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改进后的大鼠颈部心脏移植模型

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 503-504页

作者：甄忠广明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

成功的大鼠同种异位心脏移植模型要求操作简便、手术创伤小、受者长期存活率高.因此,我们对传统的Heron[1]大鼠颈部心脏移植模型进行改进,现将改进后的术式、操作体会及优点报告如下。

关键词：大鼠颈部心脏移植模型心肌结构炎性细胞浸润

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胰、肾联合移植术式的选择

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中华器官移植杂志 2005年第3期26卷 186-188页

作者：明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

由于胰腺外分泌液的引流方式和移植胰腺排斥反应难以诊断的特殊性,胰、肾联合移植的总数和效果都远远落后于其它器官移植.直到最近十年,胰、肾联合移植的手术方式才趋向定型,成为治疗1型糖尿病合并尿毒症的最佳选择.在我国,胰、肾联合... 详细信息

由于胰腺外分泌液的引流方式和移植胰腺排斥反应难以诊断的特殊性,胰、肾联合移植的总数和效果都远远落后于其它器官移植.直到最近十年,胰、肾联合移植的手术方式才趋向定型,成为治疗1型糖尿病合并尿毒症的最佳选择.在我国,胰、肾联合移植的经验积累十分有限,手术方式尚无统一标准,多数中心仅仅实施单一术式.因此,本文结合我们的经验,对胰腺与胰、肾联合移植手术选择的有关问适题作一综述.

关键词：联合移植术式诊断治疗手术方式引流方式胰腺外分泌总数定型趋向

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同种异体异位气管移植物排斥反应的动态变化及SUMO1表达

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华中科技大学学报（医学版） 2014年第5期43卷 489-493页

作者：何莹马俊磊宫念樵赵波华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部器官移植重点实验室器官移植教育部重点实验室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院胸外科武汉430030

目的探讨同种异体异位气管移植物排斥反应的动态变化,并分析小泛素相关修饰物1 （SUMO1）在此过程中的表达特点.方法在小鼠背部异位气管移植模型中,分别建立同系移植组（C57 BL/6-C57 BL/6）和同种异体移植组（BALB/c-C57 BL/6）.在... 详细信息

目的探讨同种异体异位气管移植物排斥反应的动态变化,并分析小泛素相关修饰物1 （SUMO1）在此过程中的表达特点.方法在小鼠背部异位气管移植模型中,分别建立同系移植组（C57 BL/6-C57 BL/6）和同种异体移植组（BALB/c-C57 BL/6）.在术后第7、14、30天,每组取6只动物获取移植物,动态检测排斥反应病理学变化、移植气管管腔阻塞率、有核细胞计数和SUMO1阳性细胞表达及计数.结果同系移植组气管仅有轻微损伤并于术后14d修复;同种异体移植组术后7d气道上皮严重损伤伴大量的单核细胞浸润,术后14 d上皮坏死伴纤维增生,术后30 d,上皮细胞完全消失,管腔填塞.同系移植物术后管腔阻塞率为2.8％～4.3％,同种异体移植物在3个时间点分别为（3.5±0.4）％、（29.8±3.5）％和（92.5±3.1）％.同系移植组SUMO1主要在黏膜上皮细胞中表达;同种异体移植组SUMO1第7.天在黏膜下层浸润的淋巴细胞和巨噬细胞中表达,第14天在浸润的单核细胞和增生的纤维母细胞中高表达,第30天表达更为明显.术后第7天,同系移植组和同种异体移植组每组织切面有核细胞计数分别为（294.5±83.1）、（299.5±64.2）,差异无统计学意义,SUMO1阳性细胞数分别为（151.8±59.2）、（237.3±57.2）,差异有统计学意义（P＜0.05）;术后第14天,同系移植组和同种异体移植组有核细胞计数分别为（617.3±70.1）、（774.6±197.4）,差异无统计学意义,SUMO1阳性细胞数分别为（220.0±33.9）、（489.0±145.3）,差异有统计学意义（P＜0.05）;术后第30天,同系移植组和同种异体移植组有核细胞计数分别为（276.3±119.0）、（875.0±113.6）,差异有统计学意义（P＜0.05）,SU-MO1阳性细胞数分别为（105.6±92.1）、（781.0±73.5）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论小鼠同种异体异位气管移植物经历了典型的急排期、过渡期和慢排期的动态过程,是研究急性排斥和慢性排斥反应动态过程的优良模型.在此过程中,SUMO1在新生有核细胞中的高表达,可能与急性排斥反应和气管纤维化的形成有关.

