检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2005年第3期45卷 359-362页

作者：孙蕾刘武杰陈素娟石火英刘秀梵吴艳涛张体银扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区... 详细信息

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体疫苗至今未能得到大规模推广应用的主要原因,而选择适当的FPV复制非必需区可能是解决这一问题的方法之一。根据已发表的美国致病株FPV的基因组设计两对引物,用PCR方法扩增FPV假定复制非必需区的两个侧翼区FPV1和FPV2 ,利用此假定复制非必需区构建FPV表达载体pP12LS及表达ZJ1株新城疫病毒(NDV)F基因的转移载体pP12LSF。pP12LSF与2 82E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞(CEF) ,经数轮蓝斑筛选得到纯化的重组病毒rFPV_FSC。重组FPV在CEF上连续传2 0代仍具有良好的遗传稳定性。对重组FPV进行免疫效力试验,在SPF鸡上,重组病毒rFPV_FSC和与之仅有复制非必需区差异的rFPV_FSB均能抵抗NDV强毒的攻击,提供10 0 %的保护。但在有母源抗体的商品鸡上,rFPV_FSC与rFPV_FSB的免疫效力却有显著差异,保护率分别为10 0 %和6 1 5 4 % ,rFPV_FSC的免疫效力与NDV常规油苗相当。试验结果表明,母源抗体对重组FPV的免疫效力有一定的影响。

关键词：鸡痘病毒复制非必需区免疫效力

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共表达H5和H9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因的重组禽痘病毒及其免疫效力

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病毒学报 2005年第4期21卷 284-288页

作者：陈素娟石火英孙蕾刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009

为了构建更为安全有效能同时抵抗高致病性H5亚型和低致病性H9亚型禽流行性感冒(禽流感)病毒的基因工程疫苗,将H5和H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因,分别由鸡痘病毒早晚期启动子PS和PE/L调控其转录,定向插入鸡痘病毒转移载体p11S... 详细信息

为了构建更为安全有效能同时抵抗高致病性H5亚型和低致病性H9亚型禽流行性感冒(禽流感)病毒的基因工程疫苗,将H5和H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因,分别由鸡痘病毒早晚期启动子PS和PE/L调控其转录,定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,获得H5A和H9A基因分别处于PS及PE/L启动子转录调控下的重组转移载体p11SH5H9。以FuGeneTM6转染法将p11SH5H9转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5H9与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5H9。通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV-11SH5H9。以间接免疫荧光法试验证实,纯化的rFPV-11SH5H9感染的CEF能同时表达H5A和H9A。初步的动物试验表明,用105PFU的rF-PV-11SH5H9免疫无特定病原体(SPF)鸡,免疫后血凝抑制(HI)抗体监测阳性率均为100%(8/8);该重组病毒能显著抑制H9亚型AIV滴鼻、点眼后7日龄SPF鸡从气管和泄殖腔排毒,同时也能抵抗H5亚型AIV肌肉注射后对7日龄SPF鸡致死性攻击,保护率均为100%,显示出一定的应用前景。

关键词： H5亚型禽流感病毒 H9亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒血凝素

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鸡白细胞介素-2基因真核表达载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 387-389页

作者：提金凤郝贵杰张艳梅邵卫星彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

目的:构建鸡白细胞介素2(IL-2)真核重组表达质粒,体外鉴定其能否表达。方法:将鸡IL-2cDNA(RT-PCR法获得),克隆入真核高效表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒。PCR和双酶切的方法鉴定克隆的正确性。然后构建pcDNA IL GFP... 详细信息

目的:构建鸡白细胞介素2(IL-2)真核重组表达质粒,体外鉴定其能否表达。方法:将鸡IL-2cDNA(RT-PCR法获得),克隆入真核高效表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒。PCR和双酶切的方法鉴定克隆的正确性。然后构建pcDNA IL GFP重组表达质粒(即GFP基因与IL2的一段上游基因融合表达),PCR方法鉴定克隆的正确性。脂质体法转染COS1细胞,荧光显微镜下观察荧光。结果:正确构建了真核重组表达质粒pcDNA-IL2和pcDNA-IL-GFP。荧光显微镜下可观察到很强的绿色荧光。结论:鸡IL-2克隆和表达成功。为下一步用重组质粒pcDNA-IL2免疫BALB/c小鼠,研制鸡IL-2单克隆抗体奠定了基础。

关键词：白细胞介素-2 绿色荧光蛋白表达鸡

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鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰

引用

微生物学通报 2005年第6期32卷 1-6页

作者：刘玉良胡顺林张艳梅吴艳涛刘秀梵 Rmer-Oberdrfer Angela Weits Jutta Lange Martina 黄勇龙进学扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 德国Friedrich-Lffler研究所国家动物病毒病研究中心分子生物学实验室

