检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2024年第10期32卷 2371-2380页

作者：马克姣蔡清清王佳兴王强州白皓陈世豪常国斌扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所扬州大学兽医学院

甲基胞嘧啶双加氧酶2 (ten-eleven translocation 2, TET2)通过甲基化依赖和不依赖的两种方式调控哺乳动物的天然免疫反应，而鸡(Gallus gallus) TET2的先天免疫调控作用尚未阐明。本研究旨在克隆鸡TET2基因并构建TET2及截短体的真核表... 详细信息

甲基胞嘧啶双加氧酶2 (ten-eleven translocation 2, TET2)通过甲基化依赖和不依赖的两种方式调控哺乳动物的天然免疫反应，而鸡(Gallus gallus) TET2的先天免疫调控作用尚未阐明。本研究旨在克隆鸡TET2基因并构建TET2及截短体的真核表达载体，初步探讨TET2及其功能域对鸡先天免疫反应的影响。根据鸡TET2基因组(GenBank No. NM＿001277794.1)信息，克隆其全长CDS序列。将TET2全长分为N端N1126和C端CD两个截短体，扩增其基因片段，将其同源重组连接至pCAGGS-Myc真核表达载体。将重组质粒pCAGGS-Myc-TET2及截短体分别转染至鸡胚成纤维细胞DF-1中，通过Western blot和免疫荧光检测鸡TET2及截短体的蛋白表达和细胞定位。通过qRT-PCR检测过表达p CAGGS-Myc-TET2及截短体基因对ploy (I:C)诱导的先天免疫反应相关基因表达的影响。PCR结果显示，成功克隆鸡TET2全长序列及其截短体N1126和CD。生物信息学分析表明，与鸡TET2亲缘关系最为相似的是鸿雁(Anser cygnoides)和绿头鸭(Anas platyrhynchos)。Western blot检测表明，Myc标签融合的TET2全长和截短体均能在DF-1细胞正常表达。免疫荧光检测表明，鸡TET2定位于细胞核。qRT-PCR结果表明，过表达鸡TET2全长及截短体均能显著促进poly(I:C)诱导的黑色素瘤分化相关基因5 (melanoma differentiation associated gene 5, MDA5)和三基序蛋白25 (tripartide motif containing 25, TRIM25)的表达(P<0.05)，而对干扰素调节因子7 (interferon regulatory factor 7, IRF7)的表达无显著影响(P>0.05)；与过表达截短体N1126相比，过表达TET2全长和CD功能域极显著促进poly(I:C)诱导的β干扰素(interferon-β, IFN-β)表达(P<0.05)。本研究初步探索了TET2及其截短体对鸡先天免疫反应的影响，为鸡TET2调控先天免疫反应的分子机制提供了基础信息。

关键词：鸡甲基胞嘧啶双加氧酶2 (TET2) 功能域真核表达载体先天免疫

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鸡DCAF1生物信息学分析及对J亚群禽白血病病毒复制的影响

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 1837-1845页

作者：潘诗雨尹娜王佳兴王强州陈世豪白皓常国斌扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所扬州225009 扬州大学兽医学院扬州225009

【目的】为分析鸡损伤特异性DNA结合蛋白和泛素连接酶复合物骨架蛋白库林4相关因子1(DDB1and CUL4associatedfactor1,DCAF1)蛋白的生物学特性,构建DCAF1基因的真核表达载体,并初步探究其对J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的影响。【方法】... 详细信息

