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40年风雨历程:中国乙型肝炎的负担和希望 ——谨以此文献给中国改革开放40周年

中华肝脏病杂志 2019年第1期27卷 3-5页

作者：蔡大川任红重庆医科大学附属第二医院感染科、重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010

中国改革开放40周年来,全国各行各业发生了翻天覆地的变化。历经40年的风雨历程,慢性乙型肝炎防治领域研究硕果累累。乙型肝炎疫苗接种使乙型肝炎病毒(HBV)感染流行率大幅下降,有效的抗HBV治疗使广大乙型肝炎患者获益,逐步形成了抗HBV... 详细信息

中国改革开放40周年来,全国各行各业发生了翻天覆地的变化。历经40年的风雨历程,慢性乙型肝炎防治领域研究硕果累累。乙型肝炎疫苗接种使乙型肝炎病毒(HBV)感染流行率大幅下降,有效的抗HBV治疗使广大乙型肝炎患者获益,逐步形成了抗HBV治疗领域"强效、低耐药和免疫调节并举"的共识。我们相信,在不远的将来,根据"预防为主,防治并举"的原则,通过新生儿普遍接种疫苗、高危人群接种疫苗,积极治疗HBV携带者和慢性乙型肝炎患者,实现肝细胞癌的"早期筛查、早期诊断、早期治疗"等措施。

关键词：肝炎,乙型抗病毒治疗癌,肝细胞预防

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HBV慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记NK细胞亚群的变化

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中华肝脏病杂志 2019年第6期27卷 436-439页

作者：张琼方张大志重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院感染科 400010

目的评价乙型肝炎病毒(HBV)慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记自然杀伤(NK)细胞亚群的变化。方法将pAAV-HBVl.2质粒采用高压水动力法尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,作为造模组,空载质粒作为对照组;检测不同时间点肝功能和病毒学指标判断HBV质... 详细信息

目的评价乙型肝炎病毒(HBV)慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记自然杀伤(NK)细胞亚群的变化。方法将pAAV-HBVl.2质粒采用高压水动力法尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,作为造模组,空载质粒作为对照组;检测不同时间点肝功能和病毒学指标判断HBV质粒慢性携带动物模型构建情况;采用流式细胞术检测脾脏和肝脏中NK细胞及CD11b联合CD27划分的NK细胞亚群的频数;采用Graphpad Prism软件进行统计学分析。结果小鼠HBV持续携带模型构建成功。与对照组相比,HBV慢性携带小鼠的脾脏和肝脏中的NK细胞频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD27联合CD11b将NK细胞划分为CD11b+CD27-(CD11b+SP)、CD11b+CD27+(DP)、CD11b-CD27+(D27+SP)和CD11b-CD27-(DN)四个亚群,与对照组相比,HBV慢性携带小鼠的脾脏中四个NK细胞亚群的频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。HBV慢性携带小鼠的肝脏中DN NK细胞亚群的频数与对照组比较显著增多(P<0.001),CD11b+SP细胞亚群的频数显著减少(P<0.05),DP和CD27+SP两个NK细胞亚群频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论HBV慢性携带小鼠肝脏NK细胞亚群分布异常,DN NK细胞亚群的频数明显增多,CD11b+SP细胞亚群的频数显著减少。

关键词：肝炎病毒,乙型淋巴细胞亚群自然杀伤细胞质粒高压注射

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CIT siRNA最佳干扰序列的筛选及其在SK-Hep-1肝癌细胞中对CIT表达的抑制

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中华肝脏病杂志 2019年第4期27卷 281-285页

作者：胡月刘杞周晓芳黄丽利孙航重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室400016 重庆医科大学附属第二医院肾内科 400010

目的筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列,并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响。方法根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点,通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞,用Re... 详细信息

