检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2017年第9期33卷 1278-1283页

作者：戴华张海霞王美玲葛凡沈颖扬州大学医学院江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225001

目的制备人神经菌毛素1的b1b2结构域(Hu NRP1b)蛋白,研制抗Hu NRP1b单克隆抗体(m Ab)。方法将Hu NRP1b的编码基因克隆入p ET22b载体,构建重组表达质粒p ET-Hu NRP1b,经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌并进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组... 详细信息

目的制备人神经菌毛素1的b1b2结构域(Hu NRP1b)蛋白,研制抗Hu NRP1b单克隆抗体(m Ab)。方法将Hu NRP1b的编码基因克隆入p ET22b载体,构建重组表达质粒p ET-Hu NRP1b,经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌并进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组Hu NRP1b蛋白(r Hu NRP1b,His-Hu NRP1b)的表达。将获得的His-Hu NRP1b免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,以融合表达可溶性标签"触发因子"(TF)的重组蛋白TF-Hu NRP1b建立检测抗Hu NRP1bm Ab的间接ELISA,筛选阳性杂交瘤细胞株;以ELISA、Western blot法分析m Ab的特异性,以间接免疫荧光法(IFA)鉴别m Ab识别天然蛋白的能力。结果 His-Hu NRP1b得到成功表达;获得2株稳定分泌抗Hu NRP1bm Ab的细胞株(1A10、6A2)。Western blot结果显示m Ab与表达r Hu NRP1b的重组菌反应,分别在相对分子质量(Mr)34 000(His-Hu NRP1b)及Mr89 000(TF-Hu NRP1b)处出现特异性条带,而与空载体表达菌不反应,说明m Ab特异性针对r Hu NRP1b;IFA结果表明,所获得的m Ab能够识别乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞表面表达的天然Hu NRP1蛋白,说明m Ab具有识别天然的Hu NRP1的能力。结论成功制备了小鼠抗Hu NRP1bm Ab。

关键词：人神经菌毛素1 b1b2结构域(HuNRP1b) 单克隆抗体

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迷迭香酸甲酯对6-OHDA所致脑内氧化损伤的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2017年第4期38卷 30-34页

作者：王小洪丁冬怡孙志颖杨子坤潘思华曹桂云扬州大学医学院/江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225001

采用脑内定位注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病小鼠模型,以阿朴吗啡诱导的转圈试验、转棒试验检测小鼠的运动功能,免疫组织化学染色法检测各组小鼠纹状体区TH阳性纤维的量,以化学比色法测定小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢... 详细信息

采用脑内定位注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病小鼠模型,以阿朴吗啡诱导的转圈试验、转棒试验检测小鼠的运动功能,免疫组织化学染色法检测各组小鼠纹状体区TH阳性纤维的量,以化学比色法测定小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)活性水平,以Western-blot检测小鼠纹状体区SOD1、SOD2和Nrf2水平,q-PCR检测各组脑内NQO1、Sod1、Sod2、Cat和Gpx1水平。结果表明:迷迭香酸甲酯可显著减少阿朴吗啡诱导的PD小鼠旋转圈数量,增加PD小鼠在转棒上的停留时间、纹状体区TH阳性纤维量及SOD1、SOD2和Nrf2的蛋白水平。结果提示迷迭香酸甲酯对6-OHDA诱导的PD小鼠多巴胺能神经元损伤有显著的保护作用,其可能通过抑制脑内氧化应激水平而发挥神经保护作用。

关键词：帕金森病迷迭香酸甲酯 6-羟基多巴胺氧化应激

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利用CRISPR／Cas9系统抑制Kan耐药基因水平转移研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第4期37卷 281-286页

作者：徐桐桐卞晓锐单彩龙赵丹焦红梅阴银燕李国才扬州大学医学院、江苏省中西医结合老年病防治重点实验室、江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室、江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 225001

目的研究细菌耐药基因水平转移的控制技术。方法以卡那霉素耐药基因Kan为靶基因设计3组靶向sgrna．分别退火后插入到pCas9质粒中，重组菌用氯化钙法制成感受态，将含有Kan耐药基因的质粒pET-30a向其转化，转化菌液分别涂布含氯霉素和含... 详细信息

目的研究细菌耐药基因水平转移的控制技术。方法以卡那霉素耐药基因Kan为靶基因设计3组靶向sgrna．分别退火后插入到pCas9质粒中，重组菌用氯化钙法制成感受态，将含有Kan耐药基因的质粒pET-30a向其转化，转化菌液分别涂布含氯霉素和含氯霉素／卡那霉素平板，比较各组转化效率。将携带Kan特异性sgrna的重组质粒分别转化含pET-30a的大肠埃希菌，PCR检测Kan耐药基因的降解．并绘制转化子在氯霉素平板上的生长曲线以分析特异性sgrna对受体菌生长的影响。结果所设计的3组sgrna中有2组可以介导CRISPR／Cas9系统对Kan耐药基因水平转移的完全抑制．其余1组也可使转移效率降低88．08％。抑制机制为特异性CRISPR／Cas9系统降解了Kan耐药基因。未发现3组sgrna对受体菌生长有明显影响。结论特异性CRISPR／Cas9系统可抑制细菌Kan耐药基因的水平转移。

关键词： CRISPR/Cas9系统细菌耐药性水平基因转移

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绒毛栗色鼠尾草的化学成分分析

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中国实验方剂学杂志 2017年第20期23卷 47-50页

