检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2022年第1期46卷 64-69页

作者：彭静怡冯健男刘广超乔春霞柴立辉河南大学基础医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475004 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)能够引起猪繁殖与呼吸障碍综合征,已成为全球影响生猪养殖业发展的重要传染性病毒之一。NSP4蛋白是PRRSV的3C样丝氨酸蛋白酶。在病毒增殖过程中,NSP4蛋白对病毒蛋白的表达与加工起核心作用,负责多聚... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)能够引起猪繁殖与呼吸障碍综合征,已成为全球影响生猪养殖业发展的重要传染性病毒之一。NSP4蛋白是PRRSV的3C样丝氨酸蛋白酶。在病毒增殖过程中,NSP4蛋白对病毒蛋白的表达与加工起核心作用,负责多聚蛋白的切割。该蛋白在病毒生命周期中的关键作用使其成为理想的抗病毒靶点候选者。该文综述了NSP4的结构、功能、作用机制及在防治PRRS中的作用研究进展。

关键词：猪繁殖和呼吸综合征病毒非结构蛋白质类致病机制抗体防治

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人动脉血内皮祖细胞的分离与鉴定

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解剖学杂志 2017年第4期40卷 473-476页

作者：樊梦雅钟晓鸣陈小燕李慧靖静李娟王珊珊王冠丽王耀辉抗体药物河南省工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室开封475004 河南大学淮河医院心内科开封475002 河南大学第一附属医院开封475001 上海市教育评估院上海200036

血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）与胚胎发育中血管母细胞可能存在延续关系，可以诱导分化为血管内皮细胞，而且在体内血管新生过程中也发挥重要作用。应用EPCs移植治疗心血管疾病正在成为目前研究的热点。以往研... 详细信息

血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）与胚胎发育中血管母细胞可能存在延续关系，可以诱导分化为血管内皮细胞，而且在体内血管新生过程中也发挥重要作用。应用EPCs移植治疗心血管疾病正在成为目前研究的热点。以往研究中EPCs主要来源于骨髓、脐带血、外周血以及脂肪组织。

关键词：血管内皮祖细胞动脉血鉴定分离血管内皮细胞 EPCs cells 血管母细胞

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沉默TNFAIP8抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7的迁移功能

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第4期36卷 288-293页

作者：杨菲吴素霞冯世明刘广超柴立辉河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室、抗体药物河南省工程实验室开封475004

目的：构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白8（tumor necrosis factor alpha-induced protein 8, TNFAIP8）shRNA慢病毒表达载体,通过沉默TNFAIP8基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达,探讨TNFAIP8基因沉默对巨噬细胞功能的影响。方法设计合成TNF... 详细信息

目的：构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白8（tumor necrosis factor alpha-induced protein 8, TNFAIP8）shRNA慢病毒表达载体,通过沉默TNFAIP8基因在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达,探讨TNFAIP8基因沉默对巨噬细胞功能的影响。方法设计合成TNFAIP8的特异性shRNA序列,退火后连入pLKO.1-TRC载体构建TNFAIP8 shRNA慢病毒表达载体,双酶切和基因测序鉴定构建载体序列的正确性；转染293T细胞制备慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒感染RAW264.7细胞,沉默TNFAIP8基因在该细胞中表达,荧光定量RT-PCR和Western blot检测TNFAIP8的基因及蛋白表达水平验证基因沉默效果。培养基因沉默的RAW264.7细胞和对照组细胞,平皿黏附试验及划痕愈合试验观察TNFAIP8沉默对 RAW264.7细胞黏附及迁移能力的影响。结果双酶切电泳结果表明,构建的shRNA慢病毒载体酶切片段相对分子质量大小正确,基因测序结果也表明插入序列正确。荧光定量RT-PCR和Western blot结果表明,基因沉默组细胞中TNFAIP8的基因及蛋白表达水平较对照组细胞均显著降低（P〈0.05）。平皿黏附试验结果发现,在接种15 min、30 min和2 h后,沉默组细胞黏附到培养皿底面上的细胞数量显著少于对照组细胞（P〈0.05）。培养12 h后,和对照组细胞相比,沉默TNFAIP8的RAW264.7细胞伪足数量较少,且突起不明显。划痕愈合试验结果表明,划痕24 h后,对照组细胞划痕面积明显缩小,划痕愈合率达到50%左右,而沉默组细胞划痕愈合率只有25%左右,显著低于对照组细胞（P〈0.05）。结论成功构建了 TNFAIP8 shRNA 慢病毒表达载体,该载体对TNFAIP8基因的表达具有良好的沉默效果；沉默TNFAIP8在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达可以显著抑制巨噬细胞的黏附和迁移能力。

