检索结果-内蒙古大学图书馆

实用临床医药杂志 2022年第12期26卷 131-134页

作者：王丽萍周东杰金鑫鲁军吴挺胡序明崔恒宓扬州大学临床医学院江苏扬州225001 扬州大学表观遗传学与基因组学研究所江苏扬州225001

肝细胞肝癌(HCC)是临床常见的消化系统恶性肿瘤之一,具有发病隐匿、病程进展快、术后复发率高、致死率高等特点,已严重威胁中国乃至全球居民的生命和健康,是亟需解决的重大医疗问题。随着高通量测序技术的飞速发展,长链非编码RNA(LncRNA... 详细信息

肝细胞肝癌(HCC)是临床常见的消化系统恶性肿瘤之一,具有发病隐匿、病程进展快、术后复发率高、致死率高等特点,已严重威胁中国乃至全球居民的生命和健康,是亟需解决的重大医疗问题。随着高通量测序技术的飞速发展,长链非编码RNA(LncRNA)在众多生命活动中发挥的重要作用得到医学界研究人员的广泛重视。本文对LncRNA的功能及其在HCC发生发展中的作用进行阐述,并分析其对HCC的诊断与治疗潜力,以期为HCC的基础研究与临床医学研究提供参考依据。

关键词：肝细胞肝癌长链非编码RNA 竞争性内源性RNA 表观遗传学高通量测序

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鸡c-myc原癌基因反义RNA的鉴定及其抗ALV-J能力的分析

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中国预防兽医学报 2022年第1期44卷 59-65页

作者：骆欢张瑾麒朱姝桐柴文娴陈绪靖陈世豪耿拓宇崔恒宓胡序明扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 常州市动物疫病预防控制中心江苏常州213002

原癌基因c-myc被鉴定为J亚群禽白血病病毒(ALV-J)诱导髓样细胞瘤的常见整合位点,其异常激活可能是ALV-J最重要的分子致病机制。为了鉴定c-myc反义RNA对c-myc基因表达的影响及其在ALV-J增殖中的作用,本研究通过cDNA末端快速扩增(RACE)技... 详细信息

原癌基因c-myc被鉴定为J亚群禽白血病病毒(ALV-J)诱导髓样细胞瘤的常见整合位点,其异常激活可能是ALV-J最重要的分子致病机制。为了鉴定c-myc反义RNA对c-myc基因表达的影响及其在ALV-J增殖中的作用,本研究通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术、PCR扩增5’-race和3’-race后对其编码属性的分析鉴定结果显示,鸡c-myc原癌基因反义RNA全长621 bp,且不编码蛋白;该反义RNA序列定位于鸡2号染色体,且源自c-myc外显子3反向序列,因此将其命名为ch-MYC-AS1。将ch-MYC-AS1连接载体pcDNA3.1,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ch-MYC-AS1,将其转染至鸡巨噬细胞细胞系HD11,培养48 h后利用荧光定量PCR和western blot检测ch-MYC-AS1过表达对c-myc表达的影响,结果显示,过表达ch-MYC-AS1可以显著抑制c-myc原癌基因在HD11中的表达。以MOI 5的ALV-J(JS09GY3株)感染HD11细胞4 h后,将pcDNA3.1-ch-MYC-AS1质粒转染该细胞,48 h后采用IDEXX禽白血病抗原检测试剂盒检测细胞上清中ALV-J p27蛋白的表达水平,结果显示过表达ch-MYC-S1显著减少细胞上清中ALV-J p27蛋白的表达;进一步通过荧光定量PCR、western blot检测过表达ch-MYC-AS1对ALV-J复制的影响,结果显示,ALV-J env基因mRNA转录水平和蛋白表达水平在ch-MYC-AS1转染后48 h的HD11细胞中均显著下调(P<0.01);利用间接免疫荧光技术检测DF-1细胞上清中ALV-J的病毒效价,结果显示:与对照组相比,HD11细胞上清中ALV-J的病毒效价在ch-MYC-AS1转染后48 h明显降低。上述结果表明过表达ch-MYC-AS1可以显著抑制ALV-J在HD11细胞中的增殖。本研究首次揭示了原癌基因c-myc反义RNA的抗病毒功能,为进一步探究c-myc基因在ALV-J致病机理中的作用提供了参考依据。

关键词： c-myc原癌基因反义RNA 禽白血病病毒巨噬细胞

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工程化haPD-1外泌体的制备及功能初步鉴定

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扬州大学学报(农业与生命科学版) 2024年第6期45卷 65-73页

