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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：井潇吴纯启廖明阳王茜莎王全军广东药科大学中药学院军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心

目的:观察大鼠经LPS诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7天后肝损伤程度与胆汁淤积相关性研究。方法:将雄性SD大鼠按如下分为5组:空白对照组(Ctrl),LPS组(LPS),LPS+对乙酰氨基酚(LPS+APAP),何首乌组(AEP),LPS+何首乌组(LPS+AEP)。并按动... 详细信息

目的:观察大鼠经LPS诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7天后肝损伤程度与胆汁淤积相关性研究。方法:将雄性SD大鼠按如下分为5组:空白对照组(Ctrl),LPS组(LPS),LPS+对乙酰氨基酚(LPS+APAP),何首乌组(AEP),LPS+何首乌组(LPS+AEP)。并按动物体重,尾静脉注射给予LPS组、LPS+APAP组、LPS+AEP组4mg/kg LPS,2小时后,按组别分别灌胃给予LPS+APAP组625mg/kg对乙酰氨基酚,AEP组以及LPS+AEP组12g/kg(相当于临床给药剂量22倍)何首乌,每日一次,连续给药7天建立特异质肝损伤炎症模型。并分别取第2小时,第14小时,5天,8天四个时间点,观察体重变化,检测血生化肝功能相关指标同时收集胆汁,计算胆汁流速与密度并检测胆汁中主要成分变化。检查肝脏系数变化及肝脏组织病理学检查。同时对肝组织进行iTRAQ定量筛选,并结合生物信息学方法进行分析。结果:LPS+AEP组从第2小时到第8天和Ctrl组,AEP组相比体重明显下降,至第8天肝脏系数显著增加(P<0.05)。血清生化指标显示,LPS+AEP组ALT,AST水平无明显变化。第8天TBIL明显降低(P<0.05)而ALP升高(P<0.05),LPS+AEP组第8天可观察到胆汁密度和胆汁流速明显降低。对胆汁成分分析显示第8天TCHO升高,TBIL显著降低(P<0.05)。病理结果显示LPS+APAP组肝组织损伤严重,AEP组出现轻微肝细胞变性,而LPS+AEP组可见严重局灶坏死。结论:经LPS诱导的何首乌醇提液可明显损伤大鼠肝细胞并干扰胆汁分泌功能,改变大鼠胆汁成分引起相关指标的改变,生物信息学分析结果表明这些蛋白主要存在细胞膜与细胞中,参与了细胞组分的形成与代谢免疫等过程,提示其与胆汁淤积型肝损伤存在一定相关性。

关键词：何首乌醇提液胆汁淤积肝毒性生物信息学

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儿童药物安全性评价研究进展

儿童药物安全性评价研究进展

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中国毒理学会灾害与应急毒理学专业委员会第一次全国学术交流会

作者：井潇高杰吴纯启王茜莎王全军 510006广州广东药科大学中药学院 100850北京军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心 100850北京军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心 510006广州广东药科大学中药学院

儿童用药的安全性与风险评估已成为近年来药物研发与监管工作中的热点.目前针对儿童用药的临床前安全评价工作的缺失导致临床不合理用药问题突出,为儿童用药埋下了安全隐患,严重威胁了儿童群体的健康与生命安全.本文从儿童药物研发所面... 详细信息

儿童用药的安全性与风险评估已成为近年来药物研发与监管工作中的热点.目前针对儿童用药的临床前安全评价工作的缺失导致临床不合理用药问题突出,为儿童用药埋下了安全隐患,严重威胁了儿童群体的健康与生命安全.本文从儿童药物研发所面临的难题,儿童与成人的生理差别,特别是开展幼龄动物临床前安全评价实验的重要性与关注点等方面进行详细的分析说明,以期对中国儿童药物安全评价工作提供参考依据.

关键词：儿童药物安全性风险评估监管工作

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延胡索甲素与左旋延胡索乙素抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用研究

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药物评价研究 2016年第2期39卷 187-192页

作者：江维宁吴纯启陈瑛董延生王晓菲王全军江涛广东药学院中药学院广东广州510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850 广东药学院实验动物中心广东广州510006

目的观察并比较延胡索甲素(corydaline,Cor)与左旋延胡索乙素(l-tetrahydropalmatine,l-THP)抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、Cor组、l-THP组。连续递增sc吗啡9 d后,纳洛酮促瘾,制备吗啡依赖大鼠... 详细信息

