检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2019年第2期41卷 174-178页

作者：赵冬王小波高清清郇长超王万彬高崧刘秀梵农业部禽用生物制品创制重点实验室江苏扬州225009 农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业科技发展研究院江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省研究生工作站江苏泰州225511

为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了... 详细信息

为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了具有免疫原性的融合蛋白。以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,共获得8株能够稳定分泌针对PCV3 Cap蛋白的MAb杂交瘤细胞株。Western blot与IFA试验结果显示,8株MAbs均能够与真核表达的重组Cap蛋白反应。选取3株杂交瘤细胞制备3株MAbs,小鼠腹水效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶409 600。利用3株MAbs对自然感染PCV3临床病猪的腹股沟淋巴结进行IHC检测,结果显示3株MAbs的腹水均能够与感染PCV3的临床样品发生特异性的免疫反应。本研究制备的MAbs具有较好的特异性,为深入研究Cap蛋白的结构和PCV3快速诊断奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒3型 Cap蛋白单克隆抗体免疫组化

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2016—2017年华东地区活禽市场7株H9N2禽流感病毒遗传进化分析

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畜牧兽医学报 2018年第8期49卷 1789-1796页

作者：蒋大秀马静王晓泉胡顺林刘晓文刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009 江苏省重点动物传染病和人畜共患病预防控制联合创新中心扬州225009

活禽市场的家禽,特别是水禽在禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的演化、维持和扩散过程中起重要作用,因此对活禽市场进行长期不间断的流行病学监测非常重要。2016年10月至2017年9月,每月定期采集华东地区某活禽市场家禽喉头和泄... 详细信息

活禽市场的家禽,特别是水禽在禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的演化、维持和扩散过程中起重要作用,因此对活禽市场进行长期不间断的流行病学监测非常重要。2016年10月至2017年9月,每月定期采集华东地区某活禽市场家禽喉头和泄殖腔棉拭子,并接种10日龄SPF鸡胚,测定鸡胚尿囊液HA效价,取阳性尿囊液进行HI试验分型,应用RT-PCR对该样品进行全基因PCR并测序,利用DNASTAR、MEGA6.0分析序列,并绘制系统发生树。结果共采集样品1 178份,来自127群,H9N2AIV阳性样品100份。从水禽中分离到H9N2AIV 7株,对7株病毒全基因组进行测序和遗传进化分析,不同基因片段均存在不同的遗传进化趋势。活禽市场水禽体内携带的7株H9N2AIV与当前家禽优势流行基因型一致,因此对活禽市场家禽中循环存在的AIV进行的定期监测,对了解潜在的流行株的演化和出现有重要作用。

关键词：活禽市场 H9N2禽流感病毒监测遗传进化

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基因Ⅶ型新城疫病毒调控基质蛋白酶(MMP)-14活性及诱导脾脏免疫病理的机制研究

基因Ⅶ型新城疫病毒调控基质蛋白酶(MMP)-14活性及诱导脾脏免疫病...

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江苏省畜牧兽医学会首届“青年科技论坛”

作者：胡增垒顾晗胡顺林焦新安刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州 225009 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州 225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州 225009 江苏省人兽共患病学重点实验室扬州 225009 农业部农产

细胞外基质(ECM)重构对基因Ⅶ 型新城疫病毒(NDV)诱导鸡脾脏的免疫病理损伤具有重要影响.本研究旨在探讨基因Ⅶ 型NDV调控基质蛋白酶(MMP)-14活性及对ECM重塑的影响,进一步解析基因Ⅶ 型NDV的致病机理.首先,用荧光定量PCR与Western blo... 详细信息

