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生命科学 2016年第11期28卷 1321-1327页

作者：盛宇王春玉赵越中国医科大学沈阳110122 中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室沈阳110122

雄激素受体(androgen receptor,AR)是核受体超家族中的成员,主要以雄激素依赖的方式诱导下游靶基因转录。在此过程中,AR招募辅调节因子参与调控下游靶基因转录,从而发挥其生物学功能。近年研究证实,AR在肝细胞肝癌(hepatocellular carci... 详细信息

雄激素受体(androgen receptor,AR)是核受体超家族中的成员,主要以雄激素依赖的方式诱导下游靶基因转录。在此过程中,AR招募辅调节因子参与调控下游靶基因转录,从而发挥其生物学功能。近年研究证实,AR在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展中发挥重要作用。一方面,AR介导的下游靶基因(TGF-β1、VEGF、CCRK等)的异常表达影响HCC细胞的生长、增殖、血管形成等进程。乙肝病毒HBV X蛋白通过激活c-Src激酶等途径上调AR的转录活性,从而促进HCC的发展。另一方面,还有研究证实,AR可抑制HCC细胞的转移。现主要综述AR介导的基因转录调控在HCC中作用的分子机制,这将为HCC的早期发现及治疗提供理论依据和新的思路。

关键词：雄激素受体肝细胞肝癌基因转录调控肿瘤生长肿瘤转移

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肿瘤浸润转移与水通道蛋白1的关系研究进展

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中华实验外科杂志 2013年第12期30卷 2764-2765页

作者：张斌马勇杰谷峰天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室 300060 研究所肿瘤细胞生物学实验室国家肿瘤临床医学研究中心乳腺癌防治教育部重点实验室天津市“肿瘤防治”重点实验室

水通道蛋白（AQPs）广泛分布于人体各组织中,是实现跨细胞膜快速水转运的重要物质基础,在细胞代谢、增殖以及实现各种器官组织生理功能的过程中发挥重要作用.目前已在哺乳动物组织中鉴定出13种水通道蛋白（AQP0～AQP12）.AQP0 ～2、AQP4... 详细信息

水通道蛋白（AQPs）广泛分布于人体各组织中,是实现跨细胞膜快速水转运的重要物质基础,在细胞代谢、增殖以及实现各种器官组织生理功能的过程中发挥重要作用.目前已在哺乳动物组织中鉴定出13种水通道蛋白（AQP0～AQP12）.AQP0 ～2、AQP4～6和AQP8主要是水选择性通道,AQP3、AQP7、AQP9、AQP10和AQP12除对水有较高通透性外,还具有转运甘油和其他小分子溶质的功能[1].AQP1是最早发现的水通道蛋白[2],其基因定位于人染色体7p15→p14[3],质膜中以四聚体形式存在,在4个单体的中心部分含有独立的孔道,孔道中有1个带正电的区域会排斥带正电的离子,避免水合质子的通过.最近研究证实,在恶性程度较高的肿瘤组织中均有AQP1的异常表达[4],在肿瘤的转移过程中也发挥着重要作用[5].

关键词：水通道蛋白1 肿瘤浸润转移动物组织小分子溶质物质基础细胞代谢生理功能器官组织

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N端标记GFP-TFF3蛋白在非洲绿猴肾成纤维细胞表达和定位

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解剖科学进展 2013年第4期19卷 351-353,357页

作者：毛琪朱亚勤中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室细胞病理生物学研究室辽宁沈阳110001 中国医科大学心血管研究所辽宁沈阳110001

目的构建pEGFP-N1-TFF3融合蛋白表达载体,并检测其在非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞)内的表达和定位。方法提取HT29细胞的mRNA,反转录为cDNA;以此为模板PCR扩增hTFF3(286bp-462bp)基因;通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点将hTFF3基因定向插入... 详细信息

目的构建pEGFP-N1-TFF3融合蛋白表达载体,并检测其在非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞)内的表达和定位。方法提取HT29细胞的mRNA,反转录为cDNA;以此为模板PCR扩增hTFF3(286bp-462bp)基因;通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点将hTFF3基因定向插入真核表达载体pEGFP-N1中;将构建的重组质粒测序成功后,转染至人肾细胞(HEK293细胞)中,荧光显微镜观察GFP-TFF3融合蛋白的表达,并提取蛋白进行Western Blot检测;利用激光扫描共聚焦显微镜观察GFP-TFF3融合蛋白在COS7细胞内的定位情况。结果酶切及测序结果证明hTFF3基因成功克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,Western Blot检测结果显示其融合蛋白分子量约为34kDa,激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示GFP-TFF3融合蛋白在COS7细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功构建了pEGFP-N1-TFF3真核表达载体,GFP-TFF3蛋白定位于COS7的细胞核和细胞质中。