目的筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列,并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响。方法根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点,通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞,用Real-timePCR和蛋白质印迹法检测其对目的基因CIT的敲减效率。采用细胞免疫化学、共聚焦显微镜观察siRNA干扰后48h,SK-Hep-1细胞中CIT表达的变化情况。用EdU细胞增殖实验检测siRNA干扰后48h对SK-Hep-1细胞增殖的影响。两样本均数间比较采用t检验,多样本均数间比较采用单因素方差分析。结果3条针对不同靶点的干扰序列,蛋白质印迹法检测结果显示,相较于对照组,敲低1、2、3组CIT蛋白的表达水平均降低(P<0.01),而敲低1组蛋白表达量最低。Real-timePCR检测结果显示,相较于对照组,敲低1、2、3组CITmRNA表达水平均降低(P<0.01),而敲低1组mRNA表达量最低。激光共聚焦显微镜从形态学上也证实转染siRNA之后,CIT的表达明显减弱。EdU增殖实验结果显示,转染CIT的siRNA将明显减弱SK-Hep-1肝癌细胞的增殖(P<0.05)。结论成功筛选并合成能有效抑制SK-Hep-1肝癌细胞中CIT基因表达的siRNA片段,且能明显抑制SK-Hep-1细胞的增殖。

关键词： RNA,小干扰 CIT SK-Hep-1人肝癌细胞

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肾细胞癌中自然杀伤细胞的可塑性及其临床作用的研究

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重庆医学 2020年第10期49卷 1585-1588页

作者：夏洋张琼方重庆医科大学附属第二医院泌尿外科 400010 教育部感染性疾病分子生物学重点实验室/重庆医科大学病毒性肝炎研究所/重庆医科大学附属第二医院感染科 400010

目的检测自然杀伤细胞(NK细胞)在肾细胞癌(RCC)患者癌组织和癌旁组织中可塑性及其与疾病的相关性。方法收集30例RCC患者的癌组织和癌旁组织,经过密度梯度离心法获得组织浸润的淋巴细胞,采用流式细胞术检测组织浸润的淋巴细胞中NK细胞比... 详细信息

目的检测自然杀伤细胞(NK细胞)在肾细胞癌(RCC)患者癌组织和癌旁组织中可塑性及其与疾病的相关性。方法收集30例RCC患者的癌组织和癌旁组织,经过密度梯度离心法获得组织浸润的淋巴细胞,采用流式细胞术检测组织浸润的淋巴细胞中NK细胞比例,统计其表型分布的特征,并分析其变化与肿瘤分期之间的相关性。结果与癌旁组织(8.53±3.00)%相比,癌组织中NK细胞的比例明显增加(14.43±3.96)%;且与癌旁组织比,癌组织中NK细胞高表达1型固有淋巴细胞(ILC1)的表面标志CD127[(7.97±2.65)%vs.(12.66±2.88)%]、CD49a[(8.70±3.90)%vs.(16.49±5.02)%]、TRAIL[(13.77±3.82)%vs.(19.76±3.75)%],低表达NK细胞的转录因子Eomes[(9.20±3.41)%vs.(4.82±1.20)%]。同时ILC1样细胞的比例随着肿瘤TNM分期增高逐渐增多。结论RCC患者癌组织中NK细胞转换为ILC1样细胞,且与疾病进展密切相关。

关键词：癌,肾细胞杀伤细胞,自然细胞可塑性淋巴细胞流式细胞术

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聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎过程中外周血γδT细胞的变化及其临床意义

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中华肝脏病杂志 2018年第5期26卷 365-370页

作者：刘楷沈妍希凌宁雷宇胡鹏任红陈敏重庆医科大学附属第二医院感染科、重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室 400010

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者在聚乙二醇干扰素（Peg-IFN） α-2a治疗过程中外周血γδT细胞的变化,并分析其与临床指标及疗效的相关性. 方法收集HBeAg阳性的CHB患者在Peg-IFNα-2a治疗不同时间点的外周全血,包括0周17例、12周20... 详细信息

