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circRNA-13096通过miR-24-3p调控鸡卵泡颗粒细胞增殖和孕酮生成

中国畜牧杂志 2024年第9期60卷 228-235页

作者：李德慧李涛丰源曲亮沈曼曼江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑与畜禽生物技术重点实验室江苏镇江212100 中国农业科学院家禽研究所江苏扬州225212 扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本研究通过敲低circRNA-13096后利用CCK8、ELISA技术检测细胞增殖和孕酮水平,利用RT-qPCR技术分析卵泡发育相关基因的表达水平变化,并利用生物信息学技术预测circRNA-13096结合的miRNA,通过RNAhybrid预测以及双荧光素酶验证circRNA-1309... 详细信息

本研究通过敲低circRNA-13096后利用CCK8、ELISA技术检测细胞增殖和孕酮水平,利用RT-qPCR技术分析卵泡发育相关基因的表达水平变化,并利用生物信息学技术预测circRNA-13096结合的miRNA,通过RNAhybrid预测以及双荧光素酶验证circRNA-13096与miR-24-3p结合位点;利用KOBAS网站分析miR-24-3p靶基因及富集的信号通路。结果显示:敲低circRNA-13096后促进了颗粒细胞增殖和孕酮分泌(P<0.05);STAR和CYP11A1基因表达水平上升(P<0.05),而FST表达水平下降(P<0.05);双荧光素酶结果显示,野生型circRNA-13096与miR-24-3p共转染荧光素酶活性降低(P<0.05);miR-24-3p mimic转染细胞可促进孕酮水平提高(P<0.05),通过miRDB和targetScan预测miR-24-3p靶基因,共预测到87个交集靶基因,富集在多个重要生物过程中,其中最显著的信号通路是MAPK信号通路(P<0.05)。由此可见,circRNA-13096在颗粒细胞中通过与miR-24-3p结合后发挥调控鸡卵泡颗粒细胞的增殖和孕酮分泌。

关键词：鸡环状RNA 颗粒细胞 miR-24-3p 卵泡

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miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

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中国家禽 2023年第2期45卷 20-26页

作者：吴宇慧席一凡张文慧程富富胡菜赵宗仪陈欣雨李熠张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 温州肯恩大学计算机科学与技术学院浙江温州325035

试验旨在探究精原干细胞(SSCs)形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆mi R-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green1-T2A-Puro构建mi R-302d过表达载体(mi R-302d mimics);合成mi R-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建mi R-302d干扰载体(mi R-302d inhibitor)。通过生物信息预测获得mi R-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型(WT)和突变型载体(MT);将mi R-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞,检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰mi R-302d后靶基因的表达变化。结果显示:成功构建mi R-302d的过表达和干扰载体;预测结果显示Tle4为mi R-302d的潜在靶基因,且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因;双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中,与转染WT+mi R-NC组相比,转染WT+mi R-302d组的双荧光素酶活性显著下降(P<0.05),而共转染MT+mi R-302d组的荧光素酶活性差异不显著(P>0.05),且过表达mi R-302d后下调Tle4的表达,而干扰mi R-302d后上调Tle4的表达。结果表明,miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

关键词： miR-302d Tle4 双荧光素酶报告检测

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鸡circ_PLXNA1鉴定及其在脂肪细胞分化中的功能预测

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东北农业大学学报 2022年第3期53卷 61-69页

作者：杨婷王来娣胡晓丹袁春友白皓王志秀江勇陈国宏常国斌江苏省动物遗传育种与分子设计重点实验室扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州大学农业科技发展研究院江苏扬州225009

环状RNA(circ RNA)由于其广泛性、稳定性、保守性等特点具有较高研究价值,已成为生物研究领域热点之一。为研究circ RNA在鸡脂肪细胞分化中作用,选择与前期发现在鸭脂肪细胞分化中具有重要作用的鸭circ_PLXNA1具有高度同源性的鸡circ_PL... 详细信息

环状RNA(circ RNA)由于其广泛性、稳定性、保守性等特点具有较高研究价值,已成为生物研究领域热点之一。为研究circ RNA在鸡脂肪细胞分化中作用,选择与前期发现在鸭脂肪细胞分化中具有重要作用的鸭circ_PLXNA1具有高度同源性的鸡circ_PLXNA1作验证分析。鸡circ_PLXNA1是一个稳定的环状转录本,核质分离试验发现鸡circ_PLXNA1主要定位在细胞质中。此外,circ_PLXNA1主要在鸡心脏和肝脏中表达。生物信息学分析结果表明,鸡circ_PLXNA1和预测的靶基因富集于Erb B、MAPK和Hedgehog等信号通路,表明鸡circ_PLXNA1可能通过调控靶基因间接参与脂肪细胞分化。

关键词：鸡 circ_PLXNA1 脂肪细胞鉴定功能预测

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猪METTL3基因表达水平与DON诱导IPEC-J2细胞损伤的关系

