检索结果-内蒙古大学图书馆

中国家禽 2013年第3期35卷 15-19页

作者：尹丽萍秦爱建钱琨邵红霞金文杰史荣华梁有志杭柏林孙薇薇扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009

为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤... 详细信息

为制备禽白血病病毒(ALV)核衣壳蛋白p27的单克隆抗体,本研究以原核表达的融合蛋白GST-ALV p27免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA进行筛选,制备了5株能够稳定传代并分泌抗p27单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为5D3、4F12、5B10、1C5和3C6,亚类鉴定3C6为IgG2b,其余为IgG1。通过IFA、Western-blot及竞争抑制ELISA,表明该5株单抗与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)呈阳性反应,而与其他常见禽源病毒无交叉反应。利用5D3和4F12单抗建立了双抗体夹心ELISA方法,经663份临床样本验证,该方法与商品化试剂盒的符合率达到95.17%,证明所研制的针对ALV p27蛋白的单抗及建立的双抗体ELISA方法具有较高的应用价值。

关键词：禽白血病病毒 p27 单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用

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中国家禽 2012年第14期34卷 15-19页

作者：梁有志尹丽萍杭柏林钱琨金文杰邵红霞秦爱建扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009

禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸... 详细信息

禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。

关键词：禽白血病病毒抗原检测试纸条

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产肠毒素大肠杆菌菌毛F4ac受体的研究进展

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 663-666页

作者：夏芃芃朱国强扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

仔猪腹泻是影响养猪业发展的一个重要疾病之一,其致死率占仔猪总死亡率的11.5%~29.5%。而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4（或K88）是导致新生或断奶仔猪腹泻的重要病原菌,可引发仔猪黄痢、白痢、水肿病和断奶仔猪腹泻等多种疾病,并大肠杆... 详细信息

仔猪腹泻是影响养猪业发展的一个重要疾病之一,其致死率占仔猪总死亡率的11.5%~29.5%。而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4（或K88）是导致新生或断奶仔猪腹泻的重要病原菌,可引发仔猪黄痢、白痢、水肿病和断奶仔猪腹泻等多种疾病,并大肠杆菌F4致病性由两个因素决定。

关键词：产肠毒素大肠杆菌断奶仔猪腹泻受体菌毛仔猪黄痢养猪业死亡率致死率

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J亚群禽白血病病毒SU基因与兔IgG Fc基因在Sf9细胞中的融合表达

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畜牧与兽医 2013年第3期45卷 1-5页

作者：孙薇薇秦爱建梅梅钱琨金文杰范忠军杭柏林尹丽萍邵红霞扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室/教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)SU和兔IgG Fc的融合蛋白,采用PCR方法扩增出SUJ-IgG Fc基因,并克隆至pFastBac1质粒,构建转移载体pFastBac1-SUJ-IgG Fc;再将其转化DH10BacTM感受态细胞,获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-SUJ-IgG Fc;最... 详细信息

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)SU和兔IgG Fc的融合蛋白,采用PCR方法扩增出SUJ-IgG Fc基因,并克隆至pFastBac1质粒,构建转移载体pFastBac1-SUJ-IgG Fc;再将其转化DH10BacTM感受态细胞,获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-SUJ-IgG Fc;最后转染Sf9细胞,获得重组病毒rBac-SUJ-IgG Fc。免疫荧光试验结果显示,重组杆状病毒表达的融合蛋白可被ALV-J单抗JE9以及羊抗兔IgG所识别。Western blot结果显示:表达的融合蛋白与ALV-J单抗JE9以及羊抗兔IgG都有很好的反应性,其分子量大小约为95 ku。该融合蛋白的表达为鸡细胞表面ALV-J受体的研究提供了有力工具。

关键词： J亚群禽白血病病毒 su基因兔IgG Fc 融合表达

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猪源弓形虫YZ株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 940-942页