作者：齐田羽陈磊孙振崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 江苏易诺维生物医学研究院南京211100

为阻断免疫细胞上PD-1与肿瘤细胞上PD-L1结合,阻止免疫逃逸,以利免疫细胞识别并杀伤肿瘤细胞,目前已开发多种单抗药物,但均不可避免地出现副作用或治疗效率不高等问题。为解决这些问题,用慢病毒载体将高亲和PD-1片段(haPD-1)与跨膜蛋白L... 详细信息

为阻断免疫细胞上PD-1与肿瘤细胞上PD-L1结合,阻止免疫逃逸,以利免疫细胞识别并杀伤肿瘤细胞,目前已开发多种单抗药物,但均不可避免地出现副作用或治疗效率不高等问题。为解决这些问题,用慢病毒载体将高亲和PD-1片段(haPD-1)与跨膜蛋白LAMP2B信号肽序列融合,转入HEK293T细胞,使其在膜上分泌表达haPD-1的外泌体,这些外泌体可竞争性地结合肿瘤细胞表面PD-L1,同时拥有自身免疫原性低、可长时间稳定存在的优点。结果表明:haPD-1基因被成功转染至HEK293T细胞;通过细胞上清分离的外泌体经检测符合外泌体特征,并与PD-L1具有良好的亲和力,在体外可被PD-L1阳性HepG2细胞摄取,并可提高NK细胞对PD-L1阳性HepG2肝癌细胞的杀伤力。综上,表达haPD-1的工程化外泌体可能具有类似于PD-L1单抗的功能,可与肿瘤细胞表面的PD-L1结合,阻止肿瘤细胞的免疫逃逸,可应用于肿瘤的免疫治疗。

关键词：外泌体 PD-1 PD-L1 haPD-1 免疫逃逸抗肿瘤

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过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体的抗衰老作用

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第4期42卷 1-6页

作者：周琦琦孙振刘洋洋李华玲崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 江苏易诺维生物医学研究院南京211102 扬州大学医学院江苏扬州225009

NAMPT是NAD+补救合成途径的限速酶,具有抗衰老作用。外泌体是一种包含蛋白质、miRNA、mRNA、lncRNA等内容物的天然内源性载体。利用慢病毒方法构建NAMPT过表达的人脐带间充质干细胞系,获得过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体,随后通过... 详细信息

NAMPT是NAD+补救合成途径的限速酶,具有抗衰老作用。外泌体是一种包含蛋白质、miRNA、mRNA、lncRNA等内容物的天然内源性载体。利用慢病毒方法构建NAMPT过表达的人脐带间充质干细胞系,获得过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体,随后通过与人皮肤成纤维细胞共培养和饲喂秀丽隐杆线虫,研究过表达NAMPT脐带间充质干细胞外泌体对其抗衰老的影响。结果表明:基因修饰后脐带间充质干细胞及其外泌体内NAMPT蛋白含量显著升高,并能促进人皮肤成纤维细胞增殖和延缓人皮肤成纤维细胞衰老;同时能延长秀丽隐杆线虫寿命和增加秀丽隐杆线虫抗氧化能力。这一研究提示过表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体具有一定的抗衰老作用。

关键词：人脐带间充质干细胞外泌体 NAMPT 人皮肤成纤维细胞秀丽隐杆线虫

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鸡巨噬细胞CCL4抗禽白血病病毒作用及其机制初探

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中国兽医学报 2021年第4期41卷 670-675页

作者：陈绪靖赵宗仪吉紫荆豆春峰吴挺陈世豪耿拓宇胡序明崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为了探究CCL4基因抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的作用机制,观察了CCL4基因在ALV-J感染鸡巨噬细胞(HD11)不同时间(6,12,24,36,48h)后的表达规律,分别构建CCL4、ALV-J env、ALV-J GP85和ALV-J GP37真核表达载体并转染HD11细胞,通过RT-qPCR检测CCL4过表达对ALV-J复制水平及CCL4受体CCR5和其下游天然免疫相关基因及其他抗病毒基因的表达水平的影响,同时分析ALV-J env对CCL4基因表达的影响。结果显示:ALV-J感染HD11细胞后主要抑制CCL4表达(P<0.01);ALV-J env蛋白对CCL4有显著抑制作用(P<0.01);而过表达CCL4显著抑制了ALV-J病毒复制(P<0.01);CCL4可能通过激活抗病毒基因S100A9及其上、下游通路抑制ALV-J病毒增殖。本研究揭示了CCL4在病毒感染后巨噬细胞中的动态表达规律及其抗ALV-J作用,为今后研究CCL4的功能及其宿主遗传抗性奠定基础。