关键词： hTFF3 融合蛋白非洲绿猴肾成纤维细胞(COS 7细胞) HEK293细胞 Ht29细胞

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DNA损伤修复因子(ARAP1)参与调控雄激素受体AR介导的基因转录及其表观遗传学机制

DNA损伤修复因子(ARAP1)参与调控雄激素受体AR介导的基因转录及其...

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中国细胞生物学学会2013年全国学术大会

作者：王春玉周婷婷孙洪邈邹仁龙孙士莹王胜利佟昌慈吴怡罗昊林琳高鹏焦娇赵越中国医科大学基础医学院卫生部细胞生物学重点实验室医学细胞生物学教育部重点实验室染色质生物学研究室沈阳110001

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microRNA-223对糖基化终产物诱导人脂肪间充质干细胞凋亡和氧化应激影响的体外研究

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中国动脉硬化杂志 2017年第1期25卷 1-6页

作者：王哲张殿宝杨向红中国医科大学盛京医院病理科辽宁省沈阳市110004 中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室干细胞与再生医学研究室辽宁省沈阳市110001

目的观察microRNA-223(miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(h ADSC)凋亡和氧化应激的影响。方法采用酶消化法分离培养h ADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行... 详细信息

目的观察microRNA-223(miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(h ADSC)凋亡和氧化应激的影响。方法采用酶消化法分离培养h ADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行检测。将h ADSC分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)作用组、miR-223模拟物转染组、miR-223模拟物转染+AGE-BSA组、miR-223抑制物转染组和miR-223抑制物转染+AGE-BSA组。应用CCK-8法和TUNEL染色检测各组细胞存活率和凋亡率,Western blot检测Cleaved Caspase3蛋白表达水平,应用双氯荧光素(DCFH-DA)试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)含量。结果流式细胞术检测结果表明,原代培养的h ADSC高表达CD14、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和HLADR。CCK-8法、TUNEL染色、Western blot和DCFH-DA法检测结果表明,与BSA对照组相比,AGE-BSA作用组h ADSC凋亡率、miR-223表达水平、Cleaved Caspase3蛋白表达水平、ROS生成显著升高,而细胞存活率下降(P<0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223模拟物转染能够进一步上调AGE-BSA引起的h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,下调AGE-BSA引起的h ADSC存活率减少(P<0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223抑制物转染能够抑制h ADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,拮抗AGEBSA引起的h ADSC存活率减少(P<0.05)。结论 miR-223高表达能够促进AGE-BSA引起的h ADSC细胞凋亡和ROS生成,其可能作为调控h ADSC促进糖尿病创伤愈合的新靶点。

关键词：糖基化终产物人脂肪间充质干细胞 microRNA-223 凋亡氧化应激

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骨髓、羊膜和脂肪来源的间充质干细胞治疗皮肤创伤效果的比较

骨髓、羊膜和脂肪来源的间充质干细胞治疗皮肤创伤效果的比较

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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会

作者：刘晓玉庞希宁教育部医学细胞生物学重点实验室卫生部细胞生物学重点实验室中国医科大学干细胞与再生医学研究室辽宁沈阳110001

目的：比较入骨髓间充质干细胞(hBMSC)、羊膜间充质干细胞(hAMSC)和脂肪间充质干细胞(hADSC)皮下移植对小鼠皮肤损伤模型愈合的促进作用,为临床皮肤损伤后功能性修复提供更有效的治疗方法.方法：体外培养扩增hBMSC,hAMSC,hADSC,取36只... 详细信息