作者：王小波许金俊吴力力邱江许益民陶建平扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

为确定江苏某猪场疑似弓形虫病发病猪群的病原,本研究取患病仔猪淋巴结、肺脏、肝脏、心和脑等组织制作常规石蜡切片,进行HE染色和免疫组化染色。将仔猪的淋巴结、肺和肝组织混合用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种ICR鼠,经连续传代分... 详细信息

为确定江苏某猪场疑似弓形虫病发病猪群的病原,本研究取患病仔猪淋巴结、肺脏、肝脏、心和脑等组织制作常规石蜡切片,进行HE染色和免疫组化染色。将仔猪的淋巴结、肺和肝组织混合用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种ICR鼠,经连续传代分离弓形虫,采用特异PCR方法对分离的虫株进行鉴定。结果显示在淋巴结和肺脏等组织中可见弓形虫假包囊,免疫组化染色呈强阳性;盲传第3代小鼠腹水可见弓形虫速殖子,而且通过PCR方法可以扩增得到其约301 bp的B1基因特异片段。结果表明,本研究分离鉴定出一株弓形虫虫株,命名为YZ株。

关键词：弓形虫分离鉴定仔猪

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猪瘟疫苗中牛病毒性腹泻病毒2型的检测

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 581-583页

作者：陶洁王银王娟周虹李艳莉朱国强扬州大学兽医学院/禽类预防医学教育部重点实验室江苏扬州225009

为对上海某猪场送检的一份猪瘟疫苗进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测,本研究将猪瘟疫苗样品接种于MDBK细胞,盲传15代后仍无致细胞病变效应,但间接免疫荧光试验表明接种该疫苗后的MDBK细胞能够被单克隆抗体BZ-53(BVDV-2)识别。采用BVDV-1... 详细信息

为对上海某猪场送检的一份猪瘟疫苗进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)检测,本研究将猪瘟疫苗样品接种于MDBK细胞,盲传15代后仍无致细胞病变效应,但间接免疫荧光试验表明接种该疫苗后的MDBK细胞能够被单克隆抗体BZ-53(BVDV-2)识别。采用BVDV-1和BVDV-2的5'-UTR的通用检测引物和针对BVDV E2的引物,对样品RNA进行RT-PCR检测,结果显示,样品能够扩增出约288 bp的BVDV特异性片段;此外,5'-UTR和E2基因片段的测序分析结果表明分离株属于BVDV-2,并且其E2基因与牛源XJ-04株(BVDV-2)的E2基因同源性最高(92.3%),而与猪源ZM-95株(BVDV-1)的E2基因同源性较低(64.5%)。由此证明,该猪瘟疫苗中的确污染有一株BVDV-2株。

关键词：猪瘟疫苗牛病毒性腹泻病毒2型 RT-PCR

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H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性

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病毒学报 2013年第5期29卷 495-499页

作者：张晓剑李彦芳熊丽平陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因... 详细信息

不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。

关键词： H5N1亚型禽流感 HA 糖基化位点突变

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巨噬细胞特异性真核表达载体的构建与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第10期28卷 1067-1069页

作者：宋红芹尹莉姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌扬州大学兽医学院禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏扬州225009

目的:克隆人清道夫受体A(SR-A)启动子,构建巨噬细胞特异性的真核表达载体。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增人SR-A的启动子及第一内含子和增强子序列,并插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pcDNA-GFP中,... 详细信息

目的:克隆人清道夫受体A(SR-A)启动子,构建巨噬细胞特异性的真核表达载体。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增人SR-A的启动子及第一内含子和增强子序列,并插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pcDNA-GFP中,构建巨噬细胞特异性表达载体pSRA-GFP。将pSRA-GFP转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术比较GFP在不同细胞中的表达水平。结果:成功克隆SR-A启动子,其在巨噬细胞RAW264.7中的表达活性显著高于NRK、LLC、Hepa1-6等非巨噬细胞株(P<0.05)。结论:构建的表达载体pSRA-GFP具有良好的组织细胞特异性,可用于巨噬细胞特异性miRNA表达载体的构建。

