检索结果-内蒙古大学图书馆

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2019年第3期40卷 34-40页

作者：豆春峰吴挺胡序明冯仕章陈绪靖王丽萍耿拓宇崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学比较医学研究院江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

IFITMs在天然免疫中发挥重要作用,抑制多种病毒复制。试验取5和30日龄白来航鸡心、肝、脾、胸腺和法氏囊,RT-qPCR检测其IFITM1基因的表达差异;用0.5μmol·L^-1 DNA甲基化酶抑制剂DAC处理鸡成纤维细胞CEF和鸡巨噬细胞HD11,RT-qPCR... 详细信息

IFITMs在天然免疫中发挥重要作用,抑制多种病毒复制。试验取5和30日龄白来航鸡心、肝、脾、胸腺和法氏囊,RT-qPCR检测其IFITM1基因的表达差异;用0.5μmol·L^-1 DNA甲基化酶抑制剂DAC处理鸡成纤维细胞CEF和鸡巨噬细胞HD11,RT-qPCR检测处理后IFITM1的表达水平;PCR扩增IFITM1基因CDS区克隆、测序,进而构建pcDNA3.1-IFITM1真核表达载体;将过表达载体转染至CEF和HD11细胞,RT-qPCR检测IFITM1过表达对鸡内源性反转录病毒ALVE1、OVEX1和EAV-HP转录的影响。结果表明:IFITM1基因在胸腺、法氏囊等免疫器官中的表达量高于心、肝和脾等非免疫器官,且随着日龄的增长,在胸腺中的表达量上升,而在法氏囊中的表达量下降;DAC处理后,IFITM1表达极显著上调;测序发现IFITM1基因CDS区大小为342bp;IFITM1过表达后,ALVE1、OVEX1在CEF和HD11细胞中转录均极显著下调,EAV-HP只在CEF细胞中极显著下调,而在HD11细胞中无显著变化。这一研究初步分析了鸡IFITM1基因的表达规律,构建了其真核表达载体,检测了其对鸡内源性反转录病毒转录的影响,为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：鸡 IFITM1基因内源性反转录病毒基因克隆真核表达

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中国动物传染病学报 2019年第3期27卷 22-26页

作者：豆春峰王芳胡序明欧阳娟陈世豪贾崇信薛松磊徐慧齐田羽耿拓宇崔恒宓扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009 扬州大学动物科学和技术学院扬州225009 扬州大学兽医学院扬州225009 扬州大学比较医学研究院扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

本研究旨在探讨二甲双胍(metformin)处理对鸡巨噬细胞HD11天然免疫相关基因表达及禽白血病病毒(Avian leukosisvirus,ALV)复制水平的影响。用2mmol/L二甲双胍处理鸡巨噬细胞HD11,处理48h后收集细胞,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测天然免疫基... 详细信息

本研究旨在探讨二甲双胍(metformin)处理对鸡巨噬细胞HD11天然免疫相关基因表达及禽白血病病毒(Avian leukosisvirus,ALV)复制水平的影响。用2mmol/L二甲双胍处理鸡巨噬细胞HD11,处理48h后收集细胞,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测天然免疫基因和内源性反转录病毒的表达。另外,将J亚群禽白血病病毒(J subgroup Avian leukosis virus,ALV-J)(MOI=5)接种于细胞板中,病毒感染细胞24 h后进行二甲双胍处理, 48 h后收集HD11细胞和上清分别进行RT-qPCR检测和ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)检测。结果表明,二甲双胍显著上调HD11细胞天然免疫相关基因TLR3(P<0.01)、IFIH1(P<0.01)、IRF7(P<0.01)、STAT1(P<0.05)、IFN-α(P<0.01)、IFN-β(P<0.01)表达水平,并激活了鸡内源性反转录病毒的表达,抑制ALV-J复制水平。综上,二甲双胍可激活鸡巨噬细胞的天然免疫反应,从而提高鸡抗禽白血病病毒的能力。本研究在体外实验中验证二甲双胍具有抑制ALV增殖的作用,对家禽业的疾病防控有一定的应用价值。