目的：比较入骨髓间充质干细胞(hBMSC)、羊膜间充质干细胞(hAMSC)和脂肪间充质干细胞(hADSC)皮下移植对小鼠皮肤损伤模型愈合的促进作用,为临床皮肤损伤后功能性修复提供更有效的治疗方法.方法：体外培养扩增hBMSC,hAMSC,hADSC,取36只小鼠制作皮肤损伤模型,并随机分为hBMSC移植组,hAMSC移植组,hADSC移植组,和盐水移植组.分别于伤后3,7,10,14天采用创面大体观察、组织学检查方法观察创面愈合情况.体外实验通过transwell小室将hBMSC,hAMSC,hADSC分别与人皮肤成纤维细胞(hFB)共培养,检测各组成纤维细胞的增殖,迁移,趋化,胶原合成,和生长因子VEGF,KGF,bFGF,TGF-β的分泌情况,探讨其促进创面愈合的机制.结果：创伤后3d开始,各组创面逐渐缩小,脂肪间充质干细胞治疗组最为明显,差异有显著性意义(P＜0.05),组织学检查显示,脂肪间充质干细胞治疗组重上皮化明显.体外实验,各组成纤维细胞增殖无显著性差异,脂肪间充质干细胞组迁移,趋化,胶原合成,生长因子分泌明显优于其它组,差异有显著性意义(P＜0.05).结论：脂肪间充质干细胞是治疗皮肤损伤更理想的种子细胞.

关键词：间充质干细胞表皮成纤维细胞皮肤损伤修复

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赖氨酸去甲基化酶2A全长及截短重组质粒构建及其在细胞中的定位

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现代肿瘤医学 2020年第17期28卷 2922-2926页

作者：羊帆赵越王春玉中国医科大学生命科学学院卫生部细胞生物学重点实验室教育部医学细胞生物学重点实验室染色质生物学研究室辽宁沈阳110122

目的:构建赖氨酸去甲基化酶2A(lysine demethylase 2A,KDM2A)全长及截短重组表达质粒,并初步探究其在前列腺癌CWR22Rv1细胞中的定位及机制。方法:根据KDM2A的mRNA编码序列及蛋白结构域特点设计合成KDM2A全长及截短表达序列的引物,以含有... 详细信息

目的:构建赖氨酸去甲基化酶2A(lysine demethylase 2A,KDM2A)全长及截短重组表达质粒,并初步探究其在前列腺癌CWR22Rv1细胞中的定位及机制。方法:根据KDM2A的mRNA编码序列及蛋白结构域特点设计合成KDM2A全长及截短表达序列的引物,以含有KDM2A全长编码序列的质粒作为模板,通过PCR扩增目的片段,再用限制性内切酶NotⅠ和XbaⅠ进行双酶切,连接转化后,挑取单克隆菌落扩增,并提取质粒进行酶切鉴定及测序比对。将序列比对正确的KDM2A全长及截短重组质粒转染到HEK293细胞中,进行Western Blot实验检测KDM2A全长及截短蛋白在HEK293细胞中的表达。将构建好的KDM2A全长及截短重组质粒转染到前列腺癌CWR22Rv1细胞中,进行免疫荧光染色检测外源的KDM2A全长及截短蛋白在细胞中的定位。结果:构建了KDM2A全长及截短重组表达质粒;重组质粒能够在细胞中表达;KDM2A全长蛋白主要分布在细胞核,少量分布在细胞质;C1截短蛋白分布在细胞核;N1、C2截短蛋白分布在细胞质。结论:KDM2A蛋白的核定位序列位于564-888位氨基酸之间,本实验为后续深入研究KDM2A在肿瘤中的作用及分子机制提供了实验基础。

关键词： KDM2A 去甲基化酶组蛋白修饰质粒构建核定位信号

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磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的研究

磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细...

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王瑞庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs...

目的：对磁纳米颗粒作为基因载体重编程人脂肪间充质干细胞(hADSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性分析.方法：将磁纳米颗粒作为基因载体连接 REST-siRNA、SHH-siRNA 体外转染人脂肪间充质干细胞,用普鲁士蓝染色法鉴定磁纳米颗粒对hADSCs 的标记;用台盼蓝染色法检测不同浓度的磁纳米颗粒对hADSCs 活性的影响;用荧光显微镜观察磁纳米颗粒作为基因载体时的转染效率;分别用 Real-time PCR 和 Western-blot 检测转染后 REST 、SHH 的表达;用 Real-time PCR 检测hADSCs 共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后胰岛分化相关基因的表达情况.结果：磁性纳米颗粒可以作为基因载体转染细胞;用磁性纳米颗粒作为基因载体后,未标记组活细胞比率为 97.12％,铁浓度为 6 和 8mg/L 活细胞比率分别为96.28％和 96.21％,与未标记组无差异;铁浓度为 10 和 12mg/L 活细胞比率分别为 79.03％和 70.23％,显著低于未标记组;荧光显微镜观察转染效率为71％;磁纳米颗粒作为基因载体时REST RNA表达量为(0.46±0.04),蛋白水平表达量为(0.501±0.006);SHH RNA 表达量为(0.53±0.05),蛋白水平表达量为(0.523±0.004);磁纳米颗粒作为基因载体共转染NRSF-siRNA 和SHH-siRNA 后,通过Real-time PCR 相对定量法检测胰岛分化相关基因的表达,结果显示,insulin、pdx1、pax4、ngn3 的表达都呈不同程度的升高.

