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第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：王晓泉焦新安潘志明陈祥吴双刘晓文刘秀梵江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省人兽共患病学重点实验室江苏省人兽共患病学重点实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏省人兽共患病学重点实验室

1962-2006年间在江苏等10个省市分离和收集鸡白痢沙门氏菌分离株,测定其对抗生素的敏感性,比较不同年代沙门氏菌耐药性的差异,探讨沙门氏菌分离株耐药机制,以及40多年来分离株耐药性的演化过程。用微量稀释法测定了17种抗生素对鸡白痢... 详细信息

1962-2006年间在江苏等10个省市分离和收集鸡白痢沙门氏菌分离株,测定其对抗生素的敏感性,比较不同年代沙门氏菌耐药性的差异,探讨沙门氏菌分离株耐药机制,以及40多年来分离株耐药性的演化过程。用微量稀释法测定了17种抗生素对鸡白痢沙门氏菌分离株的敏感性,设计了18对耐药基因的引物和Ⅰ类整合子保守区引物,提取分离株的基因组和质粒,用 PCR 方法扩增沙门氏菌分离株的耐药基因,并通过接合试验分析耐药性的转移。1962-1970年分离株对17种抗生素的耐药率一般都较低,耐药率最高为磺胺甲基异恶唑(32．1%),其他抗生素的耐药率不超过22%;上个世纪70年代分离株的耐药率开始上升,并增加了壮观霉素和复方新诺明的耐药菌株;90年代分离株的耐药率达到高峰,但磺胺甲基异恶唑的耐药菌株从81．8%下降到35．7%,菌株对氯霉素和卡那霉素产生极低的耐药,多重耐药菌株和单个抗生素的耐药高峰出现于1998年以后,耐药表型主要为 ASSuTTm;2000年以后出现萘啶酮酸耐药菌株,同时对氟喹诺酮类药物的敏感性下降。鸡白痢沙门氏菌在近44年时间内耐药基因的产生发生了变化,在1962-1979年中,对一种抗生素的耐药基因往往是单一的,同时Ⅰ类整合酶基因检测为阴性,说明这些菌株都不携带基因盒。1990-1997年,耐药基因表现出多样性,如四环素耐药基因可能为 tetA、tetB 或 tetG 基因。1998-1999年,与耐药表型对应,耐药基因开始复杂,而且出现了Ⅰ类整合子,说明这些分离株中可能存在含有耐药基因的基因盒。2000-2006年,从本研究中的分离株来看,耐药基因似乎没有1998-1999年分离株复杂,但是新出现了 sul1基因。鸡白痢沙门氏菌耐药基因主要有 blatem-1, tetA,sul2,strA-B 和 dfrA12基因,类整合子出现于1998年以后分离株,dfrA17-aadA5基因盒在沙门氏菌中广泛存在,每个Ⅰ类整合子阳性分离株都携带 dfrA17-aadA5。近40多年来分离株的耐药性逐渐上升,单个耐药高峰出现于1998年,但是鸡白痢沙门氏菌的耐药性远远低于志贺氏菌、食源性和人源沙门氏菌等]。耐药基因多数由 I 类整合子和质粒携带,可以通过接合试验发生转移,可移动的 DNA 成分可能在耐药特性的转移和分布中起到重要作用。

关键词：鸡白痢沙门氏菌耐药性 Ⅰ类整合子接合转移

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用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 335-338页

作者：杨鹏辉颜艳罗德炎邢丽刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(... 详细信息

目的以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒。方法对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变。PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体。该重组质粒与PR8进行“7+1”组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞。结果经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒。结论利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础。

关键词：流感病毒反向遗传技术 cDNA 重组病毒

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以减毒沙门菌为载体布鲁氏菌DNA疫苗的构建及免疫原性分析

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免疫学杂志 2007年第5期23卷 486-490页

作者：周丽丽姚碧涛罗德炎焦新安刘秀梵王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X45... 详细信息