细胞外基质(ECM)重构对基因Ⅶ 型新城疫病毒(NDV)诱导鸡脾脏的免疫病理损伤具有重要影响.本研究旨在探讨基因Ⅶ 型NDV调控基质蛋白酶(MMP)-14活性及对ECM重塑的影响,进一步解析基因Ⅶ 型NDV的致病机理.首先,用荧光定量PCR与Western blot方法对基因Ⅶ 型与Ⅳ型NDV感染脾脏中MMP-1、MMP-13与MMP-14的表达水平进行测定.其次,选用鸡外周血单个核细胞(PBMC)为细胞模型,测定不同MMP的表达水平及MMP-14的细胞定位与膜表达水平.最后,建立了评价PBMC侵袭力的Transwell模型与测定细胞降解胶原蛋白能力的模型,并测定了基因Ⅶ 型与Ⅳ型NDV感染对PBMC侵袭力与胶原降解能力的影响.结果表明,与基因Ⅳ型NDV Herts/33相比,基因Ⅶ 型NDV JS5/05株可显著上调鸡脾脏与PBMC中MMP-13与MMP-14的表达水平,尤其是***-14在JS5/05感染的PBMC中在细胞质、细胞核与细胞膜上均有定位,但是在细胞膜上的表达水平显著高于Herts/33感染的细胞.细胞侵袭实验表明,JS5/05感染的PBMC在趋化因子的诱导作用下,其侵袭力显著强于Herts/33感染细胞.此外,JS5/05感染的PBMC对Ⅰ型胶原蛋白的降解能力也显著高于Herts/33感染细胞.基因Ⅶ型NDV可显著上调PBMC中MMP-14的表达水平,激活其降解胶原蛋白的活性,使炎性细胞突破ECM屏障的侵袭力显著增强.因此,基因Ⅶ 型NDV调控MMP-14的活性可能对其诱导的脾脏免疫病理损伤有重要的影响.

关键词：基因Ⅶ型新城疫病毒基质蛋白酶14 细胞外基质脾脏免疫病理致病机制

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表达分泌型与膜结合型HH7N9 AIV血凝素蛋白重组NDV载体疫苗的免疫原性比较

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中国家禽 2018年第14期40卷 14-18页

作者：胡增垒刘晓文胡娇顾晗石磊李如梦甘军纪焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

研究以新城疫病毒(NDV)弱毒株LX为载体,构建了一株表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)血凝素(HA)胞外区的重组病毒(LXs HA),并与一株前期构建的表达膜结合型HA的重组病毒(LXHAF)进行比较。生物学特性评价显示,两株病毒均为弱毒且在鸡胚... 详细信息

研究以新城疫病毒(NDV)弱毒株LX为载体,构建了一株表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)血凝素(HA)胞外区的重组病毒(LXs HA),并与一株前期构建的表达膜结合型HA的重组病毒(LXHAF)进行比较。生物学特性评价显示,两株病毒均为弱毒且在鸡胚中的繁殖性能较强。此外,LXs HA主要以分泌形式表达HA蛋白,而LXHAF则以膜结合形式表达HA。鸡的免疫试验显示,两株重组病毒在一次免疫后均能诱导针对NDV载体的血凝抑制抗体,但LXHAF能够诱导较高水平的H7N9 AIV特异性Ig Y抗体,而LXs HA不能诱导H7N9 AIV抗体应答。结果表明,表达膜结合型HA的重组病毒具有针对H7N9 AIV较好的免疫原性,而表达分泌型HA的重组病毒免疫原性较差。这为研发H7N9亚型禽流感载体疫苗提供新的信息与参考。

关键词： H7N9亚型禽流感病毒新城疫病毒载体疫苗分泌型HA 膜结合型HA 免疫原性

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Importinα5负向调控importinβ1介导的新城疫病毒M蛋白细胞核定位以及病毒的复制和致病性

Importinα5负向调控importinβ1介导的新城疫病毒M蛋白细胞核定...

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：段志强嵇辛勤赵佳福倪萌萌许海旭胡顺林刘秀梵贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

引言新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属于副黏病毒科腮腺炎病毒属成员,是一种含有单股负链不分节段基因组的RNA病毒。M蛋白是NDV基因组编码分子量最小的一种病毒结构蛋白,构成了病毒RNP与囊膜连接的支架。与大多数副黏病毒M蛋... 详细信息

引言新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属于副黏病毒科腮腺炎病毒属成员,是一种含有单股负链不分节段基因组的RNA病毒。M蛋白是NDV基因组编码分子量最小的一种病毒结构蛋白,构成了病毒RNP与囊膜连接的支架。与大多数副黏病毒M蛋白一样,NDVM蛋白也是一种细胞核质穿梭蛋白,在抑制宿主细胞基因转录以及促进子代病毒粒子的组装和出芽方面有重要作用。早期的研究表明,