关键词：二甲双胍禽白血病毒天然免疫巨噬细胞

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基因组内源性病毒序列通过其反义lncRNA发挥抗病毒先天免疫功能

基因组内源性病毒序列通过其反义lncRNA发挥抗病毒先天免疫功能

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第5届全国功能基因组学高峰论坛

作者：崔恒宓扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所

内源性逆转录病毒(ERV)是动物和人类基因组的重要组成部分。尽管ERV 与早期发育和肿瘤发生有着密切的联系，但它们对抗病毒先天免疫的影响及其机制尚不清楚。

关键词：内源性反转录病毒反义lncRNA 天然免疫抗病毒保护表观遗传调控

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利用CRISPR/Cas9技术敲除RNA甲基化酶TRDMT1基因及其功能初探

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2018年第2期39卷 80-86页

作者：徐慧孙振薛松磊豆春峰胡序明崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为构建TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系,利用CRISPR/Cas9系统在TRDMT1基因第1个外显子前插入BGH Ploy(A)转录终止序列,终止TRDMT1基因表达。利用重叠PCR方法合成sgRNA序列,构建TRDMT1-gRNA载体及含不同抗生素基因的同源重组载体TRDMT1-LOX... 详细信息

为构建TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系,利用CRISPR/Cas9系统在TRDMT1基因第1个外显子前插入BGH Ploy(A)转录终止序列,终止TRDMT1基因表达。利用重叠PCR方法合成sgRNA序列,构建TRDMT1-gRNA载体及含不同抗生素基因的同源重组载体TRDMT1-LOXN-Puro和TRDMT1-LOXP-Neo;将同源重组载体TRDMT1-LOXN-Puro、TRDMT1-LOXP-Neo及TRDMT1-gRNA、Cas9表达载体MLM3613共转染HEK293细胞;利用Puromycin和Neomycin抗生素筛选细胞,通过RT-qPCR检测TRDMT1基因转录终止效率。通过细胞生长曲线和划痕试验检测TRDMT1基因敲除对HEK293细胞增殖和迁移能力的影响。结果表明:成功构建了TRDMT1-gRNA载体及TRDMT1-LOXN-Puro、TRDMT1-LOXP-Neo同源重组载体;与正常HEK293细胞相比,试验组TRDMT1表达量仅为1%;TRDMT1基因敲除后显著影响HEK293细胞增殖和迁移。这一研究通过CRISPR/Cas9技术成功构建了TRDMT1基因敲除的HEK293细胞系(HEK293-TKO),为RNA甲基化研究提供了一种有效的工具;TRDMT1基因可能与细胞的增殖和迁移有关。

关键词： HEK293细胞系 RNA甲基化 m5C TRDMTl基因 CRISPR/Cas9

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禽内源性反转录病毒ALVE1在鸡基因组上下游序列鉴定

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中国动物传染病学报 2017年第6期25卷 64-69页

作者：戴振清胡序明王芳陈世豪贾崇信豆春峰耿拓宇崔恒宓扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009 扬州大学动物科学和技术学院扬州225009

已知鸡基因组中含有禽内源性反转录病毒ALVE1序列,而ALVE1在鸡基因组中的上游和下游区域位置在参考基因组中并未成功鉴定。本研究成功鉴定出ALVE1所在鸡基因组中的上、下游序列,并通过提取CEF细胞和DF-1细胞基因组反过来验证了ALVE1的... 详细信息

已知鸡基因组中含有禽内源性反转录病毒ALVE1序列,而ALVE1在鸡基因组中的上游和下游区域位置在参考基因组中并未成功鉴定。本研究成功鉴定出ALVE1所在鸡基因组中的上、下游序列,并通过提取CEF细胞和DF-1细胞基因组反过来验证了ALVE1的位置信息。与参考基因组不同的是,我们发现ALVE1序列包含3'LTR序列,在鸡1号染色体上的插入位置为chr1:65,995,534~65,993,540。本研究不仅提供了ALVE1在鸡基因组中的完整信息,也为进一步研究ALVE1的功能奠定了基础。