关键词：人SR-A启动子巨噬细胞特异性表达载体构建

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苏皖地区规模化鸡场禽白血病净化的初步研究

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中国家禽 2012年第5期34卷 8-11页

作者：钱琨沈海玉金文杰秦爱建扬州大学禽类预防医学省部共建教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009

基于苏皖地区禽白血病(AL)流行病学调查结果,本研究参考国际AL净化方案,针对该病在苏皖地区的流行特点,选择代号为DYAH91和DYJS31的两个规模化地方品系鸡群开展了禽白血病净化初步研究。经过一个世代的净化更替,DYAH91鸡群p27抗原阳性率... 详细信息

基于苏皖地区禽白血病(AL)流行病学调查结果,本研究参考国际AL净化方案,针对该病在苏皖地区的流行特点,选择代号为DYAH91和DYJS31的两个规模化地方品系鸡群开展了禽白血病净化初步研究。经过一个世代的净化更替,DYAH91鸡群p27抗原阳性率由14.4%下降到8.1%,p27抗体阳性率由3.4%下降到1.0%,A/B亚群抗体阳性率由5.7%下降到2.2%,病毒分离阳性率由3.1%下降到0.45%;DYJS31鸡群,p27抗原阳性率由40.7%下降到2.8%,p27抗体阳性率由18.7%下降到3.3%,A/B亚群抗体阳性率由10.2%下降到1.4%,J亚群抗体由1.7%下降到1.4%,病毒分离阳性率由4.1%下降为0。以上结果表明通过净化程序的实施,鸡群ALV阳性率显著下降,净化方案效果确实。

关键词：禽白血病规模化鸡场净化

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大肠杆菌K99菌毛fan操纵子的克隆、表达及活性

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微生物学报 2012年第12期52卷 1524-1530页

作者：羊扬厚华艳郁磊朱国强扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室扬州225009 南京农业大学动物医学院南京210095

【目的】在体外克隆和表达猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K99菌毛操纵子fan结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。【方法】以猪源分离的表达K99菌毛ETEC C83907株制取模板,成功PCR扩增出编码K99菌毛的fan操纵子,约5.7 kb。将fan操纵子... 详细信息

【目的】在体外克隆和表达猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K99菌毛操纵子fan结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。【方法】以猪源分离的表达K99菌毛ETEC C83907株制取模板,成功PCR扩增出编码K99菌毛的fan操纵子,约5.7 kb。将fan操纵子克隆入表达质粒载体pBR322,筛选出含正确阳性质粒的重组菌。进一步将上述的重组质粒DNA转化至不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000株,同时将空载体pBR322质粒转化入SE5000构建阴性对照菌株。【结果】该重组菌能与鼠抗K99菌毛单克隆抗体发生明显的凝集反应,与新生仔猪小肠上皮细胞刷状缘BBV分子有强烈凝集反应。电镜观察到上述重组菌表面大量表达K99菌毛,用热抽提法提纯其表达的K99菌毛,并经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色,可以得到分子量约为18.5kDa的主要蛋白条带。纯化菌毛免疫小鼠后制备出高效价的鼠抗血清,能与携带K99菌毛的C83907、C83914、C83260野生株发生强烈的凝集反应,而与携带其他菌毛的ETEC不反应。玻板凝集试验和Westernblot结果表明:体外表达的K99菌毛具有和野生K99菌毛相同的抗原性。用表达K99菌毛的重组菌进行HeLa细胞体外黏附试验和黏附抑制实验,结果表明:重组菌和野生菌株一样具有较强的粘附性,而且用重组菌毛制备的鼠抗血清能有效地抑制上述重组菌或野生菌株对细胞系的黏附结合。【讨论】本研究为进一步研究K99菌毛生物学作用建立了良好的实验平台。

关键词：产肠毒素大肠杆菌 K99菌毛 fan操纵子

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