关键词： shRNA: TNFAIP8 巨噬细胞迁移

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FILIP-1L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国免疫学杂志 2016年第6期32卷 832-837页

作者：都景芳顿国庆张舒曼褚留杰李淑莲胡延忠马远方抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室开封475004

目的:表达、纯化GST-FILIP-1L融合蛋白,制备FILIP-1L多克隆抗体。方法:pGEX-4T3-FILIP-1L重组质粒转化***21大肠杆菌,IPTG诱导GST-FILIP-1L融合蛋白表达,Glutathion Sepharse 4B纯化GST-FILIP-1L融合蛋白。将纯化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备FILIP-1L多克隆抗体,用ELISA方法检测多克隆抗体效价,Western blot检测多克隆抗体与FILIP-1L蛋白、细胞转染FILIP-1L蛋白及细胞FILIP-1L蛋白的结合能力。结果:在大肠杆菌中诱导出高表达的FILIP-1L融合蛋白,经Glutathion Sepharse 4B纯化后免疫新西兰大耳白兔,获得了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,亲和层析获得纯度较高的多克隆抗体,WB检测显示多克隆抗体能够与FILIP-1L蛋白、293细胞转染FILIP-1L蛋白及肝癌细胞FILIP-1L蛋白结合。结论:成功表达、纯化了GST-FILIP-1L融合蛋白,制备了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,为研究FILIP-1L蛋白生物学功能提供了有用的实验工具。

关键词： FILIP-1L 融合蛋白多克隆抗体

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低氧工作站建立大鼠原代心肌细胞缺氧模型

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解剖学杂志 2016年第3期39卷 372-375页

作者：许瑞陈希蒋易楠祝伟娜王耀辉抗体药物河南省工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室河南大学医学院细胞与分子免疫重点实验室开封475004 郑州大学基础医学院郑州450001

心肌梗死、缺血再灌注损伤等多种心血管疾病的发生和发展过程中多伴有细胞缺氧,进而引起细胞损伤,影响心正常生理功能.体外心肌细胞缺氧模型能够较好排除神经、体液等因素及个体差异性的影响,更加有利于对缺氧性心肌损伤发生机制的研究... 详细信息

心肌梗死、缺血再灌注损伤等多种心血管疾病的发生和发展过程中多伴有细胞缺氧,进而引起细胞损伤,影响心正常生理功能.体外心肌细胞缺氧模型能够较好排除神经、体液等因素及个体差异性的影响,更加有利于对缺氧性心肌损伤发生机制的研究,为探讨如何保护缺氧心肌提供重要理论基础.因此,建立体外细胞缺氧模型是从细胞和分子水平研究该类疾病的重要方法,在多种缺血缺氧性疾病中均得到广泛应用.目前,国内外应用较多的心肌细胞缺氧模型包括物理法缺氧模型和化学法缺氧模型.如何更好地模拟体内真实缺氧环境,建立更加稳定、理想的缺氧模型,一直是该领域研究的关键环节之一.

关键词：原代心肌细胞缺氧模型工作站缺血再灌注损伤缺氧性心肌损伤缺血缺氧性疾病心血管疾病大鼠

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TRAIL通过依赖于ERstress的NF-κB信号通路促进缺氧复氧诱导的巨噬细胞细胞因子的表达与迁移

TRAIL通过依赖于ERstress的NF-κB信号通路促进缺氧复氧诱导的巨...