关键词：禽内源性反转录病毒 ALVE1 鉴定

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利用CRISPR/Cas9系统构建绿色荧光转基因斑马鱼

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畜牧与兽医 2017年第6期49卷 83-86页

作者：刘斐斐杨哲杨祎擎田净净崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009

斑马鱼是研究人类疾病的重要动物模型,基因组定点编辑技术在利用斑马鱼研究同源基因功能方面提供了简便高效的途径。利用CRISPR/Cas9系统,在斑马鱼TU品系第5号染色体中选择靶位点,将Cas9 mRNA、靶位点识别的sgRNA和带有同源重组臂、利... 详细信息

斑马鱼是研究人类疾病的重要动物模型,基因组定点编辑技术在利用斑马鱼研究同源基因功能方面提供了简便高效的途径。利用CRISPR/Cas9系统,在斑马鱼TU品系第5号染色体中选择靶位点,将Cas9 mRNA、靶位点识别的sgRNA和带有同源重组臂、利用短链肌球蛋白(Mylz2)启动子启动的绿色荧光蛋白(eGFP)基因显微注射到斑马鱼受精卵中,获得在该位点定点插入外源基因,并在肌肉中特异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼。利用基因组DNA的PCR扩增,结合激发光下斑马鱼胚胎荧光表达情况,在存活的87尾幼鱼中发现其中45尾有荧光表达,同源重组率为51.724%。研究表明,利用CRISPR/Cas9系统成功定点插入外源基因,并获得在肌肉中特异性表达绿色荧光的斑马鱼。

关键词： CRISPR/Cas9系统斑马鱼绿色荧光蛋白同源重组

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反义RNA与肝癌的研究进展

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安徽医科大学学报 2017年第4期52卷 618-621页

作者：吕贝李华玲崔恒宓扬州大学医学院生物化学教研室扬州225001 扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009

反义RNA是一类能与特异性mRNA互补并从翻译、转录或转录后水平上高度特异地抑制靶基因表达的RNA分子。肝癌是全球最常见且致命的恶性肿瘤。肝癌组织的无限增殖、侵袭转移、放化疗耐受等能力成为其无法治愈并不断恶化的重要原因。反义RN... 详细信息

反义RNA是一类能与特异性mRNA互补并从翻译、转录或转录后水平上高度特异地抑制靶基因表达的RNA分子。肝癌是全球最常见且致命的恶性肿瘤。肝癌组织的无限增殖、侵袭转移、放化疗耐受等能力成为其无法治愈并不断恶化的重要原因。反义RNA在肝癌肿瘤中异常表达,肿瘤的恶性表型维持需要众多反义RNA的参与。近年来,利用反义RNA技术治疗恶性肿瘤已经成为了一个新的研究方向,本文对这一技术治疗肝癌进行了综述。

关键词：肝癌反义RNA 研究进展

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DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷抗癌新机制初探

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肿瘤 2017年第3期37卷 201-207页

作者：袁君婷韩笑吕贝胡序明耿拓宇崔恒宓扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学生物科学和技术学院江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 扬州大学医学院江苏扬州225009

目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,AZA)抗癌作用的新机制,即AZA是否通过激活反义RNA来抑制癌相关基因的表达。方法:从已建双链RNA文库中挑选出6个基因,即第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatas... 详细信息