作者：曹桂云黄娇张启航李珂珂申丽扬州大学医学院江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225001 大连大学医学院辽宁大连116622

目的:研究绒毛栗色鼠尾草(Salvia castanea)根的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱,HPLC柱色谱等方法对绒毛栗色鼠尾草70%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从绒毛栗色鼠尾草中分离... 详细信息

目的:研究绒毛栗色鼠尾草(Salvia castanea)根的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱,HPLC柱色谱等方法对绒毛栗色鼠尾草70%乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从绒毛栗色鼠尾草中分离出12个化合物,分别鉴定为正二十六烷(1),β-谷甾醇(2),3-O-乙酰基齐墩果醛(3),齐墩果酸(4),5,5'-二丁氧基-2,2'-双环呋喃(5),丁草胺(6),亚麻酸乙酯(7),咖啡酸乙酯(8),香草酸(9),原儿茶酸(10),原儿茶醛(11),5-羟甲基-2-呋喃甲醛(12)。结论:化合物3,5,6为首次从鼠尾草属植物中分离得到,化合物1,4,7~10和12为首次从该植物中分离得到。

关键词：绒毛栗色鼠尾草化学成分分离鉴定

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迷迭香酸乙酯对MPTP诱导的帕金森小鼠的保护作用

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时珍国医国药 2017年第10期28卷 2346-2348页

作者：曹桂云王小洪李珂珂申丽郁多男扬州大学医学院江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225001 大连大学医学院辽宁大连116622 扬州大学医学院江苏扬州225001

目的探讨迷迭香酸乙酯(Ethyl rosmarinate,ER)对MTPT诱导的帕金森小鼠的保护作用。方法用MPTP处理C57/BL6雄性小鼠用制作PD小鼠模型,通过行为学实验检测小鼠的自主活动、爬杆时间、游泳和悬挂能力。以Western blot的方法检测小鼠黑质TH... 详细信息

目的探讨迷迭香酸乙酯(Ethyl rosmarinate,ER)对MTPT诱导的帕金森小鼠的保护作用。方法用MPTP处理C57/BL6雄性小鼠用制作PD小鼠模型,通过行为学实验检测小鼠的自主活动、爬杆时间、游泳和悬挂能力。以Western blot的方法检测小鼠黑质TH蛋白的表达情况。以生化法测定小鼠中脑黑质取超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)得水平。结果 ER可以提高PD小鼠10min内的运行距离,缩短PD小鼠爬杆时间,增加PD小鼠游泳、悬挂能力评分,提高黑质TH蛋白的表达,降低i NOS的表达,提高脑组织SOD、GSH-Px酶活性,降低MDA含量。结论 ER对PD模型小鼠的治疗作用可能是通过抑制氧化损伤和炎症反应实现的。

关键词：迷迭香酸乙酯帕金森病神经保护 MPTP

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鼠神经菌毛素1蛋白的真核表达及其鉴定

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齐齐哈尔医学院学报 2017年第19期38卷 2233-2235页

作者：戴华沈颖葛凡张海霞扬州大学江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室/医学院 225001

目的制备重组鼠神经菌毛素1(mNRP1)蛋白。方法将表达载体pCMV3-mNRP1-flag(pCMV-mNRP1)转化大肠杆菌DH5α感受态,扩增重组质粒;随后将pCMV-mNRP1转染哺乳动物细胞株HEK293,间接免疫荧光法(IFA)及western blot法鉴定重组蛋白mNRP1(flag-mNRP1)的表达。结果 IFA及western blot结果显示重组质粒转染HEK293后,flag-mNRP1获得有效表达,融合蛋白相对分子质量约为120 000。结论重组蛋白mNRP1在真核表达系统中获得成功表达,该蛋白的获得为进一步研究NRP1的生物学功能提供有效的生物材料。

关键词：神经菌毛素1 真核表达系统重组蛋白

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神经菌毛素1 b结构域的克隆及表达

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生物技术通讯 2017年第4期28卷 447-450,518页

作者：孔苗苗戴长松葛凡张海霞沈颖戴华扬州大学江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏省中西医结合老年病防治重点实验室医学院江苏扬州225001

目的:制备重组人神经菌毛素1(NRP1)b结构域蛋白。方法:采用PCR技术,从p GEM-NRP1克隆载体中扩增人NRP1 b结构域(HuNRP1~b)cDNA,并将其克隆入pCold TF,构建重组原核表达质粒pCold-HuNRP1~b并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,制备重组大肠杆... 详细信息

目的:制备重组人神经菌毛素1(NRP1)b结构域蛋白。方法:采用PCR技术,从p GEM-NRP1克隆载体中扩增人NRP1 b结构域(HuNRP1~b)cDNA,并将其克隆入pCold TF,构建重组原核表达质粒pCold-HuNRP1~b并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,制备重组大肠杆菌BL21(DE3)(pCold-HuNRP1~b),低温条件下用IPTG诱导重组菌的表达,制备重组蛋白TF-HuNRP1~b。结果:酶切、测序结果表明pCold-HuNRP1~b构建成功,经SDS-PAGE分析,重组质粒转化表达菌后重组蛋白TF-HuNRP1b获得表达,融合蛋白相对分子质量约90×10~3。结论:获得原核表达的重组HuNRP1~b蛋白,为该蛋白的规模化生产及其单克隆抗体的制备提供了有效的生物材料。

关键词：神经菌毛素1 cDNA 克隆重组蛋白

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