目的观察并比较延胡索甲素(corydaline,Cor)与左旋延胡索乙素(l-tetrahydropalmatine,l-THP)抗吗啡躯体依赖和精神依赖的作用。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、Cor组、l-THP组。连续递增sc吗啡9 d后,纳洛酮促瘾,制备吗啡依赖大鼠催促戒断模型,促瘾前30 min ip Cor(40、80 mg/kg)或l-THP(5.0、10.0 mg/kg),观察大鼠戒断症状和体质量的降低;应用旷场实验,观察Cor(5、10 mg/kg)和l-THP(2.5、5.0 mg/kg)对吗啡诱导的大鼠自发活动的影响、对吗啡连续递增给药致大鼠行为敏化效应的影响,以及Cor(10、20、40 mg/kg)和l-THP(2.5、5.0、10.0 mg/kg)对大鼠自发活动的影响。结果 Cor(40、80 mg/kg)、l-THP(5.0 mg/kg)对吗啡催促戒断症状无显著改善作用,10 mg/kg l-THP显著改善大鼠戒断症状(P<0.05);Cor和l-THP对吗啡降低大鼠体质量效应有改善趋势,但差异不显著;Cor 40 mg/kg以下剂量、l-THP 10 mg/kg以下剂量对大鼠自发活动无显著影响;Cor(5、10 mg/kg)和l-THP(2.5、5.0 mg/kg)均可显著降低吗啡诱发的大鼠高活动性行为、行为敏化的形成(P<0.05、0.01)。结论 Cor和l-THP对吗啡所致的大鼠躯体依赖和精神依赖均有不同程度的调节作用,l-THP的起效剂量明显低于Cor。

关键词：延胡索甲素左旋延胡索乙素吗啡催促戒断旷场实验行为敏化

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何首乌醇提液经LPS诱导致大鼠肝损伤与胆汁淤积型肝损伤相关性研究

何首乌醇提液经LPS诱导致大鼠肝损伤与胆汁淤积型肝损伤相关性研究

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中国毒理学会第五次中青年科技论坛

作者：井潇吴纯启韩刚谢丽华江维宁王茜莎王全军军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850 广东药科大学中药学院广州510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850 广东药科大学中药学院广州510006

目的：观察大鼠经LPS诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7天后肝损伤程度,探讨其与胆汁淤积型肝损伤的相关性。方法：将雄性SD大鼠按如下分为5组：空白对照组(Ctrl),LPS组(LPS),LPS+对乙酰氨基酚(LPS+APAP),何首乌组(AEP),LPS+何首乌组(LP... 详细信息

目的：观察大鼠经LPS诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7天后肝损伤程度,探讨其与胆汁淤积型肝损伤的相关性。方法：将雄性SD大鼠按如下分为5组：空白对照组(Ctrl),LPS组(LPS),LPS+对乙酰氨基酚(LPS+APAP),何首乌组(AEP),LPS+何首乌组(LPS+AEP)。并按动物体重,尾静脉注射给予LPS组、LPS+APAP组、LPS+AEP组4mg/kgLPS,2小时后,按组别分别灌胃给予LPS+APAP组625mg/kg对乙酰氨基酚,AEP组以及LPS+AEP组12g/kg(相当于临床给药剂量22倍)何首乌,每日一次,连续给药7天建立特异质肝损伤炎症模型。并分别取第2小时,第14小时,5天,8天四个时间点,观察体重变化,检测血生化肝功能相关指标同时收集胆汁,计算胆汁流速与密度并检测胆汁中主要成分变化。检查肝脏系数变化及肝脏组织病理学检查。同时对肝组织进行iTRAQ定量筛选,并结合生物信息学方法进行分析。

关键词：何首乌醇提液胆汁淤积肝毒性生物信息学

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HPLC法测定黄体酮纳米晶体胶囊的溶出度

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国际药学研究杂志 2015年第3期42卷 404-408,412页

作者：郑敏杰张晓燕孙建绪郑爱萍军事医学科学院毒物药物研究所药物制剂室北京100850 抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850 首都医科大学北京100069

目的建立黄体酮纳米晶体胶囊的溶出度考察方法。方法采用《中国药典》2010年版溶出度测定第一法,以900 ml浓度为0.25%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质,转速75 r/min,溶出时间为45 min。使用HPLC法对溶出样品检测,采用Agilent TC C18色谱柱... 详细信息