【目的】为分析鸡损伤特异性DNA结合蛋白和泛素连接酶复合物骨架蛋白库林4相关因子1(DDB1and CUL4associatedfactor1,DCAF1)蛋白的生物学特性,构建DCAF1基因的真核表达载体,并初步探究其对J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的影响。【方法】在NCBI中下载相关物种DCAF1蛋白氨基酸序列,采用Mega11.0软件构建系统进化树;利用ProtParam、ProtScale、TMHMM等在线程序分析鸡DCAF1蛋白的氨基酸序列,预测其理化性质、保守结构域及二、三级结构和互作蛋白等生物信息;构建鸡DCAF1基因重组真核表达载体,通过实时荧光定量PCR和Westernblotting技术检测ALV-J感染对DCAF1mRNA和ALV-JEnv蛋白表达水平的影响及过表达DCAF1对ALV-J复制的影响。【结果】鸡DCAF1蛋白由1496个氨基酸组成,其分子质量约为170ku;系统进化树结果表明,鸡与红鸭亲缘关系最近,与斑马鱼亲缘关系最远。生物信息学预测结果表明,鸡DCAF1蛋白无跨膜结构域,无信号肽表达,包含ARM折叠、LisH和WD40重复3个主要结构域与末尾1个酸性结构域,其互作蛋白为DDB1、CUL4A、SAMHD1等。鸡DCAF1蛋白二级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋组成,分别占比44.85%和41.18%,延伸链和β-折叠占比次之,分别是9.76%和4.21%。三级结构与二级结构基本一致,建模一致性为93.79%。ALV-J感染24、48h后,DCAF1基因和蛋白表达水平均极显著高于感染0h时(P<0.01);过表达DCAF1后,与感染对照组相比,ALV-JEnv蛋白显著升高(P<0.05)。【结论】鸡DCAF1蛋白由1496个氨基酸组成,分子质量约170ku,属于稳定的亲水蛋白,不含跨膜结构域。本研究成功构建了DCAF1基因真核表达载体。在ALV-J感染的细胞中,DCAF1蛋白和基因表达水平极显著升高,而过表达DCAF1则显著促进ALV-J复制。研究结果为进一步阐明鸡DCAF1的生物学功能及其与ALV-J互作的分子机制奠定了基础。

关键词：鸡 DCAF1 ALV-J 真核表达载体生物信息学

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鸡内源性反转录病毒衍生的env转录物抑制ALV-J在HD11细胞中复制

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中国动物传染病学报 2023年

作者：王陈君郭旺吴慧显崔恒宓柴文娴胡序明扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所常州市动物疫病预防控制中心

巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成部分，最新研究发现内源性反转录病毒产生的转录物（如非编码RNA）在巨噬细胞抵抗病毒感染的过程中发挥着重要作用。前期研究发现鸡内源性反转录病毒ALVE衍生的env转录物受到ALV-J感染调控，但ALVE en... 详细信息

巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成部分，最新研究发现内源性反转录病毒产生的转录物（如非编码RNA）在巨噬细胞抵抗病毒感染的过程中发挥着重要作用。前期研究发现鸡内源性反转录病毒ALVE衍生的env转录物受到ALV-J感染调控，但ALVE env转录物在鸡巨噬细胞中是否具有抗ALV-J功能及其作用机制目前尚不清楚。本文首先通过定量PCR、western blot、ELISA和TCID50实验检测ALVE env转录物过表达对ALV-J感染复制影响，结果发现ALVE env转录物显著抑制ALV-J在鸡巨噬细胞HD11中的感染复制水平。为了进一步明确ALVE env转录物的抗ALV-J能力，通过干扰实验发现降低ALVE env转录物表达会显著促进ALV-J在HD11细胞中的感染复制水平。机制上，ALVE env转录物通过调控抗病毒免疫基因表达来干扰ALV-J感染复制。过表达ALVE env转录物显著上调dsRNA识别受体基因（MARCO、TLR3和IFIH1）和I型干扰素基因（IFN-α和IFN-β）在HD11细胞中表达；相反，干扰 ALVE env转录物会抑制这些抗病毒免疫基因的表达。本研究揭示了鸡内源性反转录病毒衍生的env转录物在巨噬细胞中的抗病毒作用机制，为解析鸡内源性反转录病毒在家禽抗病毒免疫中的生物学功能以及家禽抗病育种研究提供理论基础和参考依据。

