检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2007年第5期23卷 486-490页

作者：周丽丽姚碧涛罗德炎焦新安刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X45... 详细信息

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd+-pVAX1-BLS-L7/L12)。以1×109CFU/只的剂量口服免疫Balb/C小鼠,3次免疫后进行免疫效果的评价。结果构建的重组减毒沙门菌质粒转染COS-7细胞经免疫组化和Western-blot试验证明BLS-L7/L12融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清和肠黏液中有特异性抗体IgG和sIgA产生。通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论所构建的以重组沙门菌为载体口服布鲁氏菌DNA疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,且以细胞免疫应答为主。可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗。

关键词：布鲁氏菌 BLS-L7/L12 DNA疫苗伤寒沙门菌平衡致死系统

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以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性

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生物技术通讯 2007年第6期18卷 912-914页

作者：焦红梅潘志明崔一晨田华荣焦新安扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7... 详细信息

目的:构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗,研究该疫苗的免疫原性。方法:以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫BALB/c小鼠,ELISA检测其诱导抗体产生情况;再将重组质粒pVAX1-S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,构建运送S1基因的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1),口服免疫BALB/c小鼠,间接免疫荧光试验鉴定减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗的免疫原性。结果:与pVAX1空载体对照组相比,重组真核表达质粒pVAX1-S1免疫组二免及三免后抗体水平分别存在显著性差异(P<0.05)和极显著性差异(P<0.01)。减毒沙门氏菌运送的DNA疫苗SL7207(pVAX1-S1)诱导小鼠产生了特异性的血清抗体。结论:构建的重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-S1)具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答。这为进一步研制冠状病毒新型基因疫苗奠定了基础。

关键词：小鼠肝炎病毒 S1基因 DNA疫苗减毒沙门氏菌免疫原性

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H4亚型禽流感毒株的生物学特性

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中国家禽 2007年第21期29卷 55-56,58页

作者：高明燕胡茂志徐步吴艳涛王志亮焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏省物质微区与性能测试服务中心江苏扬州225009 中国农科院家禽科学研究所江苏扬州225003 农业部动物检疫所外来动物疾病诊断中心山东青岛266032

　　根据致病性不同,禽流感病毒(AIV)可以分为高致病性和低致病性.不同亚型AIV的致病性、细胞内定殖能力以及对T淋巴细胞的影响等特性可能有所不同.……

关键词：禽流感病毒 H4 致病性感染细胞定殖生物学特性细胞亚群尿囊液感染剂量混合感染

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H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力

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微生物学报 2006年第2期46卷 301-305页

作者：龙进学薛峰彭宜顾敏刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表... 详细信息

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表达／转录载体（848）和其补加15个核苷酸的NS突变载体（m848）。构建的载体分别与编码WSN（H1N1）内部基因载体进行组合转染，拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒：RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价（HA）、鸡胚的平均死亡时间（MDT）和鸡胚半数感染量（EID50）均无显著差异；但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263～277位核苷酸发生缺失后，不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能，但提高了病毒对鸡的致病力。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒病毒拯救突变非结构基因NS 病毒蚀斑形成单位

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H5N1亚型禽流感病毒拯救体系的建立

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微生物学报 2006年第1期46卷 55-59页

作者：龙进学吴艳涛张小荣王曲直刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A／Duck／Shandong／093／2004株作为骨架病毒，在完成了全基因组序列测定基础上，设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接，构建A／SD／04的8个基因的拯救... 详细信息

选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A／Duck／Shandong／093／2004株作为骨架病毒，在完成了全基因组序列测定基础上，设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接，构建A／SD／04的8个基因的拯救载体，经测序获得序列准确的拯救质粒：241、242、243、244、245、246、247和248。A／SD／04的8质粒与PR8（H1N1）进行不同组合的拯救，获得8个均含A／SD／04HA基因的H5重组流感病毒。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价在2^8-2^10，EID50在10^-8.5 - 10^-9之间，MDT在34～46h之间，均与野生A／SD／04（wt A／SD／04）相似。重组病毒对6周龄的SPF鸡的静脉接种指数（IVPI）与wt A／SD／04却有明显的差异，说明不同组合的内部基因影响病毒对鸡的致病力，但不影响病毒的鸡胚致死能力、对鸡胚的感染能力和病毒在鸡胚中的繁殖能力。构建的A／SD／04的8个质粒拯救系统，为H5NI的基因功能研究和新型疫苗开发奠定基础。

关键词： H5N1亚型禽流感病毒 8质粒拯救系统病毒拯救重组病毒

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共表达H5亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

