检索结果-内蒙古大学图书馆

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2005年第2期26卷 1-3页

作者：薛峰张评浒刘晓文唐应华龙进学高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

通过对父母代肉鸡、水禽禽流感病毒H5血清血凝抑制抗体水平连续跟踪监测。探讨H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律。结果表明:雏鸡7日龄时母源抗体水平达最大值,20日龄时母源抗体下降到极低水平,雏鸡最佳首次免疫日龄为10日... 详细信息

通过对父母代肉鸡、水禽禽流感病毒H5血清血凝抑制抗体水平连续跟踪监测。探讨H5亚型禽流感疫苗免疫肉鸡、水禽后抗体消长规律。结果表明:雏鸡7日龄时母源抗体水平达最大值,20日龄时母源抗体下降到极低水平,雏鸡最佳首次免疫日龄为10日龄左右,二次免疫应根据鸡群母源抗体水平于首次免疫后100d左右进行。雏鹅、鸭3日龄进行首次免疫,水禽对禽流感疫苗产生良好的免疫应答,并于免疫后25～30d达到抗体高峰,但首次免疫抗体维持时间不长,最佳二次免疫时间应在首次免疫后30d左右进行。

关键词：抗体消长规律疫苗免疫 H5亚型禽流感水禽肉鸡母源抗体水平血凝抑制抗体禽流感病毒禽流感疫苗跟踪监测水平连续 10日龄免疫日龄二次免疫免疫应答维持时间免疫抗体免疫时间父母代最大值 3日龄雏鸡最佳

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表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

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中国兽医学报 2009年第10期29卷 1264-1268页

作者：郦晓琼吴艳涛徐晓静王郁杨扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用聚合酶链反应或反转录-聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构... 详细信息

采用聚合酶链反应或反转录-聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和pMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA。rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA。

关键词：禽流感病毒马立克氏病病毒血凝素同源重组

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鸡沙门氏菌弱毒苗与微生态制剂联合应用的效果

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中国兽医学报 2003年第2期23卷 155-156页

作者：潘志明张小荣焦新安刘文博甘军纪高崧张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

将鸡沙门氏菌弱毒苗分别与 2种不同的微生态制剂配合对 AA肉鸡实施免疫。结果表明 ,弱毒苗单独应用组、联合应用 1组和 2组的免疫保护效率分别为 75 %、90 %和 90 % ,均与攻毒对照组 (40 % )存在显著差异 (P <0 .0 5 ) ;攻毒 2 0 d... 详细信息

将鸡沙门氏菌弱毒苗分别与 2种不同的微生态制剂配合对 AA肉鸡实施免疫。结果表明 ,弱毒苗单独应用组、联合应用 1组和 2组的免疫保护效率分别为 75 %、90 %和 90 % ,均与攻毒对照组 (40 % )存在显著差异 (P <0 .0 5 ) ;攻毒 2 0 d后所有存活鸡细菌分离结果显示 ,上述 3个试验组细菌分离率分别为 5 3.5 %、5 5 %和 5 .5 % ,也均与攻毒对照组 (75 % )存在显著性差异 (P <0 .0 5 )。由此认为 ,该弱毒苗与上述微生态制剂联合应用的效果明显 ,具有较好的应用前景。

关键词：联合应用鸡沙门氏菌弱毒苗微生态制剂免疫效力

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表达鸡白细胞介素1β基因重组鸡痘病毒的构建

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中国兽医科技 2004年第1期34卷 12-16页

作者：邵卫星卢建红刘玉良韦栋平彭大新刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

从伴刀豆球蛋白 (ConA)刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 1β(ChIL 1β)编码区基因 ,通过与GenBank上登录的ChIL 1β序列 (Y15 0 0 6 )进行比较。结果显示 ,在ChIL 1β基因编码区的 10 4位、30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变... 详细信息

