检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2007年第3期34卷 426-429页

作者：胡顺林张艳梅孙庆刘玉良吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、... 详细信息

参照GenBank上公布的鹅源新城疫病毒ZJI株全序列,设计8对引物,经RT-PCR法从尿囊液中扩增目的片段后,分别克隆进pCR2.1载体,将Ⅰ～Ⅶ7对引物的扩增片段依次亚克隆到TVT7R转录载体中,构建了含NDV全基因组cDNA的转录载体(pNDVZJI),将Ⅴ、Ⅵ和Ⅷ3对引物的扩增片段分别克隆进pCR2.1载体,并亚克隆到表达质粒pCI-neo上,构建了L基因的真核表达载体(pCI-L),pNDVZJI、pCI-L与另外两个辅助表达质粒(pCI-NP和pCI-P)共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有血凝性的鹅源新城疫病毒,ZJI株鹅源新城疫病毒的成功拯救为后续相关研究工作的开展打下了基础。

关键词：新城疫病毒 cDNA 转染拯救

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表达禽流感病毒特异性siRNA分子减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

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病毒学报 2007年第2期23卷 125-129页

作者：刘文博张小荣曹永忠王海燕吴艳涛焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

为了寻找一种新的短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）片段的表达和递送系统，并进行评价，根据禽流感病毒核苷酸序列，设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子，人工合... 详细信息

为了寻找一种新的短干扰RNA（short interfering RNA，siRNA）片段的表达和递送系统，并进行评价，根据禽流感病毒核苷酸序列，设计了3条分别针对A型禽流感病毒核衣壳蛋白、聚合酶A和H5亚型禽流感病毒血凝素的特异性siRNA分子，人工合成相应DNA片段，退火后形成双链，与阴性对照片段分别连接到构建的pSIREN—ASD ZsGreen载体鼠源U6启动子下游，测序鉴定证实获得了阳性质粒，分别命名为PAZ—NP、PAZ-PA、PAZ—HA和PAZ-NC，1ng的质粒可以完全抑制50个PFU的禽流感病毒在MDCK细胞上的复制，细胞不产生任何病变，细胞上清的血凝效价为2^0，而对照组细胞在病毒感染36～48h后细胞变圆、死亡、脱落，其细胞上清的血凝效价可达2^4。将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550得到重组沙门氏菌X4550（PAZ—NP）、X4550（PAZ-PA）、X4550（PAZ—HA）和X4550（PAZ-NC）。对4日龄雏鸡口服1×10^9菌落形成单位（CFU）的重组菌后第1d、7d、15d用10。ELDso的H5亚型AIV进行攻毒，最后一次攻毒后观察15d，实验结束时采泄殖腔棉拭子对存活鸡进行病毒分离。结果表明，表达不同的siRNA分子对雏鸡有一定的保护力，保护率为27％～50％不等，存活鸡泄殖腔棉拭子未分离到病毒，说明重组减毒沙门氏菌携带质粒在体内产生的siRNA能够对机体产生一定保护力。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌 siRNA H5亚型禽流感病毒递送系统保护力

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1株H1亚型水禽流感病毒分离株的致病特性和表面膜蛋白基因的序列分析

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 785-789,794页

作者：薛峰刘慧谋彭宜张评浒钱忠明刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收... 详细信息

采用常规血清学试验和特异性RT-PCR方法,对我国华东地区家养水禽流感病毒进行了长达4年的跟踪监测,分离到多株H1亚型禽流感病毒,并对其中的1株A/Duck/Yangzhou/163/2003(简称Dk/YZ/163/03)的血凝素基因进行了序列测定,并与GenBank中收录的其他序列进行了比较。结果发现,Dk/YZ/163/03的血凝素基因(HA)与禽流感日本分离株A/Japan/91(H1)的同源性最高;而神经氨酸酶基因(NA)与Mallard dk/A1b/35/1976(H1N1)同源性最高;其推导的氨基酸剪切位点序列为P-S-I-Q-S-R,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列,这与该毒株对SPF鸡和BALB/c小鼠的低致病特性相吻合。