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人羊膜上皮细胞旁分泌作用促进成骨细胞迁移及分化的研究

人羊膜上皮细胞旁分泌作用促进成骨细胞迁移及分化的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：王贵玲庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊...

目的：探究羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对成骨细胞迁移和分化的旁分泌作用.方法：从足月剖宫产胎盘上剥离羊膜组织,用胰蛋白酶消化法提取原代羊膜上皮细胞,流式细胞仪分析细胞表型,取P1-P3 用于后续试验.待羊膜上皮细胞融合度达90％时,换新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,培养24h 后收集培养液,离心后取上清分装冻存,与新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基1：1 混合后作为条件培养基(conditioned medium,CM),即50％CM.应用孔径为8.0um 的24 孔板transwell 检测细胞迁移,实验组下室放600ml50％HAEC-CM,对照组下室放600ml 新鲜DMEM/F12(10％FBS)培养基,上室接种100ul 无血清DMEM/F12 的人成骨细胞hOB1.19 悬液,接种细胞数为1x105,培养2h 后HE 染色,显微镜下拍照计数.

关键词：

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PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞的研究

PEI-Fe3O4纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞的研究

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第十届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术会议、第三届中欧创面修复学术会议、中国医师协会创伤外科医师分会创面修复医师专业委员会会议

作者：张殿宝李莹苏航王竟施萍庞希宁中国医科大学教育部医学细胞生物学重点实验室暨卫生部细胞生物学重点实验室干细胞与再生医学研究室沈阳 110122

目的：人羊膜上皮细胞是人胎盘羊膜组织靠近胎儿侧的单层上皮细胞,具有多向分化潜能,同时具有免疫原性低、来源丰富和伦理争议少等优点,在干细胞与再生医学领域中拥有潜在的应用前景。在羊膜上皮细胞的基础研究与临床试验中,需要对细胞...

目的：人羊膜上皮细胞是人胎盘羊膜组织靠近胎儿侧的单层上皮细胞,具有多向分化潜能,同时具有免疫原性低、来源丰富和伦理争议少等优点,在干细胞与再生医学领域中拥有潜在的应用前景。在羊膜上皮细胞的基础研究与临床试验中,需要对细胞在植入体内后的存活、迁移和分化等进行活体动态监测。本研究探索使用PEI-Fe3O4 纳米颗粒标记人羊膜上皮细胞,以期为人羊膜上皮细胞的体内示踪提供新的方法和思路。方法：原代培养人羊膜上皮细胞,本研究经中国医科大学第一临床学院伦理委员会审批;使用透射电子显微镜和动态光散射表征PEI-Fe3O4 纳米颗粒;使用纳米颗粒标记原代培养的人羊膜上皮细胞,应用普鲁士蓝染色评价其标记效率;使用台盼蓝染色法和CCK-8 法检测细胞存活率和细胞毒性。结果：PEI-Fe3O4 纳米颗粒呈紧凑的球形,平均粒径为14 nm,水动力学半径为18 nm,zeta电位为+35 mV;浓度大于20 μg/mL 的纳米颗粒能够有效标记人羊膜上皮细胞,镜下可见细胞内着蓝色的纳米颗粒,细胞摄取的纳米颗粒随着浓度的增大而增多,具有浓度依赖性;本研究通过检测纳米颗粒对细胞存活率的影响,评价纳米颗粒标记羊膜上皮细胞的安全性,浓度大于50 μg/mL 的纳米颗粒能够显著降低细胞的存活率,细胞毒性显著高于对照组。结论：PEI-Fe3O4 纳米颗粒可用于标记人羊膜上皮细胞,并且在其工作浓度下未表现出显著的细胞毒性。

关键词：

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