关键词： CCL4 巨噬细胞天然免疫 ALV-J

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利用CRISPR/Cas9技术构建永生化脐带间充质干细胞系及MYC-AS1转基因研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第3期42卷 1-9页

作者：李洪强刘洋洋孙振崔恒宓扬州大学生物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品国际合作联合实验室江苏扬州225009 江苏易诺维生物医学研究院南京211102

人脐带间充质干细胞(hMSCs)是一种具有多向分化潜能的多能干细胞,在组织修复和某些疾病治疗的临床应用上发挥着重要作用。利用CRISPR/Cas9技术在腺相关病毒AAVS1位点插入具有磷酸甘油酸激酶PGK启动子和SV40-polyA的SV40 LT基因,使hMSCs... 详细信息

人脐带间充质干细胞(hMSCs)是一种具有多向分化潜能的多能干细胞,在组织修复和某些疾病治疗的临床应用上发挥着重要作用。利用CRISPR/Cas9技术在腺相关病毒AAVS1位点插入具有磷酸甘油酸激酶PGK启动子和SV40-polyA的SV40 LT基因,使hMSCs达到永生化。并利用慢病毒构建具有抑癌作用的反义长链非编码RNA MYC-AS1转基因的hMSCs,从该细胞系的培养液中分离提取表达MYC-AS1的外泌体。通过处理肝癌HepG2细胞,研究外泌体对HepG2表型的影响。结果表明:与野生型MSCs相比,永生化细胞MSCs-SV40增殖显著加快,但其定向分化特性并未改变,可在体外稳定传代超过40代,且未发现成瘤性。MYC-AS1转基因hMSCs的外泌体能表达MYC-AS1,且显著抑制HepG2肿瘤细胞的增殖和迁移。这一研究通过CRISPR/Cas9技术敲入SV40 LT基因成功构建了hMSCs,其MYC-AS1转基因细胞的外泌体对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑制作用,这对hMSCs及其外泌体的基础研究和临床应用研究具有重要意义。

关键词：脐带间充质干细胞 CRISPR/Cas9技术永生化外泌体 MYC-AS1

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ALV-J下调鸡MARCO转录水平拮抗宿主抗病毒天然免疫应答的研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第2期42卷 46-51页

作者：陈绪靖吉紫荆赵宗仪豆春峰柴文娴陈世豪耿拓宇胡序明崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 常州市动物疫病预防控制中心江苏常州213002

为研究鸡巨噬细胞受体(MARCO)基因与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染两者间的关联,先过表达ALV-J env基因不同结构域后通过RT-qPCR检测MARCO基因mRNA的转录水平,再构建MARCO真核表达载体并转染HD11细胞,通过RT-qPCR和Western blot检测MARC... 详细信息

为研究鸡巨噬细胞受体(MARCO)基因与J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染两者间的关联,先过表达ALV-J env基因不同结构域后通过RT-qPCR检测MARCO基因mRNA的转录水平,再构建MARCO真核表达载体并转染HD11细胞,通过RT-qPCR和Western blot检测MARCO过表达对ALV-J复制水平的影响,最后通过RT-qPCR检测MARCO过表达对巨噬细胞天然免疫相关基因TLR3和IFIH1转录水平的影响。结果表明:ALV-J env蛋白对MARCO基因mRNA转录水平有极显著抑制作用;过表达MARCO极显著抑制ALV-J病毒的复制;过表达MARCO后,TLR3和IFIH1基因mRNA转录水平均极显著上调。这一研究揭示了MARCO基因在ALV-J感染巨噬细胞后的动态转录水平规律及其抑制ALV-J增殖的功能,其可能通过诱导天然免疫基因TLR3、IFIH1高转录水平的途径来实现抗病毒作用,为今后研究MARCO的功能及治疗禽白血病提供了新的思路。

关键词： MARCO基因巨噬细胞天然免疫基因克隆 J亚群禽白血病病毒

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DNA甲基化抑制剂DAC处理对鸡Wnt10a基因表达及其启动子甲基化的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第1期42卷 1-6页

作者：吴挺陈绪靖陈世豪胡序明崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

Wnt10a基因在细胞增殖、分化及迁移中发挥着重要作用,参与调控机体生长发育的诸多生物学过程,但对鸡Wnt10a基因表达的表观遗传调控机制尚不清楚。为探究DNA甲基化对Wnt10a基因表达的影响,以DMSO处理为对照组,5-Aza-2’-deoxycytidine (D... 详细信息