关键词：内源性反转录病毒 env转录物禽白血病病毒鸡巨噬细胞

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基于CRISPR-Cas9技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系

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中国农业科技导报 2023年第11期25卷 227-233页

作者：王强州潘诗雨方梦雅李微王佳兴刘茵茵陈世豪扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

为研究甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet methylcytosine dioxygenase 2,TET2)及其介导的羟甲基化修饰在调控天然免疫反应中的作用,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系。针对鸡TET2 mRNA的2种剪接变体的共有CDS序... 详细信息

为研究甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet methylcytosine dioxygenase 2,TET2)及其介导的羟甲基化修饰在调控天然免疫反应中的作用,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建TET2基因敲除的鸡胚成纤维细胞系。针对鸡TET2 mRNA的2种剪接变体的共有CDS序列设计4组sgRNA,构建sgRNA表达质粒,连同Cas9-T2A-GFP质粒共转染DF-1细胞,筛选高切割效率的sgRNA;将转染该sgRNA的DF-1细胞,进行流式细胞分选,获取表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的细胞,再通过有限稀释法筛选单克隆细胞,并用DNA测序进行鉴定。单克隆敲除细胞扩大培养后,Western blot和Dot blot检测TET2蛋白的表达水平和羟甲基化(5hmC)水平。DNA测序结果表明,TET2-gRNA-2靶位点附近分别发生2和28 bp的缺失突变,引起TET2蛋白移码突变,将该细胞株命名为DT-6。DT-6细胞传代15次以上,细胞形态稳定。Western blot结果显示,与DF-1细胞相比,DT-6细胞几乎不表达TET2蛋白。Dot blot结果显示,与DF-1细胞相比,DT-6细胞全基因组羟甲基化水平显著降低。利用CRISPR-Cas9技术成功构建了敲除TET2基因的鸡胚成纤维细胞系,为研究鸡TET2及其介导羟甲基化修饰参与调控天然免疫反应的途径和分子机制奠定基础。

关键词：鸡 TET2 CRISPR-Cas9 TET2基因敲除鸡胚成纤维细胞

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G0S2抑制ALV-J在鸡巨噬细胞中增殖

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2023年第5期44卷 65-70页

作者：吴慧显郭旺朱姝桐王陈君骆欢崔恒宓柴文娴胡序明扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 常州市动物疫病预防控制中心江苏常州213002

G0/G1期开关基因2(G0/G1 switch 2,G0S2)在脂肪稳态、细胞增殖和肿瘤发生等生物学过程中扮演着重要角色,而有关G0S2基因在家禽抗病毒免疫中的研究相对甚少。为探讨G0S2基因在鸡巨噬细胞中的抗病毒作用及其机制,构建G0S2真核表达载体并... 详细信息

G0/G1期开关基因2(G0/G1 switch 2,G0S2)在脂肪稳态、细胞增殖和肿瘤发生等生物学过程中扮演着重要角色,而有关G0S2基因在家禽抗病毒免疫中的研究相对甚少。为探讨G0S2基因在鸡巨噬细胞中的抗病毒作用及其机制,构建G0S2真核表达载体并转染鸡巨噬细胞系HD11细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测G0S2过表达对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制水平、天然免疫基因TLR3和糖酵解关键调控基因MYC表达的影响。结果表明:G0S2过表达可显著抑制ALV-J在HD11细胞中增殖。G0S2显著上调HD11细胞内双链RNA(dsRNA)识别受体基因TLR3表达,并抑制糖酵解调控基因MYC表达,说明激活TLR3表达和抑制MYC表达可能是G0S2基因抑制ALV-J在巨噬细胞中增殖的重要机制。综上,该研究揭示了鸡G0S2在巨噬细胞中的抗病毒功能及其作用机制,为今后研究G0S2的功能及其宿主遗传抗性提供了参考依据。

关键词：鸡 G0S2 禽白血病病毒巨噬细胞

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长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1抑制ALV-J在鸡巨噬细胞中增殖