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最... 详细信息

将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmB I将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基插入突变成功,F/HN基因区域碱基突变均得以纠正。以上cDNA克隆的修饰与替换为该毒株的反向遗传研究打下了基础。

关键词：鹅源新城疫病毒基因定点突变基因组cDNA克隆改造

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鸡痘病毒载体复制非必需片段优化及强启动子的筛选

鸡痘病毒载体复制非必需片段优化及强启动子的筛选

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作者：彭大新刘秀梵吴艳涛高崧朱爱华张如宽扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室

以痘苗病毒启动子P7.5调控的-半乳糖苷酶(LacZ)基因为检测基因,分别插入三个复制非必需片段构成重组质粒,脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层,蓝斑筛选纯化病毒;将重组病毒感染次代CEF,收获细胞后... 详细信息

标准号: 0501110133

以痘苗病毒启动子P7.5调控的-半乳糖苷酶(LacZ)基因为检测基因,分别插入三个复制非必需片段构成重组质粒,脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层,蓝斑筛选纯化病毒;将重组病毒感染次代CEF,收获细胞后制备提取物,检测其中的-半乳糖苷酶的活性,由此得到一个基因表达效率高的复制非必需片段pFPV7s。根据痘苗病毒天然启动子P7.5的结构,人工合成4条寡核苷酸,形成一个早期和一个晚期启动子,将合成的启动子进行不同组合,最终形成10个较有代表性的启动子组合;以P7.5为对照,在其下游分别插入大肠杆菌-半乳糖苷酶基因LacZ,并进一步插入pFPV7s构建成鸡痘病毒转移载体,以同样的方法检测-半乳糖苷酶的活性,得到了表达活性约为p7.5的 3.5倍的LLEE启动子组合。

关键词：鸡痘病毒复制重组质粒构建复制非必需片段启动子 -

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水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定

水肿毒素B亚单位基因的克隆与鉴定

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作者：倪振亚焦新安高崧彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点实验室

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素II型变异体B亚单位(SLT-IIvB)基因序列,设计并合成3条2对引物,以大肠杆菌O138基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出204 bp的基因序列及包含一段信号肽的261bp基因序列。将这两段DNA分别克隆... 详细信息

标准号: 0501110149

根据已知大肠杆菌志贺氏菌样毒素II型变异体B亚单位(SLT-IIvB)基因序列,设计并合成3条2对引物,以大肠杆菌O138基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增出204 bp的基因序列及包含一段信号肽的261bp基因序列。将这两段DNA分别克隆进表达性载体质粒PYA3334的EcoR I和BamH I位点之间,经地高辛标记探针进行Southern杂交和酶切分析鉴定,并对两条扩增片段进行序列测定。结果表明,扩增产物的大小与设计相符,扩增与克隆的片段为SLT-IIvB基因的特异性片段。

关键词：基因扩增引物 SLT-IIvB基因基因序列分析

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Real-time PCR和常规PCR方法快速鉴定肉骨粉中的牛源性成分

Real-time PCR和常规PCR方法快速鉴定肉骨粉中的牛源性成分

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第六次人畜共患病学术交流会

作者：李林王志亮陈继明农业部动物检疫所国家外来动物疾病诊断中心(山东青岛) 扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室(江苏扬州) 农业部动物检疫所国家外来动物疾病诊断中心(山东青岛)

疯牛病是一种严重危害动物和人健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成分的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成分的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉... 详细信息

疯牛病是一种严重危害动物和人健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成分的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成分的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉中的DNA,过程简单可靠仅需要20分钟左右,对不同含量的牛肉骨粉进行检测,常规PCR能够检测到的最低含量是0.001﹪,用Real-time PCR对相同的样品进行检测所得到的灵敏度更高,可达到0.0001﹪,两种PCR方法的鉴定过程都非常简单快速,各需要2个小时左右.这两种方法可以根据各实验室的不同条件作为肉骨粉鉴别的常规检测方法.