目的建立黄体酮纳米晶体胶囊的溶出度考察方法。方法采用《中国药典》2010年版溶出度测定第一法,以900 ml浓度为0.25%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质,转速75 r/min,溶出时间为45 min。使用HPLC法对溶出样品检测,采用Agilent TC C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：甲醇-乙腈-水（35∶40∶25,V/V/V）;流速：1.0 ml/min;检测波长：241 nm;柱温：25℃;进样量：20μl。结果本方法平均回收率为100.02%（n=15）;溶液在24 h保持稳定（RSD=0.92%,n=8）;在2.78-66.7μg/ml范围内线性关系良好（r=1,n=6）。结论方法简便、灵敏、准确、专属性强,可用于黄体酮纳米晶体胶囊溶出度的检测。

关键词：黄体酮纳米晶体胶囊高效液相色谱法溶出度

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化产物的培养提取及制备

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食品科学 2015年第3期36卷 132-136页

作者：徐华吴弼东郭磊陈佳林妮妮谢剑炜军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

以禾谷镰刀菌Fusarium graminearum大型分生孢子定量接种大米培养物,制备毒素粗提液,采用硅胶柱一步洗脱分离、分段收集可同时获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和乙酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇(acetyldeoxynivalenol,AcDON),采... 详细信息

以禾谷镰刀菌Fusarium graminearum大型分生孢子定量接种大米培养物,制备毒素粗提液,采用硅胶柱一步洗脱分离、分段收集可同时获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和乙酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇(acetyldeoxynivalenol,AcDON),采用一步结晶法即可分别制备获得毒素纯品,并经红外光谱法、液相色谱-质谱联用技术及核磁共振氢谱等分析确证,液相色谱分析表明两种毒素纯度均大于98%。该培养提取及分离制备方法改变了常规多步骤繁琐过程,提供了一种切实有效的、大量制备纯化DON及乙酰化DON毒素的简便方法。

关键词：禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇乙酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇培养制备

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LPS诱导何首乌醇提液对大鼠肝脏CYP450 mRNA及蛋白的影响

LPS诱导何首乌醇提液对大鼠肝脏CYP450 mRNA及蛋白的影响

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中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会

作者：谢丽华樊星吴纯启董延生王茜莎王全军广东药学院军事医学科医学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心总后卫生部药品仪器检验所

目的观察何首乌醇提液经革兰氏阴性菌外膜成分脂多糖(LPS)诱导,对大鼠肝脏细胞色素CYPlA2、CYP2El、CYP3A1主要亚型基因及蛋白表达的影响,从药物代谢生物活性的的角度探讨其肝损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠100只,分为6组:空白对照组,... 详细信息

目的观察何首乌醇提液经革兰氏阴性菌外膜成分脂多糖(LPS)诱导,对大鼠肝脏细胞色素CYPlA2、CYP2El、CYP3A1主要亚型基因及蛋白表达的影响,从药物代谢生物活性的的角度探讨其肝损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠100只,分为6组:空白对照组,LPS组,对乙酰氨基酚组,LPS+对乙酰氨基酚组,何首乌组和LPS+何首乌组。iv给予体重4mg/kg LPS,2h后,按组别分别灌胃给予625mg/kg对乙酰氨基酚和6g/kg何首乌,每日一次,连续给药7d。每天观察大鼠体重变化,分别在给药后2h、14h、5d和8d对各个剂量组大鼠腹主动脉采血,检测肝功能生化指标;解剖,记录肝重;HE染色组织病理学检查;提取肝脏蛋白,应用Western-blotting法检测CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1蛋白的表达情况,RT-PCR法检测大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1、CYP3A mRNA的表达情况。结果与空白对照组相比,第2h和14h时,LPS组、LPS+APAP组和LPS+PMT组ALT、AST和ALP显著升高;组织病理学检查发现,大鼠尾静脉注射LPS 2h和14h后,LPS组、LPS+APAP组和LPS+PMT组肝细胞灶状坏死,伴炎细胞浸润,给药后第8天,LPS组组织病理学检查正常,但LPS+PMT组可见显著肝细胞变性,局部慢性炎性灶。Western-blotting法检测发现,何首乌醇提液能显著降低大鼠肝脏CYP1A2蛋白的表达,而对CYP2E1和CYP3A1蛋白表达没有显著影响,RT-PCR结果发现能显著降低大鼠肝脏CYP1A2 mRNA的表达,升高CYP3A1 mRNA的表达,而对CYP2E1 mRNA表达没有显著影响。结论经LPS诱导,何首乌醇提液经口对SD大鼠产生明显的肝脏毒性,其毒性的发生及LPS诱发的免疫作用与抑制CYP1A2基因和抑制其蛋白表达有关,也与CYP3A1mRNA的高表达有关。

