检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2006年第6期22卷 590-593页

作者：宦海霞高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要的公共卫生问题,每年死亡人数都超过200万,特别是那些不足5岁的婴幼儿。导致这些婴幼儿腹泻的一个最常见的病原是肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)。尽管近20年来对EPEC的致... 详细信息

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要的公共卫生问题,每年死亡人数都超过200万,特别是那些不足5岁的婴幼儿。导致这些婴幼儿腹泻的一个最常见的病原是肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)。尽管近20年来对EPEC的致病机制有了较深入的研究,但还有许多问题需要进一步了解。[第一段]

关键词：肠致病性大肠杆菌致病机理婴幼儿腹泻公共卫生问题世界范围内腹泻性疾病死亡人数致病机制

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新城疫病毒ZJ1株F蛋白裂解位点突变对其融合活性的影响

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微生物学通报 2006年第4期33卷 69-73页

作者：张艳梅胡顺林孙庆吴艳涛刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

新城疫病毒ZJ1毒株是近年来在我国水禽中流行并能引起水禽严重发病和死亡的强毒株,其F蛋白裂解位点有多个碱性氨基酸分布。将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸,构建了重组表达质粒pCI-FT... 详细信息

新城疫病毒ZJ1毒株是近年来在我国水禽中流行并能引起水禽严重发病和死亡的强毒株,其F蛋白裂解位点有多个碱性氨基酸分布。将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸,构建了重组表达质粒pCI-FT。分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在COS-1细胞共表达,表明突变前后的F蛋白均有融合活性;分别将突变前后的F蛋白与该毒株的HN蛋白在CEF细胞共表达,表明突变后F蛋白被裂解的活性大大降低。以上研究为下一步在全长cDNA克隆水平上对F蛋白裂解位点氨基酸序列进行相应突变,研究毒力相关因素以及构建毒力致弱疫苗株等奠定基础。

关键词：新城疫病毒 F蛋白突变融合活性裂解活性

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禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的研制和初步应用

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中国免疫学杂志 2006年第1期22卷 13-15,19页

作者：唐应华张评浒薛峰刘晓文刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗... 详细信息

目的:获得特异针对禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体。方法:以H9N2亚型病毒制成疫苗免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,取细胞上清用HI筛选。结果:共获得9株稳定分泌针对血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞;经广谱性和特异性鉴定,所有单抗株均能与所有检测的82株不同年代不同地方不同禽源H9亚型流感病毒大部分分离株反应,且所有单抗株均不与非AⅣ-H9病毒反应,而其中一株(8E6)能与所有检测的H9亚型病毒株反应。进行Western blot分析显示, 其中8株单抗能与AⅣ的Mr为75 000处反应,表明是针对AⅣ H9 HA的单抗。结论:本试验获得9株广谱性特异性很好的单抗,特别是8E6株;这些单抗株为以后作病毒抗原性位点分析、临床检测和流行病学调查提供了良好试剂。

关键词： H9亚型禽流感血凝素单克隆抗体 Western blot

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我国部分地区猪源大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

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中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 33-35,47页

作者：陈祥赵娟高崧苗晓青刘静黄莉莉焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆... 详细信息

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定。结果在分离的猪源大肠杆菌中,LEE毒力岛基因检测结果为:2.2%(22/1 007)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性,0.5%(5/100 7)的菌株eaeA阳性。HPI毒力岛基因检测结果为:10.6%(107/1 007)的菌株irp2和fruA基因扩增阳性,2.1%(21/1007)的菌株irp2阳性;其中有2株irp2和ler基因扩增阳性,有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性,1株irp2f、yuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性;在128个HPI阳性分离株中,O93和O107血清型菌株分别占定型菌株的15.7%(13/83)和12.0%(10/83)。结论2.7%的猪源大肠杆菌携带LEE,12.7%的菌株携带耶尔森菌HPI,O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型。

关键词：猪源大肠杆菌 O血清型强毒力岛肠细胞脱落位点毒力岛

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SPF鸡人工感染禽源大肠杆菌、H9亚型禽流感病毒后的体液免疫应答和死亡率分析

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畜牧兽医学报 2006年第9期37卷 899-902页

作者：高璐胡仁莉陈祥盛瑜刘静高崧刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和***173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种***组死亡率最高;各... 详细信息

SPF鸡经不同顺序、不同时间间隔人工感染MPAIV和***173株(O4)后,对试验鸡的病死率和针对大肠杆菌不同抗原体液免疫应答水平等进行研究。结果表明:各混合感染组试验鸡病死率明显高于单独接种组,且以先接种MPAIV再接种***组死亡率最高;各混合感染组试验鸡针对***和LPS的抗体水平低于单独感染***组,其中又以先接种MPAIV再接种***组为最低,提示MPAIV和***间存在协同致病作用,这种协同机理可能与因MPAIV的感染导致一定程度的免疫抑制并进而促进了***在体内的定居与繁殖有关。

关键词： SPF鸡大肠杆菌低致病性禽流感病毒协同致病免疫抑制

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近年来大肠杆菌K88ac菌毛的变异和生物学特性

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农业生物技术学报 2006年第5期14卷 757-762页

作者：陈祥苗晓青刘静黄莉莉高崧焦新安刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009

2000￣2005年,从猪大肠杆菌病(colibacillosis)中分离到一些表达K88菌毛的大肠杆菌(Escherichiacoli),这些分离株只与K88a因子单抗反应,而不与K88b、c和d因子单抗反应。分离的菌株(13/16)以O149为常见血清型,且全部拥有STb毒素基因,通过... 详细信息