目的观察慢性乙型肝炎（CHB）患者在聚乙二醇干扰素（Peg-IFN） α-2a治疗过程中外周血γδT细胞的变化,并分析其与临床指标及疗效的相关性. 方法收集HBeAg阳性的CHB患者在Peg-IFNα-2a治疗不同时间点的外周全血,包括0周17例、12周20例、24周20例及48周16例,其中有11例患者在每个时间点均收集血样观察.流式细胞术检测外周血中γ δ T及其亚群细胞Vδ1T、Vδ2T、效应记忆γδT（γ δTem）、中央记忆γ δT （γ δTcm）、初始γδT （γδTnaive）与终末分化效应γ δT （γ δTeff）细胞的频率.同时检测肝功能、HBV血清病毒等标志物及HBV DNA水平.用SPSS 23.0统计软件分析比较各治疗时间点细胞比例的差异,以及细胞比例与丙氨酸氨基转移酶（ALT）、HBsAg、HBeAg或HBV DNA水平的相关性;并且分析持续随访的11例患者中,γδT及其亚群细胞比例与Peg-IFN α-2a治疗应答的相关性.结果在Peg-IFNα-2a治疗0～ 48周期间,CHB患者外周血γδT及Vδ 2T细胞比例逐渐下降,48周时的γδT细胞和Vδ 2T细胞比例分别为6.89％（5％,8.15％）、4.61％（2.16％,6.50％）,明显低于0周水平[12.5％（7.73％,19.00％）、6.59％（3.86％,13.62％）],差异均具有统计学意义（P值均＜0.05）;但V δ 1T、γ δ Tem、γ δTcm、γ δTnaive或γ δTeff亚群细胞的比例在各时间点的差异均无统计学意义（P值均＞ 0.05）.同时ALT、HBsAg、HBeAg或HBV DNA水平与γδT或Vδ2T细胞比例均呈显著性正相关（P值均＜0.05）.11例持续随访患者中,应答者的γ δ Tem细胞的比例在各时间点均显著低于无应答者,差异均有统计学意义（P值均＜ 0.05）,而其他γδT亚群细胞比例在两组间的差异均无统计学意义（P值均＞ 0.05）. 结论 Peg-IFN α-2a治疗CHB过程中γδT细胞比例随着HBV复制降低及肝脏炎症缓解而呈下降趋势,且具有较低效应记忆γδT细胞比例的CHB患者在Peg-IFNα-2a治疗中可能更易获得应答.

关键词：肝炎乙型慢性聚乙二醇干扰素α γδT细胞

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血浆置换联合双重血浆吸附治疗提高慢加急性肝衰竭预后

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中华肝脏病杂志 2018年第10期26卷 744-749页

作者：钟珊王娜赵静张莉罗玲曾维琼石小枫王志毅蔡大川张大志周智胡鹏重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

目的比较血浆置换（PE）联合双重血浆吸附与单纯PE治疗慢加急性肝衰竭的疗效和安全性。方法回顾性分析2015年1月以来收治的经人工肝治疗的慢加急性肝衰竭患者251例。比较不同模式治疗前后患者症状、体征、实验室检查以及并发症的变化情... 详细信息