关键词：何首乌醇提液药肝模型 LPS CYP450 作用机制

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LPS诱导何首乌致大鼠肝损伤对肠道菌群的影响

LPS诱导何首乌致大鼠肝损伤对肠道菌群的影响

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：邓红吴纯启廖明阳江涛王全军广东药科大学中药学院军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心广东药科大学实验动物中心

目的:基于前期实验建立的脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导何首乌(Polygonum multiflorumThunb.,PMT)乙醇提取物致SD大鼠肝损伤的肝毒性模型,探索其对肠道菌群的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分成空白对照(Ctrl)组、LPS组、LPS+对... 详细信息

目的:基于前期实验建立的脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)诱导何首乌(Polygonum multiflorumThunb.,PMT)乙醇提取物致SD大鼠肝损伤的肝毒性模型,探索其对肠道菌群的影响。方法:120只雄性SD大鼠随机分成空白对照(Ctrl)组、LPS组、LPS+对乙酰氨基酚(APAP)组、PMT组和LPS+PMT组5个组别。除Ctrol组和PMT组,其他各组大鼠尾静脉给予4mg/Kg LPS造模。2h后,各组相应每天一次灌胃给药625mg/Kg APAP和12g/KgPMT,连续给药7d,且每天观察记录大鼠体重变化。期间,取第2h、14h、5d和8d 4个时间点,对大鼠进行麻醉采血,检测肝功能生化指标谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性;取肝脏并记录重量;HE染色观察第8天各组大鼠肝脏组织病理学变化;试剂盒法检测血清中LPS的量;取大鼠新鲜粪便,对其中肠道菌群进行16S rRNA扩增子测序检测菌群多样性和丰度。结果:第2h和14h时,LPS组、LPS+APAP组和LPS+PMT组与Ctrl组比较,ALT和AST活性显著升高(P<0.05);肝脏组织病理切片发现,第8d时,与Ctrl组比较,LPS组可见少量微小肉芽肿,而LPS+PMT组肝细胞出现轻度变性和微小肉芽肿增多;第8天,与Ctrol组比较,LPS组血清中含LPS的量无显著差异(P>0.05),LPS+PMT组血清中含LPS的量显著升高(P<0.05);16S rRNA扩增子测序检测发现,第8d时,LPS+PMT组多样性指数香浓-威纳指数(Shannon-Wienerindex)略高于Ctrl组;第8天时,在门水平上,LPS+PMT组较Ctrl组厚壁菌门数减少,拟杆菌门数增加,可见疣微菌门;在科水平上,LPS+PMT组较Ctrl组普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)数减少,肠球菌科(Enterococcaceae)、疣微菌科(Ruminococcaceae)、乳杆菌科数(Lachnospiracea e)增加。结论:LPS可诱导PMT醇提液致大鼠发生肝毒性,且这种肝毒性可影响大鼠肠道菌群的多样性和丰度。

关键词：脂多糖(LPS) 何首乌肝损伤肠道菌群

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扑热息痛致BRL-3A细胞和大鼠原代肝细胞损伤作用比较研究

扑热息痛致BRL-3A细胞和大鼠原代肝细胞损伤作用比较研究

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：李曼吴纯启王茜莎王全军广东药学院药科学院军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院)国家北京药物安全评价研究中心

目的:建立大鼠原代肝细胞提取鉴定体系,比较扑热息痛对大鼠原代肝细胞和永生化细胞BRL-3A的毒性。方法:采用胶原酶原位两步灌流法提取大鼠原代肝细胞,并通过PAS糖原染色进行鉴定;CCK8法测定扑热息痛(APAP)对大鼠原代肝细胞的半数抑制浓... 详细信息