2000￣2005年,从猪大肠杆菌病(colibacillosis)中分离到一些表达K88菌毛的大肠杆菌(Escherichiacoli),这些分离株只与K88a因子单抗反应,而不与K88b、c和d因子单抗反应。分离的菌株(13/16)以O149为常见血清型,且全部拥有STb毒素基因,通过K88常规血清交叉吸收试验、SDS-PAGE和Western印迹,表明这些菌株不仅与K88ac参考菌株C83907制备的c因子血清反应,而且与以分离株SEC586制备且经K88ab、K88ac和K88ad参考菌株吸收后的血清也反应,表明这些分离株仍为K88ac大肠杆菌。对新近分离的SEC464、SEC525、SEC586、SEC799和EC910株及80年代我国分离的TM128株的K88主要亚单位结构基因faeG进行克隆、测序,发现新近分离株的faeG基因由846对核苷酸组成,编码菌毛主要亚单位的261个氨基酸及21个氨基酸的信号肽,比国内外报道的K88acFaeG亚单位(262个氨基酸)少了一个氨基酸,比K88ab、K88ad(264个氨基酸)少了3个氨基酸。TM128株的FaeG氨基酸序列与K88ac(M29375)的同源性为100.0%,SEC464、SEC525、SEC586、SEC799和SEC910株的FaeG亚单位氨基酸序列的同源性为97.7%￣99.6%,它们与K88ac的同源性为94.6%￣96.6%;与K88ab的同源性为90.0%￣91.6%;与K88ad的同源性为87.0%￣88.9%。结果表明新分离的K88ac大肠杆菌黏附素主要亚单位已发生了部分变异。

关键词：大肠杆菌 K88黏附素单克隆抗体 faeG基因

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家鸭中H8N4亚型流感病毒株A/duck/Yangzhou/02/2005的全基因克隆和序列分析

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病毒学报 2006年第6期22卷 450-455页

作者：薛峰彭宜张小荣姚春峰龙进学刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

采用常规的血清学试验和特异性RT—PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测，分离鉴定出国内报道的第一株H8亚型禽流感病毒。应用流感病毒通用引物成功地扩增出H8N4亚型禽流感病毒A／duck／Yangzhou／02／2005... 详细信息

采用常规的血清学试验和特异性RT—PCR方法对华东地区家养水禽中流感病毒的带毒状况进行4年多的监测，分离鉴定出国内报道的第一株H8亚型禽流感病毒。应用流感病毒通用引物成功地扩增出H8N4亚型禽流感病毒A／duck／Yangzhou／02／2005株（简称Dk／YZ／02／05）的全基因序列。将Dk／YZ／02／05的基因组核苷酸全序列与网上公布的基因序列进行比较分析，结果表明：Dk／YZ／02／05（H8N4）的8个基因片段均含有相应病毒基因的完整开放阅读框；其推导的血凝素（Heamgglutinin，HA）氨基酸剪切位点序列为P-SV-E-P-R，为典型低致病性禽流感病毒的特征序列；神经氨酸酶（NA）在第48位氨基酸后无20个氨基酸的缺失；非结构蛋白（NS）79～84位也没有氨基酸的缺失。

关键词： H8N4亚型禽流感病毒全基因组序列测定分析

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表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性

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中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 405-407页

作者：张体银孙蕾刘武杰刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

本实验为了评价表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV282E4-SF,rFPVLp-SF)的遗传稳定性,将其在鸡胚成纤维细胞连续培养20代。通过蓝斑来鉴定重组鸡痘病毒纯度,结果所有蚀斑100%变蓝。通过对第0、10和20代F基因扩增并进行序列测定,所有... 详细信息

本实验为了评价表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV282E4-SF,rFPVLp-SF)的遗传稳定性,将其在鸡胚成纤维细胞连续培养20代。通过蓝斑来鉴定重组鸡痘病毒纯度,结果所有蚀斑100%变蓝。通过对第0、10和20代F基因扩增并进行序列测定,所有碱基和氨基酸序列均和原始转移载体序列完全一致,没有发生任何改变。随后又通过间接免疫荧光证实rFPV282E4-FS和rFPVLP-FS各个代次F基因的特异表达。所有结果均显示了上述重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性,满足兽医生物制品的遗传稳定性要求。

关键词：新城疫病毒 F基因重组鸡痘病毒遗传稳定性

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表达鸡马立克氏病病毒gB基因的重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗的免疫效力

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中国兽医学报 2006年第1期26卷 11-13页

作者：胡传伟彭大新张如宽刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清型疫苗毒株CVI998/Rispens gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗时2种病毒的最适剂量配比进行了研究。试验表明,以对MD易感、MD和鸡痘病毒(FPV)抗体阴性SPF鸡为试验... 详细信息

对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清型疫苗毒株CVI998/Rispens gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗时2种病毒的最适剂量配比进行了研究。试验表明,以对MD易感、MD和鸡痘病毒(FPV)抗体阴性SPF鸡为试验动物进行的试验中,不同免疫剂量的rFPV-gB/R(1×106、1×105、1×104PFU)同HVT组成的二价苗产生的免疫效力相当;以对MD易感、MD和FPV抗体阳性的狼山鸡进行的试验中,不同免疫剂量的rFPV-gB/R同HVT组成的二价苗产生的免疫力随rFPV-gB/R免疫剂量的降低而降低;所有的rFPV-gB/R+HVT的二价苗组均有一定的免疫保护作用。

关键词：马立克氏病重组鸡痘病毒二价冻干疫苗免疫效力

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鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2006年第4期27卷 5-7,11页

作者：王彦红马怀良胡顺林仇旭升刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因... 详细信息

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致。克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白。

关键词：鸡痘病毒 ORF073基因克隆原核表达

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