为建立多药耐药相关蛋白2(MRP2)和P-糖蛋白(P-gp)的体外RNA干扰模型,应用化学合成的si RNA转染Hep G2细胞,并用实时PCR和Western blot检测m RNA和蛋白的表达变化,应用MRP2和P-gp底物罗丹明和甲氨蝶呤进行功能评价确定模型是否成功。si RNA筛选结果显示,MRP2 si RNA-3或P-gp si RNA-2能够显著地抑制MRP2或P-gp的m RNA表达,抑制率分别为68%和84%;MRP2 si RNA-3或P-gp si RNA-2(80 nmol·L-1)作用48 h能够明显地抑制MRP2或P-gp的蛋白表达,抑制率分别为62%和70%,同时不影响其他转运蛋白的表达;给予MRP2或P-gp底物甲氨蝶呤或罗丹明孵育,发现MRP2 si RNA-3或P-gp si RNA-2(80 nmol·L-1)作用48 h能够显著增加甲氨蝶呤或罗丹明的细胞内浓度,表明其外排受到抑制。以上结果表明利用化学合成的si RNA能够显著地抑制细胞MRP2和P-gp的表达和功能,提示细胞干扰模型建立成功。
暂无评论