关键词：气管移植物急性排斥纤维化小泛素相关修饰物1

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应用改良流式法检测猕猴和食蟹猴体内血型抗体水平的分布情况

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Zoological Research 2011年第1期32卷 56-61页

作者：张弛王筱啸王璐向莹魏晴王婉瑜熊郁良陈实陈刚华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所器官移植教育部重点实验室卫生部器官移植重点实验室湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院血库湖北武汉430030 中国科学院昆明动物研究所动物毒素室云南昆明650223

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人... 详细信息

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人IgM或IgG二抗,对收集的实验用猕猴及食蟹猴的血清样本进行检测,以人类健康受试者的血清样本为对照,比较两者血型抗体水平的差异。结果显示:预先用人O型浓缩红细胞吸附猴血清中所含种属间非特异性抗体后,FCM法能够准确检测其血型抗体水平及分型,并且发现猴血清中天然血型抗体的水平明显低于健康人(P<0.05)。由此得出:通过预处理清除非特异性抗体的干扰后,FCM法同样适用于灵长类动物血清中血型抗体的检测,也为构建灵长类动物模拟人ABO血型不合器官移植模型提供了技术保障和实验数据。

关键词：流式检测法 ABO血型抗体猕猴食蟹猴

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大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 477-480页

作者：陈栋沈世乾李锦文曹荣华郭晖张伟杰陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTL... 详细信息

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

关键词：大鼠供心转染 CTLA4-Ig 基因心脏移植排斥反应

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西罗莫司对移植动脉粥样硬化的预防作用

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中华实验外科杂志 2005年第5期22卷 620-621,i006页

作者：张伟杰徐崇松甄忠广张成德聂明朱学海华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部器官移植重点实验室武汉430030

目的研究新型免疫抑制剂西罗莫司(Sirolimus)对大鼠移植动脉粥样硬化的预防作用。方法建立大鼠颈动脉移植模型,将受体鼠随机分为3组,即空白对照组、环孢素组及Sirolimus组,6周后对移植动脉行病理组织学检测观察移植动脉再狭窄程度、免... 详细信息

目的研究新型免疫抑制剂西罗莫司(Sirolimus)对大鼠移植动脉粥样硬化的预防作用。方法建立大鼠颈动脉移植模型,将受体鼠随机分为3组,即空白对照组、环孢素组及Sirolimus组,6周后对移植动脉行病理组织学检测观察移植动脉再狭窄程度、免疫组织化学检测转化生长因子(TGF)-β1和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果Sirolimus组血管内膜增厚程度显著低于对照组和环孢素组,其移植动脉再狭窄程度为(15.00±1.21)%,而对照组和环孢素组分别为(40.00±5.91)%、(34.00±6.55)%,差异均有统计学意义(P<0.01);PCNA在Sirolimus组表达明显低于空白对照组和环孢素组,分别为(1.10±0.30)%、(14.20±2.56)%及(4.10±0.62)%,差异有统计学意义;TGF-β1在Sirolimus组表达低于对照组和环孢素组,分别为(5.00±1.39)%、(18.00±1.52)%及(16.00±2.35)%(P<0.01)。结论Sirolimus可预防大鼠移植动脉粥样硬化,TGF-β1和PCNA基因表达的下调可能是Sirolimus预防移植动脉粥样硬化机制中重要环节。

关键词：动脉粥样硬化预防作用西罗莫司 Sirolimus 增殖细胞核抗原(PCNA) 免疫组织化学检测 PCNA基因表达 TGF-β1 新型免疫抑制剂病理组织学检测移植动脉转化生长因子狭窄程度对照组环孢素移植模型方法建立内膜增厚

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核糖核酸干扰技术在移植免疫中的应用前景

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中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 253-254页

