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends RACE) 基因Ⅲ型基因VIb型新城疫病毒基因组3’末端(1eader) 基因组5’末端(trailer)

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共表达H5亚型禽流感病毒HA基因和鸡IL-2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力研究

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病毒学报 2009年第6期25卷 430-436页

作者：云水丽张伟刘武杰张小荣陈素娟吴艳涛彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

将H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因和鸡白介素(chiIL-2)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体p12LS的启动子Ps和PE/L下游,使这两个基因反向串联,构建携带AIV HA基因和chiIL-2基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒p12LSH5AIL2。将重组鸡痘病... 详细信息

将H5亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因和鸡白介素(chiIL-2)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体p12LS的启动子Ps和PE/L下游,使这两个基因反向串联,构建携带AIV HA基因和chiIL-2基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒p12LSH5AIL2。将重组鸡痘病毒转移载体质粒转染至已感染野生型鸡痘病毒282E4株的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,经蓝斑筛选获得纯化的重组鸡痘病毒rFPV-H5AIL2。间接免疫荧光试验表明重组鸡痘病毒能够表达H5亚型AIV HA;RT-PCR和间接免疫荧光试验证实重组鸡痘病毒可表达chiIL-2。SPF鸡和商品蛋鸡的免疫攻毒保护试验表明,经rFPV-H5AIL2免疫的试验鸡的抗体水平显著高于经rFPV-H5A免疫的试验鸡;在SPF鸡中rFPV-H5AIL2免疫组和rPFV-H5A免疫组的攻毒保护率和排毒率相当,但在商品鸡中rFPV-H5AIL2免疫组的攻毒保护率显著高于rFPV-H5A免疫组,而排毒率显著低于后者。本研究为研制新型禽流感重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

关键词：禽流感病毒血凝素鸡白细胞介素2 重组鸡痘病毒免疫效力

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两株基因Ⅲ型强毒新城疫的全基因组测序及其与Ⅰ系苗的亲缘性分析

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微生物学报 2009年第3期49卷 302-308页

作者：仇旭升孙庆姚春峰董丽吴艳涛胡顺林刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

【目的】研究基因III型新城疫(Newcastle disease,ND)强毒分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go与中等毒力疫苗株Mukteswar的亲缘性关系,分析三株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的全基因差异。【方法】采用RT-PCR方法获得两株NDV分离株的全基因组核苷酸序列,与GenBank中公布的Mukteswar序列比对分析。【结果】强毒分离株与中等毒力疫苗株Mukteswar全基因组核苷酸同源性均为99.7%;病毒6个阅读框核苷酸序列与Mukteswar同源性为99.6%～99.9%;预测的8种病毒编码蛋白同源性在98.8%～99.8%。然而,测定MDT,ICPI和IVPI发现JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go毒力明显强于Mukteswar,其中JS/7/05/Ch株的IVPI达到了2.18。【结论】综合3株NDV的遗传分析结果和已有的流行病学资料可以推断分离株JS/7/05/Ch和JS/9/05/Go是由疫苗株Mukteswar自然进化而来的返强毒株。因此,必须停止使用中等毒力疫苗以免造成更大的危害。

关键词：基因Ⅲ型新城疫病毒 Mukteswar 全基因组毒力返强

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鹅源新城疫病毒基因组密码子使用分析

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中国家禽 2009年第11期31卷 19-23页

作者：曹永忠顾敏刘文博刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)的跨种间传播机制是近年来研究的热点。选择NDV鹅源毒株ZJ1、SF02以及鸡源株、鸽源株和疫苗株La Sota株的全基因组序列,对其6个结构蛋白基因编码区序列运用SMS和Codon W软件进行了密码子使用分... 详细信息

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)的跨种间传播机制是近年来研究的热点。选择NDV鹅源毒株ZJ1、SF02以及鸡源株、鸽源株和疫苗株La Sota株的全基因组序列,对其6个结构蛋白基因编码区序列运用SMS和Codon W软件进行了密码子使用分析,同时从物种密码子数据库获得鹅、鸡的密码子使用数据,与NDV基因组密码子使用情况进行比较。结果显示:鹅源、鸡源、鸽源与疫苗株NDV的基因组密码子使用情况基本一致;基因组密码子使用的偏向性较小,全基因组ENC值为57,6个编码基因的NEC值从54～60不等;基因组在密码子使用上存在28个优先使用的密码子,其中8个为高频使用密码子。鹅源NDV与鹅、鸡密码子使用偏性基本一致,仅5～6个密码子存在差异。

关键词：新城疫病毒密码使用比较

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新城疫病毒反向遗传载体的构建及其外源基因表达的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2009年第1期 19-20页

作者：曹军平胡顺林扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

新城疫(newcastle disease,ND)是由NDV引起的多种禽类发生高度死亡的一种重要传染病。文章对NDV反向遗传载体的构建及其表达外源基因的研究进展进行了综述,并展示了其广阔的应用前景。