目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,AZA)抗癌作用的新机制,即AZA是否通过激活反义RNA来抑制癌相关基因的表达。方法:从已建双链RNA文库中挑选出6个基因,即第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、信号转导及转录激活因子1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)基因、Ras样原癌基因B(Ras-like proto-oncogene B,RALB)、MET、CD44和热休克蛋白A4(heat-shock protein A4,HSPA4)基因。用DMSO(作为对照组)或溶于DMSO的AZA分别处理人肝癌细胞Hep G2,采用链特异性RT-PCR及实时荧光定量PCR法检测上述6个基因的正反义RNA的表达。AZA促进抑癌基因PTEN和先天免疫相关基因STAT 1的正义RNA表达(P<0.01,P<0.001),而癌相关基因CD 44和HSPA 4的正义RNA表达均受到明显抑制(P值均<0.01)。结论:AZA通过激活反义RNA的表达,诱导抑癌基因和先天免疫基因的表达,并抑制癌相关基因的表达,从而发挥其抗癌作用。

关键词：肝肿瘤脱氧胞苷 RNA,反义基因表达调控,肿瘤

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肝癌相关基因MEF2D反义RNA的鉴定及分析

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安徽大学学报（自然科学版） 2017年第6期41卷 102-108页

作者：李华玲吕贝袁君婷韩笑朱敏郑丹阳崔恒宓扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学医学院江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

鉴定和分析肝癌细胞中新的天然反义RNA MEF2D-AS根据已建立的双链RNA文库筛选与肝癌相关的反义RNA.通过RT-qPCR验证其反义RNA的存在,采用cDNA末端快速扩增技术获得其全长序列,并检测HepG2细胞经5-Aza-dC处理前后MEF2D基因正反义链表达... 详细信息

鉴定和分析肝癌细胞中新的天然反义RNA MEF2D-AS根据已建立的双链RNA文库筛选与肝癌相关的反义RNA.通过RT-qPCR验证其反义RNA的存在,采用cDNA末端快速扩增技术获得其全长序列,并检测HepG2细胞经5-Aza-dC处理前后MEF2D基因正反义链表达量的变化.结果显示,成功鉴定出1条全长为1 265bp的新的天然反义RNA,并预测其属于长链非编码RNA(long non-coding RNA,简称为lncRNA),命名为MEF2D-AS.经5-Aza-dC处理后,MEF2D-AS的表达量升高,而MEF2DmRNA的表达量降低.证实了MEF2D-AS的存在并预测其属于长链非编码RNA,且与MEF2D正反义RNA是反相关关系.此研究结果可为进一步探讨肝癌发生机制提供参考.

关键词：长链非编码RNA 天然反义RNA 肝癌 MEF2D MEF2D-AS

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鸡巨噬细胞HD11不同转染方法的比较分析

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畜牧与兽医 2017年第5期49卷 72-76页

作者：韩笑胡序明袁君婷吕贝孙振陈世豪耿拓宇崔恒宓扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学动物科学和技术学院江苏扬州225009 扬州大学医学院江苏扬州225009

以鸡巨噬细胞HD11作为研究对象,分别采用5种不同的脂质体试剂转染和电转方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入HD11细胞中,然后通过比较并筛选出适合鸡巨噬细胞HD11的最佳转染方法。结果显示:Lipofectamine 2000 Reagent、Attractene T... 详细信息

以鸡巨噬细胞HD11作为研究对象,分别采用5种不同的脂质体试剂转染和电转方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入HD11细胞中,然后通过比较并筛选出适合鸡巨噬细胞HD11的最佳转染方法。结果显示:Lipofectamine 2000 Reagent、Attractene Transfection Reagent和Trans IT-2020 Transfection Reagent几种常见的脂质体转染试剂并不适用于HD11细胞转染。而Coming Transfection Reagent、Lip2000 Transfection Reagent脂质体转染试剂和电转可用于HD11细胞转染;其中,Lip2000 Transfection Reagent转染试剂效果最好。在此基础上,通过进一步优化得出:当DNA(μg)和Lip2000(μL)的比例为1∶1.5时转染效率最高。本研究成功筛选出一种有效的鸡巨噬细胞HD11转染方法,为鸡巨噬细胞的转染及其相关研究提供了实验依据。

关键词：鸡巨噬细胞转染效率电穿孔法脂质体法

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