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畜牧兽医学报 2022年第3期53卷 688-699页

作者：许写石东风吴嘉韵吴圣龙王海飞吴正常包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

旨在初步探究猪m^(6)A甲基化酶METTL3基因表达水平与脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)损伤的关系。本研究构建了稳定干扰METTL3基因表达水平的IPEC-J2细胞系,用1μg·mL^(-1) DON诱导METTL3干扰... 详细信息

旨在初步探究猪m^(6)A甲基化酶METTL3基因表达水平与脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)损伤的关系。本研究构建了稳定干扰METTL3基因表达水平的IPEC-J2细胞系,用1μg·mL^(-1) DON诱导METTL3干扰组和对照组猪肠上皮细胞48 h,通过实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因、免疫相关基因、抗氧化酶相关基因表达水平,同时测定细胞增殖活性、细胞周期、细胞凋亡以及活性氧(ROS)水平。结果显示,与对照组相比,干扰组免疫相关基因TNF-α、IL-6、IL^(-1)2的表达水平产生了显著变化(P<0.05),凋亡相关基因Bax、Caspase3、Caspase9表达量均显著下降(P<0.05),抗氧化酶相关基因GPXs、CuZn-SOD、CAT表达量显著上升(P<0.05);细胞增殖活性显著提高,细胞总凋亡率显著降低(P<0.05),ROS水平极显著降低(P<0.01)。本研究结果表明,METTL3基因表达水平降低能一定程度地帮助IPEC-J2细胞抵抗因DON诱发的细胞凋亡和炎症。METTL3表达下调有利于缓解DON对于细胞损伤产生的一系列炎症反应,为今后细致研究RNA甲基化修饰在仔猪抵抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇损害调控中的作用机制提供了理论基础。

关键词：猪 METTL3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇

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褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响

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中国兽医科学 2021年第2期51卷 251-256页

作者：胡慧茹王健张柳明王彦虎牛浩原李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10~12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添... 详细信息

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10~12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添加浓度,并通过活性氧(ROS)水平检测、谷胱甘肽(GSH)水平检测、三磷酸腺苷(ATP)含量检测以及纺锤体组装来分析褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的作用。结果,1×10^(-6) mol/L的褪黑素能够降低细胞内ROS水平,提高GSH水平,减弱高龄小鼠卵母细胞的氧化应激,同时还可以通过维持细胞内正常的能量(ATP)供应来保证纺锤体的正常形态,促进卵母细胞体外成熟。结论认为,在体外成熟培养体系中添加1×10^(-6) mol/L的褪黑素可以通过改善卵母细胞的质量,促进高龄小鼠卵母细胞的体外成熟。

关键词：褪黑素高龄小鼠卵母细胞体外成熟

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褪黑素在高龄小鼠卵母细胞体外成熟中的促进作用

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第1期42卷 12-18页

作者：胡慧茹王健马金亮张柳明冯云奎褚长江瞿静雯冀德君李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以10~12月龄的ICR雌鼠为试验材料,分别将不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol·L^(-1))添加至体外成熟培养液中,通过判断卵母细胞的成熟率、受精率及囊胚率筛选出褪黑素最适宜... 详细信息

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以10~12月龄的ICR雌鼠为试验材料,分别将不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol·L^(-1))添加至体外成熟培养液中,通过判断卵母细胞的成熟率、受精率及囊胚率筛选出褪黑素最适宜的添加浓度,并通过线粒体分布检测、活性氧水平检测和细胞早期凋亡水平检测,分析褪黑素在卵母细胞成熟中的作用。结果表明:10-6 mol·L^(-1)的褪黑素添加至体外成熟培养液中能有效改善高龄小鼠卵母细胞的成熟、受精和胚胎发育,可通过改善线粒体的分布和活性,降低氧化应激水平和早期细胞凋亡,从而减弱衰老所引起的卵母细胞退化。综合而言,在体外成熟培养液中添加10-6mol·L^(-1)的褪黑素可提高卵母细胞的核质成熟,改善高龄小鼠卵母细胞的质量。

关键词：高龄小鼠褪黑素卵母细胞体外成熟

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辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2021年第5期57卷 131-136页

作者：褚长江张柳明王彦虎马金亮胡慧茹冯云奎李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

本实验旨在探究辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响。选取3只1~2岁的健康湖羊采集精液,在基础稀释液中添加0、5、50、250、500μmol/L的辅酶Q_(10),检测在20℃保存过程中的湖羊精子活力、活率、曲线速度、质膜完整率、顶体完整率... 详细信息

本实验旨在探究辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响。选取3只1~2岁的健康湖羊采集精液,在基础稀释液中添加0、5、50、250、500μmol/L的辅酶Q_(10),检测在20℃保存过程中的湖羊精子活力、活率、曲线速度、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量等指标。结果表明:随着在常温保存稀释液中添加辅酶Q_(10)浓度的提升,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,当辅酶Q_(10)浓度为50μmol/L时,精子活力、质膜和顶体完整率显著提高,ROS含量显著降低。本实验条件下,在湖羊精液常温保存稀释液中添加50μmol/L辅酶Q_(10)能够提高湖羊精液常温保存效果。