关键词：新城疫病毒副黏病毒细胞核定位 importin Importin

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新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用验证

新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用验证

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：胡焱段志强嵇辛勤赵佳福胡顺林刘秀梵贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

引言研究表明,新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix,M)是一种细胞核-细胞质穿梭蛋白:在病毒早期感染阶段通过其携带的核定位信号进入细胞核,主要作用是抑制细胞基因的转录和翻译;而在感染后期则通过其核输出信号以C... 详细信息

引言研究表明,新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix,M)是一种细胞核-细胞质穿梭蛋白:在病毒早期感染阶段通过其携带的核定位信号进入细胞核,主要作用是抑制细胞基因的转录和翻译;而在感染后期则通过其核输出信号以CRM-1非依赖的方式进入细胞质,在细胞膜内侧与病毒蛋白相互作用促进子代病毒粒子的组装和出芽。本课题组前期通过荧光共定位试验发现importinβ1

关键词：新城疫病毒 importin 重组蛋白基质蛋白

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PA-X蛋白对HH9N2亚型禽流感病毒致病性的影响

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中国家禽 2017年第24期39卷 14-17页

作者：王晓泉刘东刘晓文刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在我国家禽中循环存在,可跨种间传播感染人,对公共卫生产生重大影响。PA-X蛋白是流感病毒PA基因核糖体移码后编码的一种新蛋白,对病毒的致病性起调控作用。试验通过反向遗传技术构建并拯救了H9N2 AIV SH7株的PA-... 详细信息

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在我国家禽中循环存在,可跨种间传播感染人,对公共卫生产生重大影响。PA-X蛋白是流感病毒PA基因核糖体移码后编码的一种新蛋白,对病毒的致病性起调控作用。试验通过反向遗传技术构建并拯救了H9N2 AIV SH7株的PA-X变异病毒SH7-FS株,使PA-X的表达量下降至原来的0.2%^([1]),测定野生型SH7株和变异病毒SH7-FS株在不同来源细胞中的生长曲线,并通过小鼠感染试验测定病毒在肺中病毒载量及其对肺的病理损伤来分析其对小鼠的致病性。结果表明:SH7-FS株对小鼠的致病力比野生型SH7株低,造成的小鼠肺部炎症比SH7株轻。SH7株和SH7-FS株在小鼠体内复制能力无显著差异,但是SH7-FS株在Vero细胞和MDCK细胞上复制水平比SH7株低,推测PA-X蛋白是协助病毒更好适应环境的辅助蛋白。研究结果为H9N2 AIV PA-X蛋白的生物学功能的探索提供了理论基础,推进了人们对于流感病毒PA-X蛋白功能的认识。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 PA—X 小鼠致病性

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不同新城疫疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果比较

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中国兽药杂志 2017年第5期51卷 1-6页

作者：胡焱嵇辛勤阮涌赵佳福雷云段志强刘秀梵贵州大学动物科学学院贵阳550025 贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵阳550025 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

为探讨不同新城疫(ND)疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果,选用NDⅠ系活疫苗(CS2株)、Ⅳ系灭活疫苗(La Sota株)和重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)分别对三穗麻鸭进行免疫实验,检测疫苗最小免疫剂量、免疫鸭的抗体滴度和消长规律,以及病毒感... 详细信息

为探讨不同新城疫(ND)疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果,选用NDⅠ系活疫苗(CS2株)、Ⅳ系灭活疫苗(La Sota株)和重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)分别对三穗麻鸭进行免疫实验,检测疫苗最小免疫剂量、免疫鸭的抗体滴度和消长规律,以及病毒感染免疫鸭后的排毒情况。结果显示,活疫苗CS2株、灭活疫苗La Sota株、灭活疫苗A-Ⅶ株的最小免疫剂量分别为1.0 m L/只、0.5 m L/只和0.2 m L/只;3种疫苗2次免疫要高于1次免疫产生的抗体滴度,但各免疫组不同免疫次数鸭的抗体滴度均在第60天达到高峰,其中以灭活疫苗A-Ⅶ株1次或2次免疫诱发的抗体滴度最高(分别为7.5log2和8.1log2),并且抗体持续期长,在免疫后第150天抗体水平仍能达到免疫保护要求;对免疫鸭的排毒检测发现,活疫苗CS2株免疫后的鸭持续排毒,灭活疫苗La Sota株免疫后的鸭排毒量少且时间短,而灭活疫苗A-Ⅶ株免疫后的鸭未检测到排毒。试验结果表明,重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)在免疫剂量、免疫次数、免疫鸭的抗体滴度和持续时间,以及抑制免疫鸭排毒方面均明显优于传统ND疫苗。