目的构建携带布鲁氏菌BLS-L7/L12融合基因的重组减毒沙门菌并进行免疫原性分析,为口服布鲁氏菌DNA疫苗研究奠定基础。方法将BLS-7/L12融合基因克隆到真核表达载体asd+-pVAX1,依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd+-pVAX1-BLS-L7/L12)。以1×109CFU/只的剂量口服免疫Balb/C小鼠,3次免疫后进行免疫效果的评价。结果构建的重组减毒沙门菌质粒转染COS-7细胞经免疫组化和Western-blot试验证明BLS-L7/L12融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清和肠黏液中有特异性抗体IgG和sIgA产生。通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论所构建的以重组沙门菌为载体口服布鲁氏菌DNA疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,且以细胞免疫应答为主。可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗。

关键词：布鲁氏菌 BLS-L7/L12 DNA疫苗伤寒沙门菌平衡致死系统

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江苏省部分地区鹅源致病性大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析

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饲料工业 2007年第15期28卷 62-64页

作者：宦海霞苗晓青周琼赵新年高崧扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室浙江东立绿源饲料有限公司

从江苏盐城、高邮等地区临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病、死白鹅中分离到大肠杆菌99株,通过玻板凝集和试管凝集试验,除8株未能定型、3株自凝外,测定出88个分离株的血清型,这些分离株覆盖了34个血清型,其中以O107、O9这两个血清型为主... 详细信息

从江苏盐城、高邮等地区临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病、死白鹅中分离到大肠杆菌99株,通过玻板凝集和试管凝集试验,除8株未能定型、3株自凝外,测定出88个分离株的血清型,这些分离株覆盖了34个血清型,其中以O107、O9这两个血清型为主,占定型菌株的34%(30/88),为我国禽源大肠杆菌的常见血清型。同时将这些分离株进行了15种抗菌药物的敏感试验,结果显示:99株分离株无多黏菌素耐药性,除1株对丁胺卡那耐药,2株中度敏感,其它均对丁胺卡那敏感,同时所有菌株均对多黏菌素有不同程度的敏感,可指导临床用药。

关键词：鹅源致病性大肠杆菌血清型药敏试验

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禽病原性大肠杆菌ΔiroΔtsh缺失株的构建

禽病原性大肠杆菌ΔiroΔtsh缺失株的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈祥潘志明高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(Gentamycin,GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pU... 详细信息

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(Gentamycin,GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFRGM,从中切下此3个片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-iroBNEGFP和pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到受体APEC E037株中,根据同源重组原理,分别筛选出E037基因缺失突变株E037(iro)、E037(tsh)和E037(iro tsh)。动物实验结果表明E037(iro)、E037(tsh)和E037(iro tsh)突变株的致病性均有了明显下降。铁系统和温度敏感性血凝素在APEC E037株的致病性和持续感染中发挥重要的作用,但两个基因的致病协同能力不明显。在243株禽源大肠杆菌中,有205株为iro+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为89.8%(184/205)、8.8%(18/205)和1.5%(3/205);有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/167)和0%(0/167)。结果显示铁系统和温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。

关键词：禽病原性大肠杆菌铁系统温度敏感性血凝素缺失突变株

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家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用

家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用

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第二届中国水禽业发展高层论坛

作者：刘秀梵农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学兽医学院江苏扬州225009

本文对家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用进行了探讨。文章围绕A型流感病毒和新城疫病毒、野生水禽和家养水禽、家养水禽的A型流感病毒感染、家养水禽的NDV感染、家养水禽中A型禽流感病毒和新城疫病毒感染的控... 详细信息

本文对家养水禽在A型流感病毒和新城疫病毒进化和疾病流行中的作用进行了探讨。文章围绕A型流感病毒和新城疫病毒、野生水禽和家养水禽、家养水禽的A型流感病毒感染、家养水禽的NDV感染、家养水禽中A型禽流感病毒和新城疫病毒感染的控制等进行了论述。

关键词：水禽养殖禽流感病毒病毒进化

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禽病原性大肠杆菌△iro △tsh缺失株的构建

禽病原性大肠杆菌△iro △tsh缺失株的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈祥潘志明高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室/江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点。中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFR... 详细信息