关键词：禽流感病毒 H1亚型 HA NA 致病性剪切位点

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江苏省猪高热病病例主要继发感染病毒的多重PCR检测

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中国兽医科学 2007年第12期37卷 1029-1034页

作者：叶俊平盛瑜朱丽娜高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率... 详细信息

应用建立的2个多重PCR方法，对2005～2006年收集于江苏省的211份猪高热病疑似病料进行了检测。结果，PRRSV阳性率为51．2％，PCV2阳性率为44．1％，CSFV阳性率为10．4％，PPV阳性率为3．9％，PRV阳性率为2．4％。2005年病料中PCV2阳性率为21．2％，2006年为73．2％；2005年PRRSV阳性率为38．1％，2006年为67．7％。2006年猪高热病疫情比2005年严重，PCV2和PRRSV可能在其中发挥了协同致病作用。对10个PRRSV分离株ORF5基因和Nsp2基因进行的测序表明，2006年分离株Nsp2基因中有连续87个碱基的缺失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型猪细小病毒猪瘟病毒猪伪狂犬病病毒猪高热病多重PCR ORF5基因 Nsp2基因

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鸡IL-2、IL-18、IFN-γ cDNA和CpG DNA在减毒沙门菌运送H5亚型禽流感DNA疫苗中的佐剂作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第6期27卷 570-573页

作者：胡青海潘志明张成全焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室 225009

目的探讨鸡IL-2、IL-18、IFN-γcDNA和CpG DNA在减毒沙门菌运送H5亚型禽流感DNA疫苗中的佐剂作用。方法将携带禽流感病毒(AIV)DNA疫苗的重组沙门菌SL7207(pVAX1-HA- IL2)、SL7207(pVAX1-HA-IL18)、SL7207(pVAX1-HA-IFN-γ)、SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA)和SL7207(pVAX1)经口服和滴鼻途径首免1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,测定免疫鸡的体液和黏膜免疫应答水平,并进行攻毒保护试验。结果二免后3周,SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA- IFN-γ)免疫组以及SL7207(pVAX1-HA)和SL7207(pVAX1-IFN-γ)联合免疫组鸡产生了较高水平的特异性黏膜免疫应答(P<0.05),但重组菌免疫鸡血清中抗AIV HI抗体水平与空载体组相比差异无统计学意义。SL7207(pVAX1-HA-CpG)、SL7207(pVAX1-HA-IFN-γ)的免疫保护指数显著高于阴性对照组。结论初步观察佐剂效应依次为:CpG>IFN-γ>IL-18,IL-2未表现出佐剂效应。

关键词：佐剂减毒沙门菌 H5亚型禽流感 DNA疫苗

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禽病原性大肠杆菌的致病机理

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中国家禽 2007年第18期29卷 54-57页

作者：陈祥高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室

　　1885年,Escherich氏分离并描述了大肠杆菌(Escherichia coli,***),它构成了所有温血动物大肠中主要的需氧微生物菌群.……

关键词：致病机理 OMP 血清型血清变种禽大肠杆菌病菌毛抗原大肠杆菌败血症分离株禽病原性大肠杆菌致病性菌株

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鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白单克隆抗体的制备及其初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1197-1199页

作者：王彦红马怀良时红星吴培培彭大新刘秀梵扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室江苏扬州225009

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠... 详细信息

目的:经发表的鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)ORF214基因序列,利用PCR方法扩增出目的片段,测序后并克隆至原核表达载体pET-28a,用表达产物制备抗FPVORF214蛋白单克隆抗体(mAb)。方法:以鸡痘病毒ORF214原核表达蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,用间接ELISA方法检测筛选。结果:阳性细胞株经3代克隆纯化后,获得3株能稳定分泌抗FPVORF214蛋白mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2F10C9、3C3B10、2G8G7。3株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与FPVORF214蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在1×102以上,mAb腹水效价达1×104以上。结论:该特异性mAb的研制成功为进一步研究ORF214的生物学特性奠定基础。