Wnt10a基因在细胞增殖、分化及迁移中发挥着重要作用,参与调控机体生长发育的诸多生物学过程,但对鸡Wnt10a基因表达的表观遗传调控机制尚不清楚。为探究DNA甲基化对Wnt10a基因表达的影响,以DMSO处理为对照组,5-Aza-2’-deoxycytidine (DAC)处理为试验组,分别用0.25、0.5、1.0、2.5、5.0μmol·L^(-1)浓度的DAC处理鸡胚成纤维细胞DF-1,通过RT-qPCR分析比较Wnt10a基因在DAC和DMSO处理后的表达水平;同时通过NCBI数据获取Wnt10a启动子区序列,设计亚硫酸氢盐测序(BSP)引物,5.0μmol·L^(-1) DAC处理鸡胚成纤维细胞DF-1 48 h,焦磷酸测序分析鸡Wnt10a基因上游部分CpG位点的甲基化水平。结果表明:相对于DMSO处理,DAC处理Wnt10a基因表达量极显著上调,且上调幅度随DAC处理浓度的升高而升高;同时Wnt10a基因上游CpG位点甲基化水平显著下降。综合而言,DNA甲基化抑制剂DAC可显著降低鸡Wnt10a基因起始位点上游序列部分CpG位点的甲基化水平,并激活Wnt10a基因的表达。

关键词：鸡DF-1细胞 DAC Wnt10a基因基因表达量甲基化亚硫酸氢盐测序

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脐带间充质干细胞及其外泌体对宫颈癌HeLa细胞的作用初探

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2020年第4期41卷 54-58,70页

作者：吕达崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

人脐带间充质干细胞是一种多能干细胞,可用于多种疾病的临床治疗。利用从人类脐带分离的间充质干细胞,以及从该间充质干细胞的培养液中分离提取的外泌体,通过与宫颈癌HeLa细胞共培养,研究间充质干细胞及其外泌体对HeLa细胞生物学表型的... 详细信息

人脐带间充质干细胞是一种多能干细胞,可用于多种疾病的临床治疗。利用从人类脐带分离的间充质干细胞,以及从该间充质干细胞的培养液中分离提取的外泌体,通过与宫颈癌HeLa细胞共培养,研究间充质干细胞及其外泌体对HeLa细胞生物学表型的影响。结果表明:脐带间充质干细胞共培养均极显著抑制HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭等表型,并极显著促进HeLa细胞凋亡。脐带间充质干细胞来源的外泌体处理HeLa细胞后,细胞增殖、迁移及侵袭也同样受到极显著抑制,并极显著促进细胞凋亡。这一研究提示脐带间充质干细胞及其外泌体并未在体外培养条件下促进HeLa细胞的生长、迁移,相反对HeLa细胞的表型具有一定的抑制作用。

关键词：人脐带间充质干细胞外泌体 HeLa细胞抑癌作用

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DNA甲基转移酶N6AMT1基因敲降和过表达及其功能初探

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2019年第5期40卷 26-32页

作者：杨钰孙振薛松磊胡序明崔恒宓扬州大学动物科学与技术学院/表观遗传学及表观基因组学研究所江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

6mA甲基化是DNA甲基化修饰的一种重要方式,受甲基转移酶N6AMT1基因的调控。为研究N6AMT1基因的功能,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建N6AMT1基因敲降的HEK293细胞系,同时在Hela细胞系中过表达N6AMT1基因,检测N6AMT1基因表达变化对细胞... 详细信息

6mA甲基化是DNA甲基化修饰的一种重要方式,受甲基转移酶N6AMT1基因的调控。为研究N6AMT1基因的功能,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建N6AMT1基因敲降的HEK293细胞系,同时在Hela细胞系中过表达N6AMT1基因,检测N6AMT1基因表达变化对细胞增殖和迁移能力的影响。结果表明:正常肾上皮组织细胞系HEK293中N6AMT1基因表达水平显著高于癌细胞;正常肝细胞系LO2中N6AMT1基因表达水平显著高于肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721;N6AMT1基因敲降显著增强HEK293细胞的增殖及迁移能力;而Hela细胞过表达N6AMT1基因后,细胞的增殖和迁移均显著受到抑制。这一研究提示N6AMT1基因介导的6mA甲基化可能对细胞增殖和迁移有重要影响。

关键词： DNA 6mA甲基化 N6AMT1基因 CRISPR/Cas9 肿瘤

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