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 18-25页

作者：柴文娴骆欢金松王姣罗坚强洪雅琴耿拓宇崔恒宓胡序明常州市动物疫病预防控制中心常州213002 扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

研究表明,源自内源性反转录病毒的长非编码RNA可能是巨噬细胞抗病毒免疫反应的重要组成部分。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与宿主遗传抗性有关,能够激活非免疫细胞抗病毒天然免疫反应。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS... 详细信息

研究表明,源自内源性反转录病毒的长非编码RNA可能是巨噬细胞抗病毒免疫反应的重要组成部分。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与宿主遗传抗性有关,能够激活非免疫细胞抗病毒天然免疫反应。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在鸡巨噬细胞中的抗病毒作用及其机制,本研究通过荧光定量PCR发现lnc-ALVE1-AS1在ALV-J感染鸡巨噬细胞系HD11后24 h显著下调。进一步通过lnc-ALVE1-AS1过表达实验证实,lnc-ALVE1-AS1可以显著抑制ALV-J在HD11细胞中增殖。机制上,lnc-ALVE1-AS1显著上调HD11细胞dsRNA识别受体(TLR3)、Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)和其他抗病毒天然免疫基因(IRF7、MX1、OASL和IFITM3)表达。然而,干扰TLR3或者抑制TLR3信号后lnc-ALVE1-AS1诱导Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)的能力显著减弱。共聚焦定位分析显示在HD11细胞中lnc-ALVE1-AS1可以与TLR3蛋白直接结合。这说明激活TLR3信号可能是lnc-ALVE1-AS1抑制ALV-J在巨噬细胞中增殖的一个重要机制。本研究揭示了lnc-ALVE1-AS1在巨噬细胞中抗病毒功能及其作用机制,为抗病育种研究提供了新的遗传基础。

关键词：内源性反转录病毒 lnc-ALVE1-AS1 禽白血病病毒鸡巨噬细胞

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CRISPR/Cas基因编辑技术研究进展及其在斑马鱼中的应用

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生物工程学报 2020年第1期36卷 1-12页

作者：欧阳娟薛松磊周琦琦崔恒宓扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所

规律成簇间隔的短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)是细菌和古菌中的获得性免疫系统,利用该系统能定点进行基因编辑。最近,科学家发现了新的CRISPR-associated (Cas)蛋白,其中由Cas12a介导的基因编辑能显著降低脱靶率。文中对CRISPR/Cas系统的发现历史、组成和分类、工作原理进行概述,并总结了该系统的最新研究进展及在斑马鱼Danio rerio中的应用。

关键词： CRISPR/Cas 基因编辑斑马鱼

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长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与禽白血病病毒抗性和易感品系鸡相关性分析

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中国动物传染病学报 2023年第4期31卷 26-32页

作者：柴文娴骆欢陈绪靖陈世豪耿拓宇崔恒宓胡序明常州市动物疫病预防控制中心常州213002 扬州大学动物科学与技术学院表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009

内源性反转录病毒是长非编码RNA的重要来源,在抗病毒先天性免疫中发挥重要作用。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1能够激活细胞免疫功能并抑制禽白血病病毒增殖。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性和易感品系鸡中... 详细信息

内源性反转录病毒是长非编码RNA的重要来源,在抗病毒先天性免疫中发挥重要作用。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1能够激活细胞免疫功能并抑制禽白血病病毒增殖。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性和易感品系鸡中的表达规律及其与禽白血病病毒抗性的相关性,本研究通过荧光定量PCR发现,lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性(G1)品系鸡免疫器官(胸腺、脾脏和法氏囊)和CEF细胞中的表达水平显著高于ALV易感(G3)品系鸡。病毒感染实验表明lnc-ALVE1-AS1在ALVJ感染CEF(G1和G3来源)细胞24h和96h后均显著下调;但是,lnc-ALVE1-AS1在G3来源CEF细胞中的表达水平下降更为明显,且ALVJ病毒复制水平显著高于G1鸡来源的CEF细胞。进一步通过lnc-ALVE1-AS1过表达实验证实,lnc-ALVE1-AS1不仅可以显著上调G3来源CEF细胞dsRNA识别受体(TLR3和IFIH1)和抗病毒天然免疫基因(IFI27-L2、IFIT5、IFITM3、IFN-β、ISG12-2和RASD2)表达,还显著抑制ALVJ复制。本研究揭示了lnc-ALVE1-AS1在禽白血病病毒抗性和易感品系鸡细胞和免疫组织器官中的表达规律和抗病毒功能,为抗病育种研究提供了新的遗传基础。