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微生物学报 2006年第1期46卷 111-114页

作者：陈素娟孙蕾刘武杰孙学辉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同... 详细信息

为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5ANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%,显示出一定的应用前景。

关键词： H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒血凝素神经氨酸酶

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抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第4期22卷 510-512页

作者：戴华焦新安潘志明黄金林胡茂志唐伟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Wester... 详细信息

目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb)。方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChIFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a,腹水mAb1G5、5E3的ELISA效价分别为1∶1600000,1∶120000。在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChIFN-γ及GST-ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应。在蛋白质印迹试验中,2株mAb均能与融合蛋白GST-ChIFN-γ、His-ChIFN-γ发生反应,出现特异性条带。结果表明,mAb1G5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb。结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。

关键词：鸡γ-干扰素(ChIFN-γ) 单克隆抗体

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H4亚型家养水禽流感病毒分离株的表面膜蛋白基因的序列测定和遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2006年第12期37卷 1334-1339页

作者：薛峰顾敏彭宜姚春峰张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测,分离鉴定出多株H4亚型禽流感病毒。对其中的A/Duck/Yangzhou/216/2002(简称Dk/YZ/216/02)、A/Duck/Yangzhou/526/2003(简称Dk/YZ/526/03)、A/Duck/Yangzhou/36/2004(简称Dk/YZ/36/04)的血凝素基因和Dk/YZ/526/03、Dk/YZ/36/04的神经氨酸酶基因进行了克隆测序,并与GenBank中收录的其它序列进行了比较,遗传进化结果表明Dk/YZ/216/02的血凝素基因(HA)与毒株Tk/Minnesota/833/80(H4N2)同源性最高,而Dk/YZ/526/03和Dk/YZ/36/04的血凝素基因(HA)均与Budgerigar/Hokkaido/1/77(H4N6)同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)遗传进化分析结果表明Dk/YZ/36/04(H4N6)的NA基因与毒株Pigeon/Nanchang/8-142/2000(H3N6)同源性最高,而Dk/YZ/526/03(H4N2)的NA基因与Dk/Hokkaido/13/00(H9N2)同源性最高,3株禽流感病毒的HA推导的氨基酸剪切位点序列均为P-E-K-A-S-R,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列,与对SPF鸡的致病力试验相吻合。

关键词：禽流感病毒 H4 HA NA 剪切位点

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禽流感病毒NS第263～277位核苷酸缺失降低其抗干扰素能力

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微生物学通报 2006年第2期33卷 34-39页

作者：龙进学王曲直刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

2000年以来，多数H5N1亚型禽流感病毒在NS基因的263～277位发牛15个碱基的缺失。为了研究此缺失在流感病毒进化中的生物学意义，构建H5N1亚型流感病毒A／SD／04株的HA、NA、NS的全基因表达载体，以及NS基因263～277位删除的突变载体。... 详细信息

2000年以来，多数H5N1亚型禽流感病毒在NS基因的263～277位发牛15个碱基的缺失。为了研究此缺失在流感病毒进化中的生物学意义，构建H5N1亚型流感病毒A／SD／04株的HA、NA、NS的全基因表达载体，以及NS基因263～277位删除的突变载体。通过反向遗传学技术，与编码WSN的其他内部基因（PB2，PB1，PA，NP和M）的表达载体进行组合转染，获得在NS基因的263～277位缺失和不缺失的2个重组H5N1亚型流感病毒（RWSN—m248和RWSN-248）。此两个重组病毒在无干扰素产生的Vero细胞上的繁殖滴度相似，在能产生干扰素的细胞MDCK和COS-1细胞上的繁殖滴度有明显差异。两个重组病毒在鸡胚中的繁殖滴，IVPI，MDT和EID50均无显著差异。说明NS基因的263～277位核苷酸的缺失不影响病毒的整体毒力，但降低了H5N1的抗干扰素能力。

关键词：拯救重组病毒 NS 缺失突变病毒空班形成单位(PFU)

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禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用

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中国免疫学杂志 2006年第1期22卷 13-15,19页

作者：唐应华张评浒薛峰刘晓文刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗... 详细信息

目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应,且所有单抗株均不与非AⅣ-H9病毒反应,而其中一株(8E6)能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示, 其中8株单抗能与AⅣ的Mr为75 000处反应,表明是针对AⅣ H9 HA的单抗。结论:本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗,特别是8E6株;这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。

关键词： H9亚型禽流感血凝素单克隆抗体 Western blot

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