关键词：牛海绵状脑病肉骨粉朊病毒常规检测疯牛病

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表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性

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中国兽医学报 2003年第4期23卷 347-349页

作者：冀德君彭大新刘红旗陈素娟吴艳涛高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点实验室江苏扬州225009

将表达 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至 30代 ,取第 10、2 0、30代重组病毒作为受检代次 ,进行外源基因片段的克隆与测序 ,以间接免疫荧光试验检验各代次的表达 ,并以第 10、2 0、30代重组鸡痘病毒疫苗进行免疫保... 详细信息

将表达 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗连续传代至 30代 ,取第 10、2 0、30代重组病毒作为受检代次 ,进行外源基因片段的克隆与测序 ,以间接免疫荧光试验检验各代次的表达 ,并以第 10、2 0、30代重组鸡痘病毒疫苗进行免疫保护效力试验。对各代次模板进行 PCR反应 ,分别扩增出特异的 1.7kb外源基因片段 ,酶切位点与原始代次相同 ;各代次外源基因序列与原始序列相比 ,仅有 1个碱基发生变化 ,不涉及氨基酸的变化 ;免疫荧光试验显示各代次均有显著表达 ;各免疫组在免疫后第 7、10、14、2 0天的 HI抗体效价 (log2 )逐渐上升 ;攻毒后第 5天各免疫组排毒率与对照组相比差异显著 ,各免疫组之间无显著差异。结果表明 :此重组载体疫苗具有较好的遗传稳定性 ,经过 30代的传代后外源插入基因及其表达未见变化 ,免疫保护效力亦与原代一致。

关键词：禽流感 H9亚型禽流感病毒 HA基因重组鸡痘病毒疫苗遗传稳定性基因表达

来源：评论

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牛奶中雌性激素样物质对雄性大鼠生殖腺的影响

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卫生毒理学杂志 2003年第2期17卷 97-100页

作者：李湘鸣刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009

白丹麦的Carlsen等~[1],报道人类精子计数下降以来，世界各国对人类男性生殖健康问题给予极大的关注。有研究报道，近50年来，人类的精子数量了50%，与此同时，世界各国前列腺和睾丸癌发病率也在不断升高，特别是以发达国家为重~[2]。... 详细信息

白丹麦的Carlsen等~[1],报道人类精子计数下降以来，世界各国对人类男性生殖健康问题给予极大的关注。有研究报道，近50年来，人类的精子数量了50%，与此同时，世界各国前列腺和睾丸癌发病率也在不断升高，特别是以发达国家为重~[2]。究竟是何种原因造成了男性生殖健康日趋恶化？有关专家认为是由于环境刺激素在起作用，所谓环境刺激素，是指环境中存在的一些能够像刺激素一样影响人体内分泌功能的物质，又称为环境内分泌干扰剂(environmental endocrine-eisrupting chemicals,简称EDCs)它干扰生物为保持体内平衡和调节发育过程的正常激素的产生、释放、转移、代谢、结合、反应和消除，主要通过水、空气和食物作用于人体。但是Boyle等~[3]学者认为，人类精子计数下降及生殖肿瘤发病率的升高与动物性食物摄入量有关。Hartmann等~[4]，发现动物性食物中含有较多的雌激素样物质，特别是牛奶中含量较多。为此，我们选用Wistar大鼠，对于牛奶进行了2代繁殖试验评价研究

关键词：牛奶环境雌激素雄性大鼠生殖腺胰岛素类生长因子-1

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乳腺癌发病率与动物性食物的相关性及死亡队列研究

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实用肿瘤杂志 2003年第6期18卷 485-488页

作者：李湘鸣刘秀梵扬州大学医学院预防医学教研室江苏扬州225001 扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225012

目的　研究乳腺癌发病率与食物的相关性。为开展其有关病因、发病机制和预防提供线索。方法　用日本山梨医科大学环境卫生保健教研室提供的肿瘤发病数据库 (IARC,1988～ 1992 )和食物供应数据库 (FAO,196 1～ 1990 ) ,对世界 4 2个国家... 详细信息

目的　研究乳腺癌发病率与食物的相关性。为开展其有关病因、发病机制和预防提供线索。方法　用日本山梨医科大学环境卫生保健教研室提供的肿瘤发病数据库 (IARC,1988～ 1992 )和食物供应数据库 (FAO,196 1～ 1990 ) ,对世界 4 2个国家乳腺癌的发病率与有关食物进行了相关分析。用于乳腺癌出生死亡队列研究的年龄别死亡人数及人口数 ,来自“日本死亡统计数据库”,由日本文部省出版发行。结果　在所分析的 36种食物中 ,动物性食物消费量与 5 5岁以上乳腺癌年龄标化发病率关系最密切 ,其中动物性脂肪 (对数 ,r=0 .6 5 1)、牛奶 (r=0 .6 18)和肉类 (r=0 .5 73)的相关系数较大。逐步多元回归发现 ,牛奶对乳腺癌发病率的影响最大 ,复相关系数 (r)为 0 .5 79(P=0 .0 15 )。死亡对列研究发现 ,出生越晚 ,死亡率越高 ,其中 194 5年前后出生的人群死亡率最高。结论　动物性食物的摄入量与乳腺癌发病率关系较密切。

关键词：乳腺癌发病率动物性食物相关性死亡队列研究

来源：评论

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