关键词：内源性反转录病毒 lnc-ALVE1-AS1 禽白血病病毒鸡胚成纤维细胞

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鸡SAMD9L基因真核表达载体构建及其对ALV-J病毒复制的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第6期42卷 54-59页

作者：陈世豪潘诗雨赵睿涵吴挺扬州大学表观遗传学与表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为分析鸡无菌α基序域蛋白9样(SAMD9L)蛋白的生物学特性,构建SAMD9L基因真核表达载体,并探究其对J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的影响。利用ProtParam、Uniport、TMHMM和String等在线网站分析SAMD9L序列,获得亲疏水性、保守结构域、信... 详细信息

为分析鸡无菌α基序域蛋白9样(SAMD9L)蛋白的生物学特性,构建SAMD9L基因真核表达载体,并探究其对J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的影响。利用ProtParam、Uniport、TMHMM和String等在线网站分析SAMD9L序列,获得亲疏水性、保守结构域、信号肽表达及互作蛋白等生物信息。构建携带His标签的SAMD9L重组表达载体并进行测序鉴定。采用qRT-PCR技术检测ALV-J感染对SAMD9L表达水平的影响;采用Western blot技术检测过表达SAMD9L对ALV-J复制的影响。结果表明:鸡SAMD9L无信号肽表达,无跨膜结构域,含有无菌α基序超家族保守结域(55—249位氨基酸),其互作蛋白预测为MX1、DDX60、ISG12-2和IFIT5等天然免疫抗病毒蛋白质。ALV-J感染36 h后显著诱导SAMD9L表达(P<0.001),而过表达SAMD9L则显著抑制ALV-J在DF-1细胞中的复制,推测鸡SAMD9L具有抗ALV-J病毒的能力。该研究成功构建了鸡SAMD9L基因真核表达载体,通过生物信息学分析了蛋白质特性,并初步探究SAMD9L与ALV-J感染之间的关系,为进一步阐明鸡SAMD9L的生物学功能及其抗J亚型禽白血病的分子机制奠定了基础。

关键词：鸡 SAMD9L 生物信息学分析真核表达载体 ALV-J复制

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非酒精性脂肪肝病形成机制:补体和线粒体在其形成中的作用

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生命的化学 2021年第2期41卷 246-252页

作者：邢娅赵敏孟刘龙龚道清耿拓宇扬州大学表观遗传学及表观基因组学研究所扬州225009

非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)作为一种流行性代谢疾病,一直是研究热点之一。NAFLD的形成涉及线粒体功能障碍、胰岛素抵抗、氧化应激、炎症反应等机制,而线粒体与补体在其中占据重要位置。然而,线粒体与... 详细信息

非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)作为一种流行性代谢疾病,一直是研究热点之一。NAFLD的形成涉及线粒体功能障碍、胰岛素抵抗、氧化应激、炎症反应等机制,而线粒体与补体在其中占据重要位置。然而,线粒体与补体在NAFLD形成过程中的内在关联及协同作用目前尚不十分清楚。本文着重对线粒体与补体在NAFLD形成中的作用进行综述,并提出补体可能通过作用于线粒体参与NAFLD形成的假设,这将有助于NAFLD形成机制的阐明。

关键词：非酒精性脂肪肝病线粒体补体氧化应激炎症

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