关键词：新城疫病毒反向遗传载体外源基因表达

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2008年江苏地区基因Ⅶd亚型新城疫病毒遗传变异分析

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畜牧兽医学报 2009年第12期40卷 1782-1787页

作者：吴双黄伟平王伟伟胡顺林王晓泉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 铜山县禽病门诊部徐州221009

为了研究基因Ⅶd亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的分子流行病学及遗传变异规律,作者对2008年分离自江苏地区16株具有一定代表性NDV分离株的F和HN基因片段进行了扩增。根据F基因和HN基因序列绘制的2个遗传进化树基本一致,... 详细信息

为了研究基因Ⅶd亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的分子流行病学及遗传变异规律,作者对2008年分离自江苏地区16株具有一定代表性NDV分离株的F和HN基因片段进行了扩增。根据F基因和HN基因序列绘制的2个遗传进化树基本一致,表明分离株中不存在囊膜糖蛋白基因发生重组的NDV;同时,HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势。基因Ⅶd亚型变异株的出现应引起相关领域从业者们的高度重视。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶd亚型变异株

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猪伪狂犬病病毒JSZ株的分离鉴定及其病毒核酸的分布规律

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 759-763页

作者：郭丽静赵瑜张伟崔盟吴艳涛高崧彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分... 详细信息

用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分离株接种兔后出现奇痒症状并麻痹致死;接种仔猪后出现持续发热,肌肉震颤等症状。通过对自然感染PRV病死仔猪脏器进行PCR检测,发现PRV在仔猪体内广泛分布,其中以脾的检出率最高,可达100%;对人工感染猪的直肠和鼻腔棉拭样品进行PCR检测,发现病猪排毒最长可达13 d。证实,该分离株为猪伪狂犬病强毒株,脾为病毒检测的首选靶器官。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定排毒分布

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鸭源H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建

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中国兽医科学 2009年第1期39卷 54-57页

作者：唐应华吴培培彭大新张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

H5N1亚型clade 2.3.4为我国南方地区的优势毒株。A/mallard/Huadong/S/2005(S)病毒在遗传进化上属于clade 2.3.4,而A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)病毒属于clade 2。通过删除S病毒和Y病毒的HA多碱性氨基酸序列,S病毒由PLRERRRKRGL改变为PLREGRGL,Y病毒由PQR-ERRKKRGL改变为PQREGRGL,使之成为低致病性特征的HA基因。将S病毒和Y病毒的NA基因和突变的HA基因分别组合,由A/Puerto Rico/8/34(PR8)病毒提供6个内部基因,进行拯救,共获得4个致弱病毒(SS,SY,YS,YY)。这4个致弱病毒对SPF鸡的静脉内致病指数(IVPI)为0,对10日龄SPF鸡胚无致病性。SS、SY、YS、YY病毒第10代鸡胚尿囊液的HA效价分别为9、11、111、1 lb。

关键词： H5N1 HA裂解位点反向遗传疫苗候选株

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表达H5亚型AIV HA和NA基因重组鸡痘病毒的构建及在高母源抗体商品鸡的免疫效力试验

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中国兽医学报 2009年第10期29卷 1260-1263页

作者：陈素娟孙蕾石火英刘武杰彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体基因工程疫苗至今未能得到推广应用的主要原因,本试验使用FPV新的复制非必需区构建的载体pP12-18构建在高母源抗体商品鸡具有较高免疫力的基因工程疫苗。将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)... 详细信息

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体基因工程疫苗至今未能得到推广应用的主要原因,本试验使用FPV新的复制非必需区构建的载体pP12-18构建在高母源抗体商品鸡具有较高免疫力的基因工程疫苗。将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体pP12-18中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p12LSH5 HANA。将p12LSH5 HANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p12LSH5 HANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-12LSH5 HANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-12LSH5 HANA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经滴鼻点眼攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%。在高母源抗体的商品鸡上,rFPV-12LSH5 HANA与原有载体构建的重组疫苗rF-PV-11SH5 HANA的免疫效力有显著差异,保护率分别为81.4%和45.4%。结果表明,选择FPV合适的复制非必需区构建载体是提高重组FPV在高母源抗体商品鸡免疫效力的有效策略之一。

关键词：母源抗体 H5亚型禽流感重组鸡痘病毒血凝素神经氨酸酶

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六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析

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中国家禽 2009年第15期31卷 13-15,20页

作者：仇保丰胡顺林刘武杰唐应华彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒NA基因全长约1464～1465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19～1431位,... 详细信息

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒NA基因全长约1464～1465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19～1431位,长度均为1413bp。6株病毒NA基因之间的同源性为90.8%～99.8%,其中5株病毒NA基因的同源性非常高,达到96.0%～99.8%,但另外1株与其他病毒NA基因的同源性相对较低,介于90.8%～92.2%,进一步分析表明该病毒可能来源于其他地区禽类。对NA基因的推导氨基酸分析表明,ORF编码470个氨基酸,NA没有发生茎部缺失。研究结果表明,水禽内的H4N6亚型禽流感病毒进化相对比较缓慢。

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶基因序列分析

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