关键词：新城疫病毒三穗麻鸭新城疫疫苗免疫效果

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基因VII型与IV型新城疫病毒调控脾脏细胞外基质的蛋白质组分析

基因VII型与IV型新城疫病毒调控脾脏细胞外基质的蛋白质组分析

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：胡增垒顾晗胡娇焦新安刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏省人兽共患病学重点实验室农业部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室

引言为了解析基因VII型新城疫病毒(NDV)高度侵害鸡免疫系统的机制,我们前期应用转录组学技术鉴定了基因VII型与IV型NDV感染脾脏引起天然免疫应答相关基因的差异表达,如IFN-β、IFN-α、IFN-γ、IL-6、CCL-4等。基因VII型NDV可显著上调... 详细信息

引言为了解析基因VII型新城疫病毒(NDV)高度侵害鸡免疫系统的机制,我们前期应用转录组学技术鉴定了基因VII型与IV型NDV感染脾脏引起天然免疫应答相关基因的差异表达,如IFN-β、IFN-α、IFN-γ、IL-6、CCL-4等。基因VII型NDV可显著上调这些基因的表达水平,说明基因VII型NDV诱导的强烈的天然免疫应答对其造成免疫系统的严重损伤有重要作用。此外,基因表达谱分析还显示,与

关键词：新城疫病毒 VII ECM 细胞外基质

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KPNB1和Ran蛋白共同介导新城疫病毒基质蛋白的入核转运

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微生物学报 2017年第1期57卷 109-120页

作者：段志强嵇辛勤许厚强赵佳福许海旭胡顺林刘秀梵贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州贵阳550025 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

【目的】鉴定与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix protein,M)入核相关的细胞蛋白,以阐明NDV M蛋白细胞核定位的分子机制。【方法】从鸡胚成纤维细胞中分别克隆核转运受体蛋白KPNA1–KPNA6和KPNB1基因,将其构建... 详细信息

【目的】鉴定与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix protein,M)入核相关的细胞蛋白,以阐明NDV M蛋白细胞核定位的分子机制。【方法】从鸡胚成纤维细胞中分别克隆核转运受体蛋白KPNA1–KPNA6和KPNB1基因,将其构建到真核表达载体,并与表达NDV M蛋白的重组真核表达载体分别共转染HEK-293T细胞,通过免疫共沉淀方法鉴定与NDV M蛋白相互作用的核转运受体蛋白。另外,将M蛋白与Ran蛋白突变体或与M蛋白互作的核转运受体蛋白缺失体分别共表达,通过荧光共定位确定M蛋白入核转运相关的细胞蛋白。【结果】构建的重组真核表达载体在HEK-293T细胞中能够正确表达;通过间接免疫荧光观察发现,重组蛋白中除Myc-KPNA2蛋白定位在细胞质外,其它核转运受体蛋白均与M蛋白表现出相同的细胞核定位。免疫共沉淀试验结果表明,M蛋白与KPNA1蛋白和KPNB1蛋白均存在相互作用。进一步通过荧光共定位观察发现,M蛋白与KPNA1蛋白缺失体(DN-KPNA1)共表达不改变M蛋白的细胞核定位,而与KPNB1蛋白缺失体(DN-KPNB1)共表达后导致M蛋白变为细胞质定位,说明M蛋白入核转运需要KPNB1蛋白的参与。另外,将M蛋白与Ran蛋白突变体Ran-Q69L共表达,荧光观察发现M蛋白同样由细胞核定位变为细胞质定位,说明M蛋白入核转运还需要Ran蛋白的辅助。【结论】KPNB1和Ran蛋白共同介导NDV M蛋白的入核转运,其过程是KPNB1蛋白首先和M蛋白发生相互作用并形成复合物,然后通过Ran蛋白的辅助作用完成入核转运。

关键词：新城疫病毒基质蛋白转运受体蛋白细胞核定位

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