通过分子生物学方法分别将绿色荧光蛋白(EGFP)和庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的iro、tsh基因两端区域产生的2个目的基因片段之间,并分别插入到pUC18载体的多克隆位点。中,构建出带EGFP和GM标志的载体pUC18-iroBNEGFP和pUC18-tshFRGM,从中切下此3个片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建自杀性载体pMEG375-iroBNEGFP和pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到受体APECE037株中,根据同源重组原理,分别筛选出E037基因缺失突变株E037(△iro)、E037(△tsh)和E037(△iro△tsh)。动物实验结果表明E037(△iro)、E037(△tsh)和E037(△iro△tsh)突变株的致病性均有了明显下降.铁系统和温度敏感性血凝素在APEC E037株的致病性和持续感染中发挥重要的作用,但两个基因的致病协同能力不明显。在243株禽源大肠杆菌中,有205株为iro+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为89.8％(184/205)、8.8％(18/205)和1.5％(3/205);有167株为tsh+菌株,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4％(146/167)、12.6％(21/167)和0％(0/167)。结果显示铁系统和温度敏感性血凝素为APEC重要的致病因子。

关键词：禽病原性大肠杆菌铁系统血凝素基因缺失

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H4亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备

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中国动物检疫 2007年第12期24卷 21-23页

作者：高明燕胡茂志孙林刘文博吴艳涛王志亮刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学江苏省物质微区与性能测试服务中心扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009 中国动物卫生与流行病学中心外来动物疾病诊断中心山东青岛266032

以H4亚型AIV分离株A/鸭/扬州/185/2003免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经血凝抑制(HI)试验筛选并克隆后,获得能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株:2C11、6E7、4C8和5C5。4株单抗腹水的HI效价在2^(12)～2^(15),单抗亚类... 详细信息

以H4亚型AIV分离株A/鸭/扬州/185/2003免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经血凝抑制(HI)试验筛选并克隆后,获得能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株:2C11、6E7、4C8和5C5。4株单抗腹水的HI效价在2^(12)～2^(15),单抗亚类均为IgG2a。4株单抗均能与感染了H4亚型AIV的MDCK细胞发生间接免疫荧光(IFA)反应。并且,均不与其他亚型AIV、NDV、IBV和EDS-76病毒发生HI反应。另外,4株单抗均能使病毒失去感染细胞的能力,显示出良好的中和特性。单抗HI反应谱表明,2C11、4C8、6E7和5C5分别可以抑制10株H4亚型AIV中9、8、7和7株病毒的血凝反应,且均不能抑制A/鸭/苏州/1/2002毒株的血凝作用。

关键词： H4亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体

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H4亚型禽流感毒株的生物学特性

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中国家禽 2007年第21期29卷 55-56,58页

作者：高明燕胡茂志徐步吴艳涛王志亮焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏省物质微区与性能测试服务中心江苏扬州225009 中国农科院家禽科学研究所江苏扬州225003 农业部动物检疫所外来动物疾病诊断中心山东青岛266032

　　根据致病性不同,禽流感病毒(AIV)可以分为高致病性和低致病性.不同亚型AIV的致病性、细胞内定殖能力以及对T淋巴细胞的影响等特性可能有所不同.……

关键词：禽流感病毒 H4 致病性感染细胞定殖生物学特性细胞亚群尿囊液感染剂量混合感染

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利用反向遗传技术研究H9N2亚型AIV传播途径的分子机制

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微生物学报 2006年第1期46卷 48-54页

作者：石火英刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

利用反向遗传技术,通过基因重排方法,产生两个表面基因来自A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)株和其余基因来自A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)AIV株的3株H9N2亚型重排AIV,动物传播性试验发现A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株、A/Chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)AIV株和3株H9N2亚型重排AIV都可以经直接接触途径传播;在粪便接触途径下,3株重排AIV都不经粪便接触传播;只有A/Chicken/Shanghai/F/98(H9N2)株和重排AIV RF7/SSHA能经过气溶胶途径传播。HI试验结果进一步证明了以上的结果。实验结果表明H9N2亚型AIV的NA基因与H9N2亚型AIV气溶胶传播途径有重要的关系,即1998年中国大陆H9N2亚型AIV大流行可能是因为病毒获得气溶胶传播途径的特性,推测病毒的NA基因发挥了重要作用。

关键词： AIV H9N2亚型传播途径反向遗传技术 HA和NA基因

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