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第十一届全国免疫学学术大会

作者：陈小燕蒋易楠王耀辉马远方河南大学医学院抗体药物河南省工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室河南省细胞与分子免疫重点实验室郑州大学基础医学院

目的:心肌缺血性疾病(ischemic heart diseases,IHD)是导致大量心肌细胞死亡,以及心肌不可逆修复的一类疾病,并最终导致患者死亡,因此成为全球范围致死率最高的疾病之一。迅速恢复冠状动脉血流,是目前临床治疗中的常用手段,一般为药物... 详细信息

目的:心肌缺血性疾病(ischemic heart diseases,IHD)是导致大量心肌细胞死亡,以及心肌不可逆修复的一类疾病,并最终导致患者死亡,因此成为全球范围致死率最高的疾病之一。迅速恢复冠状动脉血流,是目前临床治疗中的常用手段,一般为药物溶栓或直接冠状动脉介入治疗(PCI)。但血流再通常伴随着缺血再灌注损伤(ischemia and reperfusion injury,I/R injury)。心肌I/R过程伴随着炎症反应的发生,巨噬细胞在这个过程中均发挥了重要作用。目前的研究发现TRAIL也参与了这个过程,因此我们想探讨在缺氧复氧(hypoxia and reoxygenation,H/R)条件下,TRAIL对巨噬细胞的作用。方法:建立大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383的缺氧复氧(H/R)损伤模型,并加入TRAIL,利用Western Blotting、RT-PCR和免疫荧光等方法检测各细胞因子(CCL-2,IL-1β等)的mRNA与蛋白表达水平,并利用Western blotting检测ER stress与NF-κB的活化情况。利用Transwell检测TRAIL在H/R条件下对巨噬细胞迁移力的影响。结果:H/R能够上调NR8383细胞中各类炎症因子(如CCL-1、IL-1β)的mRNA水平。TRAIL则能够进一步上调这些细胞因子的mRNA表达水平,并且具有剂量依赖效应。这种效应依赖于NF-κB信号通路的活化。TRAIL同样能够进一步促进H/R诱导的ER stress信号通路的活化,表现为CHOP的增加,我们还发现,抑制ER stress的活性,能够部分抑制TRAIL诱导的细胞因子产生,并降低p65的入核率,说明ER stress能够部分调控NF-κB信号通路的活化。同时,我们还发现TRAIL能够加强H/R诱导的巨噬细胞迁移。结论:TRAIL能够通过ER stress依赖的NF-κB信号通路的活化促进NR8383细胞分泌细胞因子,并促进巨噬细胞的迁移。

关键词： TRAIL 缺氧复氧巨噬细胞 ER stress NF-κB

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TRAIL通过依赖于ERstress的NF-κB信号通路促进缺氧复氧诱导的巨噬细胞细胞因子的表达与迁移

TRAIL通过依赖于ERstress的NF-κB信号通路促进缺氧复氧诱导的巨...

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2016第十一届全国免疫学学术大会

目的：心肌缺血性疾病(ischemic heart diseases,IHD)是导致大量心肌细胞死亡,以及心肌不可逆修复的一类疾病,并最终导致患者死亡,因此成为全球范围致死率最高的疾病之一。迅速恢复冠状动脉血流,是目前临床治疗中的常用手段,一般为药物... 详细信息

目的：心肌缺血性疾病(ischemic heart diseases,IHD)是导致大量心肌细胞死亡,以及心肌不可逆修复的一类疾病,并最终导致患者死亡,因此成为全球范围致死率最高的疾病之一。迅速恢复冠状动脉血流,是目前临床治疗中的常用手段,一般为药物溶栓或直接冠状动脉介入治疗(PCI)。但血流再通常伴随着缺血再灌注损伤(ischemia and reperfusion injury,I/R injury)。

关键词： TRAIL 缺氧复氧巨噬细胞 ER stress NF-κB

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OCILRP2-Fc抑制小鼠骨髓来源的树突状细胞分化成熟

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中国免疫学杂志 2015年第7期31卷 917-921页

作者：柴立辉李伟华杨菲刘广超马远方吴素霞抗体药物河南省工程实验室河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室开封475004

目的:采用OCILRP2胞外段蛋白OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体,探讨OCILRP2对小鼠树突状细胞发育成熟的影响及其机制。方法:分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),荧光定量RT-PCR和流式细胞术分析OCILRP2在不成熟BMDC和LPS诱导的成熟BMDC... 详细信息