从伴刀豆球蛋白 (ConA)刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素 1β(ChIL 1β)编码区基因 ,通过与GenBank上登录的ChIL 1β序列 (Y15 0 0 6 )进行比较。结果显示 ,在ChIL 1β基因编码区的 10 4位、30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变化 ;相应的氨基酸在 35位也发生了变化。虽然 30 6位、387位和 4 32位的核苷酸发生了变化 ,但没有引起氨基酸变化 ,说明这一区域的氨基酸具有一定的保守性。从氨基酸的性质上看 ,35位 (Asp→Ala)由酸性氨基酸变为中性氨基酸 ,这可能是同一种属的不同品种间的正常变化。以鸡痘病毒 (FPV )为活载体 ,构建了表达ChIL 1β的重组鸡痘病毒rFPV IL 1β。应用XTT/PMS方法检测rFPV IL 1β感染的成纤维细胞 72h后表达ChIL 1β的生物活性 ,效价为 1.0× 10 5U /mL ,证明FPV能有效地表达ChIL 1β。

关键词：鸡痘病毒基因重组鸡白细胞介素1β 生物活性鸡脾细胞核苷酸氨基酸品种 FPV 细胞因子

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检测鸭呼肠孤病毒抗体间接ELISA方法的建立

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中国兽医学报 2014年第1期34卷 26-29,38页

作者：孙陈莉杨瑞王义敏赵娜张小荣彭大新吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

RT-PCR扩增鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的σB基因,克隆到pET-32a(+)表达载体,再转化大肠杆菌Transetta(DE3);含有重组质粒pET-σB的大肠杆菌经IPTG诱导,获得大小为55 000的以包涵体形式表达的σB重组蛋白。Western blotting显示,σ... 详细信息

RT-PCR扩增鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)的σB基因,克隆到pET-32a(+)表达载体,再转化大肠杆菌Transetta(DE3);含有重组质粒pET-σB的大肠杆菌经IPTG诱导,获得大小为55 000的以包涵体形式表达的σB重组蛋白。Western blotting显示,σB重组蛋白能够与兔抗DRV多抗血清特异性结合。以高亲和NI-NTA树脂在变性条件下纯化、梯度尿素复性的σB重组蛋白为包被抗原,建立了检测DRV抗体的间接ELSIA方法。分别以间接ELSIA方法和血清中和试验对DRV感染鸭血清和SPF鸭血清进行检测,两者的符合率为100%。该间接ELSIA方法对鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒和禽流感病毒阳性血清均无交叉反应。

关键词：鸭呼肠孤病毒 σB重组蛋白原核表达间接ELISA

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多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌

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中国预防兽医学报 2002年第1期24卷 48-51页

作者：文其乙刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水... 详细信息

建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。

关键词：产气荚膜梭菌 α-毒素肠毒素多重聚合酶链反应粪样检测

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鸡马立克氏病重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗免疫效力试验

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中国家禽 2004年第20期26卷 7-9页

作者：胡传伟彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-g... 详细信息

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-gB/R二价冻干苗对超强毒株Md5和RB1B攻击时的免疫保护效果明显优于HVT冻干苗,接近CVI988/Rispens的水平,本研究证明HVT+rFPV-gB/R二价冻干疫苗是一种安全、方便、高效的疫苗。

关键词：鸡马立克氏病超强毒株冻干火鸡疱疹病毒重组鸡痘病毒疫苗免疫保护效果 RB1 效力试验血清

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表达鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建

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农业生物技术学报 2002年第2期10卷 152-155页

作者：程坚刘秀梵彭大新吴艳涛扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室扬州225009

以插入鸡Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)cDNA序列的重组质粒AIFN为模板,根据鸡痘病毒早晚期启动子PE/L的序列设计上游引物,鸡IFN-Ⅱ基因的cDNA3’端序列设计下游引物,采用PCR法扩增包括启动子PE/L和鸡IFN-Ⅱ全长cDNA序列的基因片段。将该扩增片段... 详细信息