关键词：辅酶Q_(10) 湖羊精液常温保存

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鸡Stra8原核表达载体的构建及多克隆抗体血清的制备

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中国家禽 2021年第10期43卷 10-16页

作者：赵宗仪王颖洁靳锴左其生张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

试验旨在探究视黄酸介导的Stra8信号在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制。以如皋黄鸡睾丸cDNA为模板扩增Stra8基因CDS区,并与pET-28a载体相连获得原核重组表达载体pET-28a-Stra8,然后转染大肠杆菌BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳... 详细信息

试验旨在探究视黄酸介导的Stra8信号在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制。以如皋黄鸡睾丸cDNA为模板扩增Stra8基因CDS区,并与pET-28a载体相连获得原核重组表达载体pET-28a-Stra8,然后转染大肠杆菌BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导外源基因表达,离心收集菌液,并用超声波破碎等方法收集表达的蛋白,用纯化的蛋白作为抗原制备兔源抗体,产生带有免疫抗体的兔血;取全血,经血凝离心等步骤后获取血清,通过SDS-PAGE检测抗体的纯度,将获得的含有多克隆抗体的血清进行ELISA检测效价。结果显示:成功构建pET-28a-Stra8重组载体,IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE分析后显示,STRA8蛋白大小约为55 ku;ELISA检测显示在血清稀释比为1∶256000时P/N=3.3>2.1,达到阳性血清合格标准;Western blotting结果显示制备的多克隆抗体血清可结合STRA8蛋白,该结果为进一步研究Stra8在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制提供了基础。

关键词： Stra8 原核表达载体 IPTG诱导多克隆抗体

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代谢产物泛酸的筛选及其在原始生殖细胞形成过程中的功能验证

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中国家禽 2025年第1期47卷 15-23页

作者：程富富武嵘峰耿晴晴赵梓多王哲牛英杰左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后... 详细信息

研究旨在探究差异代谢物泛酸(PA)对鸡胚胎干细胞(ESCs)向原始生殖细胞(PGCs)分化过程中的作用,为从代谢角度解析PGCs形成机制提供新的理论基础。试验基于转录组学筛选出PA,通过CCK8与EdU试验探究PA及其代谢抑制剂PZ的适宜添加浓度;最后,分别通过观察细胞形态、qRT-PCR检测PGCs特异标记基因、间接免疫荧光和流式细胞分析等分析PA代谢在ESCs向PGCs分化过程中的作用。结果显示:参与PA代谢相关的基因在ESCs与PGCs中呈现差异性表达,且富集于生殖细胞分化相关的通路(Pantothenate and CoA biosynthesis、TGF-beta signaling pathway和AMPK signaling pathway);PA和PZ的适宜添加浓度分别为20μmol/L和80 nmol/L;PA组在第6天的类胚体数目显著低于PZ组,PA组中CVH和C-KIT3的表达量显著低于PZ组(P<0.01);PA组的DDX4阳性细胞数显著低于PZ组(P<0.01)。结果表明添加PA抑制PGCs的形成,添加PZ促进PGCs的形成。

关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞代谢物泛酸鸡

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牛血清白蛋白对湖羊精液低温保存效果的影响

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中国畜牧杂志 2021年第8期57卷 165-169页

作者：王彦虎张柳明褚长江马金亮冯云奎郭裕娇龚常亮李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究牛血清白蛋白(BSA)对湖羊精液低温保存效果的影响,在湖羊精液低温保存的稀释液中添加不同浓度BSA(0、1、2、3、4、5、6 g/L),检测分析BSA对精子在4℃保存条件下的活力、活率、顶体完整率和质膜完整率。结果表明:保存24~96 h时,2~3... 详细信息

为探究牛血清白蛋白(BSA)对湖羊精液低温保存效果的影响,在湖羊精液低温保存的稀释液中添加不同浓度BSA(0、1、2、3、4、5、6 g/L),检测分析BSA对精子在4℃保存条件下的活力、活率、顶体完整率和质膜完整率。结果表明:保存24~96 h时,2~3 g/L BSA组的精子活率显著高于对照组;保存120 h时,3g/LBSA组的精子活率显著高于其他组;保存24、48、120h时,3g/LBSA组的精子活力显著提高;保存24~120 h时,6 g/L BSA组的精子活力低于对照组;保存48~72 h时,1~4 g/L BSA组的精子质膜完整率显著提高;保存48~72 h时,4 g/L BSA组的顶体完整率显著高于对照组;保存96~120 h时,3 g/L BSA组的顶体完整率显著高于对照组。本研究结果表明,在4℃条件下,1~5 g/L BSA可以提高湖羊精子活率、活力和质膜完整率,其中3 g/L BSA的作用效果最佳。

关键词：牛血清白蛋白湖羊精液低温保存质膜完整率

来源：评论

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