目的:建立大鼠原代肝细胞提取鉴定体系,比较扑热息痛对大鼠原代肝细胞和永生化细胞BRL-3A的毒性。方法:采用胶原酶原位两步灌流法提取大鼠原代肝细胞,并通过PAS糖原染色进行鉴定;CCK8法测定扑热息痛(APAP)对大鼠原代肝细胞的半数抑制浓度;通过光学显微镜、HE染色来观察APAP对大鼠原代肝细胞及BRL-3A细胞的损伤情况,同时测定药物作用之后细胞上清AST、ALT、LDH、ALP、ALB、BUN、TP、GLU 8项生化指标的变化。结果:新鲜提取肝细胞呈双核结构,PAS阳性,细胞活率在80%-95%;接种密度6*104个/cm2,培养液深度<2mm时最适合生长,接种3-5天后进入对数生长期;APAP作用大鼠原代肝细胞24h的IC50为18.03mmol/L,95%CI=(17.28,18.81)mm0l/L,作用BRL-3A的IC50为20.05mmol/L,95%CI=(18.99,21.17)mmol/L,对BRL-3A的HE染色结果显示低浓度组细胞胞核圆形、卵圆形,胞浆宽窄均一,可见分裂核;高浓度组细胞散在可见弥漫分布,细胞明显淡染,结构不清,细胞核几乎不可见。随着药物剂量的增加,与对照组相比,大鼠原代肝细胞AST和GLU所有浓度组以及ALT的15mmol/L和20mmol/L组显著性升高(P<0.01),但BRL-3A细胞各剂量组的GLU、AST和ALT并未发生显著改变。结论:与永生化细胞BRL-3A相比,大鼠原代肝细胞更能体现药物的肝脏毒性作用,但其体外培养存活时间较短;BRL-3A细胞缺少肝脏重要酶类,增加永生化细胞BRL-3A肝脏酶类是提升BRL-3A细胞作为肝脏毒性筛选模型的更好手段之一。

关键词：大鼠原代肝细胞原代培养 BRL-3A细胞扑热息痛肝毒性

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延胡索甲素和左旋延胡索乙素抗吗啡依赖的作用研究

延胡索甲素和左旋延胡索乙素抗吗啡依赖的作用研究

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中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会

作者：江维宁陈瑛井潇谢丽华江涛王晓菲王全军广东药学院中药学院军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心广东药学院实验动物中心

目的:观察和比较中药延胡索的有效成分延胡索甲素与左旋延胡索乙素(1-tetrahydropalmatine,1-THP)对吗啡躯体依赖和精神依赖的治疗作用。方法:吗啡连续递增给药九天后,纳洛酮促瘾前30 min给予不同药物处理,观察中药单体对戒断症状和体... 详细信息

目的:观察和比较中药延胡索的有效成分延胡索甲素与左旋延胡索乙素(1-tetrahydropalmatine,1-THP)对吗啡躯体依赖和精神依赖的治疗作用。方法:吗啡连续递增给药九天后,纳洛酮促瘾前30 min给予不同药物处理,观察中药单体对戒断症状和体重的影响;采用旷场实验,观察药物预处理对吗啡急性致大鼠自发活动增强的影响,以及对吗啡连续递增给药致大鼠行为敏化效应的影响;应用条件位置偏爱(conditioned place preference test,CPP)模型,观察中药单体对吗啡依赖大鼠CPP效应形成、表达和消退的影响。催促戒断动物模型用戒断症状评分,旷场实验和行为敏化动物模型用大鼠自发活动距离、CPP动物模型用CPP偏爱评分来表示。结果:(1)延胡索甲素(40、80mg/kg)对吗啡催促戒断症状无显著降低,而1-THP(5、10mg/kg)能剂量依赖性降低大鼠戒断症状,两者对纳洛酮戒断所致吗啡降低大鼠体重效应逆转趋势效应不明显。(2)延胡索甲素在40mg/kg以下和1-THP在10mg/kg以下对大鼠60min内自发活动无显著性影响。(3)延胡索甲素(5、10mg/kg)和1-THP(2.5、5mg/kg)均可显著降低吗啡诱发的大鼠高活动性行为。(4)延胡索甲素(5、10mg/kg)和1-THP(2.5、5mg/kg)能显著降低吗啡诱发的大鼠行为敏化行为的形成。(5)延胡索甲素(5mg/kg)和1-THP(1.25、2.5、5mg/kg)能显著降低吗啡致大鼠的CPP效应的形成(6)延胡索甲素(5mg/kg)和1-THP(2.5mg/kg)能显著降低吗啡致大鼠的CPP效应的表达。(7)延胡索甲素(2.5、5mg/kg)和1-THP(1.25、2.5mg/kg)对吗啡致大鼠的CPP效应的消退与吗啡模型组相比呈剂量下降趋势。(8)5mg/kg剂量下的延胡索甲素和1-THP无自身CPP效应。结论:延胡索甲素和1-THP对吗啡依赖所致的大鼠躯体依赖和精神依赖均有不同程度的调节作用;实验剂量下两中药单体无精神依赖效应;1-THP的起效剂量明显低于延胡索甲素。

关键词：延胡索甲素左旋延胡索乙素吗啡催促戒断旷场实验行为敏化条件位置偏爱

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