作者：朱珉陈刚陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基... 详细信息

核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象.自从2001年在哺乳动物培养细胞中通过小型干扰RNA(siRNA)成功诱导了特异性靶基因表达沉默后,又有学者报道[1]用病毒载体系统在原代哺乳动物细胞、干细胞和转基因小鼠上都成功实现了RNAi,更拓宽了这项技术的应用范围.虽然目前RNAi在移植学领域中的相关研究几乎处于空白阶段,但我们可以通过从相关学科RNAi的研究进展中触类旁通,探讨其在移植领域中的应用前景。

关键词：核糖核酸干扰技术移植免疫基因沉默现象哺乳动物细胞病毒载体系统 RNAi 双链RNA 靶基因表达转基因小鼠培养细胞

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建立同种大鼠心脏移植超急性排斥反应动物模型

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中华器官移植杂志 2006年第4期27卷 235-236页

作者：李荣郭晖王大卫谢林曾梦华王树森王璐陈实华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏... 详细信息

目的建立大鼠心脏移植超急性排斥反应的实验动物模型。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者。供、受者间连续进行3次皮肤移植,使受者预致敏。再进行颈部异位心脏移植。采用微量淋巴毒试验监测受者体内抗供者抗体滴度的变化。结果预致敏后的受者体内抗供者抗体滴度明显升高。7只受者心脏移植后有6只移植心在24h内被排斥,病理学证实为超急性排斥反应。结论供、受者间连续3次皮肤移植预致敏后,再行心脏移植可以建立稳定的同种移植超急性排斥反应模型。

关键词：心脏移植模型动物移植物排斥大鼠

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Axl-siRNA核转染对髓源性DC前体细胞分化的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2013年第5期42卷 511-514,546页

作者：李幸王浩戴晓敏马俊磊汪晶姜汉英宫念樵华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所、卫生部器官移植重点实验室、器官移植教育部重点实验室武汉430030 海军工程大学海工医院武汉430033

目的将Axl（Anexelekto）-siRNA（small interfering RNA）序列核转染于髓源性树突状细胞（dendritic cells,DC）前体细胞中,观察转染效率、细胞生长及分化情况.方法构建Axl-siRNA序列,用核转染法将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞并诱... 详细信息

目的将Axl（Anexelekto）-siRNA（small interfering RNA）序列核转染于髓源性树突状细胞（dendritic cells,DC）前体细胞中,观察转染效率、细胞生长及分化情况.方法构建Axl-siRNA序列,用核转染法将此序列转染于小鼠骨髓原代细胞并诱导向DC分化;根据是否转染Axl-siRNA,将实验分为空白对照组和Axl-siRNA核转染组;转染后荧光显微镜观察细胞荧光水平以评估转染效率;通过锥虫蓝染色观察细胞的存活情况;观察细胞的形态变化,记录细胞的生长情况,绘制生长曲线;转染后第8天流式细胞术检测DC的表面标志CD11c＋.结果转染后1～3 d荧光表达率分别为（70.5±6.3）%、（72.6±7.3）%、（68.8±6.5）%,而后荧光逐渐减弱并淬灭;核转染后细胞的死亡率为（21.2±5.4）%;空白对照组细胞在培养的前3d内的生长曲线呈对数增长,第4至6天,细胞数稳定在（2.38～2.47）×10^6/孔,培养后第7、8天细胞数略有下降,为（2.23～2.31）×10^6/孔;Axl-siRNA核转染组细胞生长曲线也呈现相同的趋势,但与空白对照组相比每阶段的细胞计数略有减少;细胞培养8 d后,空白对照组和Axl-siRNA核转染组CD11c＋的细胞百分比分别为（70.28±6.13）%和（67.53±7.45）%.结论 Axl-siRNA核转染法对髓源性DC前体细胞具有较高的转染效率,不影响DC的生长和分化;Axl-siRNA核转染法是研究DC功能的一种有效手段.

关键词：核转染 Axl-siRNA 树突状细胞树突状细胞前体细胞

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探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

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中华器官移植杂志 2005年第8期26卷 470-473页

作者：昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究院教育部卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小... 详细信息

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

关键词：抗γ公共链单抗移植免疫耐受作用机制丝裂霉素C

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