关键词：鸡痘病毒 ORF214 单克隆抗体(mAb)

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抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白特异性单克隆抗体的研制及鉴定

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中国兽医学报 2007年第5期27卷 664-666页

作者：郝贵杰提金凤陈清刘文博吴艳涛扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名... 详细信息

以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名为:2D2、2C8、3D3和3D11。该4株单抗的小鼠腹水的HI效价在213～215,ELISA效价为1.2×105～5.1×105。亚类鉴定结果表明,2D2和3D11属于IgG1,2C8属于IgG3,3D3属于IgG2a亚类;特异性试验结果表明,上述4株单抗仅与H5 AIV毒株发生特异性反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、IBV和EDSV-76等病毒反应;鸡胚中和试验结果显示,4株单抗均具有较好的中和活性。本研究成功获得4株针对H5 AIVHA蛋白的特异性单抗,为临床H5 AIV的血清学监测及鉴定提供了必需的试剂。

关键词：禽流感病毒单克隆抗体血凝抑制试验

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H9N2亚型禽流感病毒传播途径特性的比较及其表面基因序列分析

引用

中国兽医学报 2007年第1期27卷 26-30页

作者：石火英陈素娟高崧刘武杰刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

选择中国大陆最早分离的H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）A／Chicken／Guangdong／SS／94（H9N2）（缩写为SS株）和1998年大流行时期分离的H9N2亚型AIV A／Chicken／Shanghai／F／98（H9N2）（缩写为F株）为研究对象，对其在SPF鸡体内的复制能力和传播途径特性比较后发现，F株在4周龄SPF鸡气管中的复制能力高于SS株，F株可以经气溶腔传播途径传播。SS株不能经气溶腔传播途径传播；利用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法获取F株和SS株的HA和NA基因的cDNA，序列分析得知，F株和SS株的HA和NA基因的同源性分别是96．6％和98．1％；HA基因的裂解位点氨基酸序列都是PARSSR↓GL。但有5个氨基酸的盖异，即166位N（F）→D（SS）、198位A（F）→V（SS）、217位V（F）→I（SS）、335位G（F）→R（SS）、504位L（F）→S（SS）；2株病毒的NA基因在63～65住都存在氨基酸缺失，但在NA基因红细胞吸附位点的氨基酸序列不同，分别是IKKD—SRSG（F）和IKEDLRSG（SS）。F株和SS株的传播特性差异是否与其表面基因序列有关，有待进一步研究。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 F株 SS株传播途径 HA和NA基因

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微量红细胞凝集抑制试验常见问题探析

引用

中国家禽 2007年第8期29卷 38-39页

作者：刘慧谋扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

微量红细胞凝集抑制（HI）试验作为一项抗体监测技术已在各大中型禽场和兽医门诊实验室工作中广泛应用。HI试验可检测新城疫、禽流感、减蛋下降综合征等HI抗体，依据抗体的监测结果，制定相关疫苗的最佳免疫程序，验证疫苗的免疫效果，... 详细信息

微量红细胞凝集抑制（HI）试验作为一项抗体监测技术已在各大中型禽场和兽医门诊实验室工作中广泛应用。HI试验可检测新城疫、禽流感、减蛋下降综合征等HI抗体，依据抗体的监测结果，制定相关疫苗的最佳免疫程序，验证疫苗的免疫效果，进行疫病的辅助诊断，达到及早预报疫情的目的。但是如果试验操作技术不规范就会造成监测结果不准确。现就HI试验过程中出现的常见问题进行探析。

关键词：红细胞凝集抑制试验 HI抗体最佳免疫程序 HI试验监测结果实验室工作兽医门诊监测技术

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