以插入鸡Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)cDNA序列的重组质粒AIFN为模板,根据鸡痘病毒早晚期启动子PE/L的序列设计上游引物,鸡IFN-Ⅱ基因的cDNA3’端序列设计下游引物,采用PCR法扩增包括启动子PE/L和鸡IFN-Ⅱ全长cDNA序列的基因片段。将该扩增片段定向插入鸡痘病毒转移载体1175中,获重组转移载体1175IFN,用以转染已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡(Gallusgallus)胚成纤维细胞(CEF)。1175IFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了表达IFN-Ⅱ的重组鸡痘病毒rFPV-IFN-Ⅱ。通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV-IFN-Ⅱ。以细胞病变抑制实验证实,rFPV-IFN-Ⅱ感染的CEF表达了具有抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的鸡IFN-Ⅱ。rFPV-IFN-Ⅱ(M.O.I=0.01)感染CEF72h后,培养上清中IFN-Ⅱ的表达量为1280U/mL。动物实验表明,rFPV-IFN-Ⅱ接种雏鸡7d或14d后,其在体内表达的IFN-Ⅱ可显著减轻载体鸡痘病毒对1日龄SPF雏鸡体重增长的抑制作用。

关键词：鸡Ⅱ型干扰素重组鸡痘病毒表达

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鹅源新城疫病毒F和HN基因的表达及功能鉴定

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2006年第4期27卷 8-11页

作者：胡顺林张艳梅孙庆吴艳涛刘玉良刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

鹅源新城疫病毒的F和HN基因经RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pCR2．1载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,构建了F基因的表达载体(pCI-F)和HN基因的表达载体(pCI-HN)。间接免疫荧光(IFA)鉴定结果表明:F和HN基因均能在细胞... 详细信息

鹅源新城疫病毒的F和HN基因经RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pCR2．1载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,构建了F基因的表达载体(pCI-F)和HN基因的表达载体(pCI-HN)。间接免疫荧光(IFA)鉴定结果表明:F和HN基因均能在细胞中得到较好的表达;将pCI-F和pCI-HN共转染CEF和COS细胞,转染的细胞中能形成明显的合胞体。而用pCI-F单独进行转染时,不能产生合胞体,说明F蛋白要发挥其融合作用必须要有HN蛋白的参与,同时也进一步证明F和HN蛋白与病毒的融合特性密切相关。

关键词：鹅新城疫病毒 F蛋白表达合胞体

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2002—2009年中国华东地区家禽低致病性禽流感的病原学检测与分析

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中国农业科学 2011年第1期44卷 153-159页

作者：赵国刘晓文钱忠明薛峰彭宜彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院/农业部畜禽传染病学重点开放实验室

【目的】为确定中国华东地区家禽中禽低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza,LPAI)的流行和分布状况。【方法】2002年7月至2009年9月在江苏省扬州市活禽市场(live poultry markets,LPMs)采集来自不同省份的家禽泄殖腔拭子11 64... 详细信息

【目的】为确定中国华东地区家禽中禽低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza,LPAI)的流行和分布状况。【方法】2002年7月至2009年9月在江苏省扬州市活禽市场(live poultry markets,LPMs)采集来自不同省份的家禽泄殖腔拭子11 645个,用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,进行了长达8年的LPAI的病毒学监测。【结果】禽流感阳性样品1 158个,总分离率9.94%。所分离到的亚型及各亚型分离率从高到低依次为H3、H6、H11、H1、H4、H9、H10、H8。【结论】禽流感的分布季节性非常明显,以冬、春为高,各亚型又有其不同分布特点。到目前为止,已经从家鸭中分离到8种HA亚型,依次为H1、H3、H4、H6、H8、H9、H10、H11;7种NA亚型,包括N1、N2、N3、N4、N5、N6、N8,两者之间有17种组合,与野鸭的带毒情况十分相似。家鸭还很容易发生混合感染,2007年以来以H6亚型为主,H3、H11、H4、H9等很多亚型都可与其混合感染,这为禽流感病毒(avian influenza viruses,AIVs)基因重组产生新的亚型及毒力的变异提供了很好的载体。

关键词：低致病性禽流感流行病学家禽

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