目的:采用OCILRP2胞外段蛋白OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体,探讨OCILRP2对小鼠树突状细胞发育成熟的影响及其机制。方法:分离培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),荧光定量RT-PCR和流式细胞术分析OCILRP2在不成熟BMDC和LPS诱导的成熟BMDC的表达差异;流式细胞术分析OCILRP2-Fc对BMDC细胞表面标志分子的表达以及对BMDC抗原摄取能力的影响;ELISA检测培养上清中细胞因子的浓度,分析OCILRP2-Fc对BMDC分泌炎性细胞因子的影响;Western blot检测转录因子NF-κB的活化,分析OCILRP2-Fc影响BMDC分化成熟的分子机制。结果:荧光定量RT-PCR和流式细胞术结果均表明LPS可以显著上调OCILRP2在BMDC的表达(P<0.05);与对照组相比,OCILRP2-Fc可以明显抑制MHCⅡ类分子及共刺激分子CD80在LPS诱导的成熟BMDC的表达;和成熟BMDC相比,OCILRP2-Fc组BMDC经LPS诱导24 h后仍然具有较强的抗原吞噬能力;而且,OCILRP2-Fc组BMDC培养上清中炎性细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α的浓度明显低于对照组(P<0.05)。Western blot结果表明OCILRP2-Fc抑制了LPS诱导的I-κB降解和NF-κB p65的磷酸化。结论:OCILRP2-Fc阻断OCILRP2受体信号,通过抑制LPS诱导的NF-κB活化影响小鼠BMDC分化成熟。提示OCILRP2受体在树突状细胞的分化成熟过程中具有促进作用。

关键词：破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2 树突状细胞脂多糖核因子κB

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致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

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中国病理生理杂志 2015年第9期31卷 1699-1703页

作者：娄强谢盼盼崔秀坤马远方胡延忠河南大学医学院医学与分子免疫学实验室抗体药物河南省工程实验室河南开封475004

目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳... 详细信息

目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b/K65R突变质粒的细胞株;Western blotting检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达;Western blotting及real-time PCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果:阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL-blast-HAHsf4b/K65R构建成功。K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达,但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论:pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。

关键词：热休克因子4b 晶状体上皮细胞热休克蛋白点突变

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双组分信号转导系统saeRS对表皮葡萄球菌生存能力的影响

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四川大学学报（医学版） 2015年第1期46卷 27-30页

作者：娄强王耀辉瞿涤马远方河南大学医学院河南省医学与分子免疫学实验室抗体药物河南省工程实验室开封475004 复旦大学上海医学院教育部/卫生部医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的研究不同浓度的葡萄糖对表皮葡萄球菌野生株、saeRS基因删除突变株及回复株生存能力的影响及机制。方法在BM培养基中添加不同浓度(7.0mmol/L、14mmol/L、28mmol/L、56mmol/L)的葡萄糖,分析3种表皮葡萄球菌的生存能力、生物膜形成能... 详细信息

目的研究不同浓度的葡萄糖对表皮葡萄球菌野生株、saeRS基因删除突变株及回复株生存能力的影响及机制。方法在BM培养基中添加不同浓度(7.0mmol/L、14mmol/L、28mmol/L、56mmol/L)的葡萄糖,分析3种表皮葡萄球菌的生存能力、生物膜形成能力、培养基的酸度及抵抗抗生素生存的能力。结果与表皮葡萄球菌野生株相比,葡萄糖能明显促进saeRS删除突变株的生存能力和生物膜形成能力,但能够明显降低其对抗生素(比如青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素)的抵抗能力;saeRS删除突变株和回复株在14mmol/L浓度时生存能力最强,在28mmol/L浓度时生物膜形成能力最强,而葡萄糖浓度对于野生株的生存能力及生物膜形成能力无显著影响。在添加14mmol/L葡萄糖时,saeRS删除突变株培养基(pH=8.07)的酸度比野生株(pH=7.0)明显降低。结论 SaeRS可能通过介导葡萄糖的利用影响了表皮葡萄球菌的生存能力;双组分信号转导系统saeRS影响抗生素如青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素对表皮葡萄球菌的杀菌作用。

关键词：葡萄糖代谢双组分信号转导系统saeRS 生物膜形成表皮葡萄球菌

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