目的比较血浆置换（PE）联合双重血浆吸附与单纯PE治疗慢加急性肝衰竭的疗效和安全性。方法回顾性分析2015年1月以来收治的经人工肝治疗的慢加急性肝衰竭患者251例。比较不同模式治疗前后患者症状、体征、实验室检查以及并发症的变化情况，并追踪近期疗效。据资料不同用t检验、Pearsonz。检验或者Fisher确切概率法进行统计学分析。结果早期肝衰竭，低置换PE联合双重血浆分子吸附系统（DPMAs）（83.7％）和等量PE联合DPMAS治疗有效率（84．0％和82．1％）明显优于单纯的足量PE（55．6％）垆〈0．05）。中晚期肝衰竭，各组治疗有效率差异无统计学意义（P〉0．05）。联合治疗组的胆红素下降率、胆汁酸下降率均明显优于PE组（P〈0．05）。低置换量PE联合DPMAS（LPE＋DPMAS）组，先PE后DPMAS组的凝血酶原活动度改善率，白蛋白改善率均明显低于PE组（P〈0．05）。先DPMAS后PE组凝血酶原活动度改善率和白蛋白改善率与PE组差异无统计学意义。各组不良反应发生差异无统计学意义。结论较单纯PE而言，PE联合DPMAS既能提高早期肝衰竭治疗有效率，还能减少血浆用量。先行DPMAs治疗后行PE治疗，能改善DPMAS对凝血功能和白蛋白水平的不良影响。

关键词：肝衰竭肝,人工血浆置换双重血浆吸附

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杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1在慢性乙型肝炎病毒感染中对自然杀伤细胞功能的影响

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中华肝脏病杂志 2018年第8期26卷 585-589页

作者：李呜鸿张琼方殷文伟张大志任红重庆医科大学附属第二医院感染科重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 400010

目的研究慢l生乙型肝炎病毒（HBV）感染中的杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1（KLRG1）表达对自然杀伤（NK）细胞功能的影响。方法提取120例慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康对照外周血单个核细胞（PBMC），使用流式细胞仪检测外周血... 详细信息

目的研究慢l生乙型肝炎病毒（HBV）感染中的杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1（KLRG1）表达对自然杀伤（NK）细胞功能的影响。方法提取120例慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康对照外周血单个核细胞（PBMC），使用流式细胞仪检测外周血中NK细胞和KLRG1^＋NK细胞频数，检测外周血PBMC中分泌干扰素Y的NK细胞频数，并用GraphPad Prism6．03软件对实验数据进行统计分析。结果HBV感染组NK细胞频数（16．92％±7．9％）与健康对照组（10．57％±6．5％）比较，差异无统计学意义；HBV感染组KLRG1^＋NK细胞频数（49．43％±21．2％）明显高于健康对照组（31．60％±17．9％），差异有统计学意义（t=7．3476，P〈0．001）；HBV感染组分泌干扰素v的KLRG1^＋NK细胞频数（2．59％±1．0％）明显低于健康对照组（5．96％±2．4％），差异有统计学意义（P=0．009）。结论HBV感染可增加NK细胞KLRG1的表达，并且进一步减少NK细胞中干扰素γ分泌，可能是造成HBV慢性感染的重要因素。

关键词：肝炎病毒乙型干扰素γ 自然杀伤细胞杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1

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核转录因子共转染对肝癌细胞生物学特性的影响

核转录因子共转染对肝癌细胞生物学特性的影响

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2019中国肿瘤学大会

作者：廖勇任红陈瑜颜亮宋琳岚刘敏慧汤慧何成重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院感染科

目的鉴于肿瘤细胞和干细胞的基因表达和表型特征的高度相似性，我们推测肿瘤干细胞的形成可能涉及细胞核重编的机制。为此，我们设计通过引入2-3 种核重编因子到肝癌细胞，以此探索核转录因子在肝癌肿瘤生物学特性的影响。

关键词：肿瘤干细胞肝细胞性肝癌核转录因子核重编

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基于全外显子测序对不同转移潜能人肝癌细胞系的克隆进化关系研究

基于全外显子测序对不同转移潜能人肝癌细胞系的克隆进化关系研究

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2019中国肿瘤学大会

作者：周芊李祖俐何成宋琳岚刘敏慧任红廖勇重庆医科大学病毒性肝炎研究所教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学附属第二医院感染科

目的为了解三株不同转移潜能人肝癌细胞系(MHCC 97-L、MHCC 97-H 和HCC97LM3)之间的克隆和遗传进化关系。方法首先对三株细胞进行全外显子测序，随后利用在线Oncotator 数据库注释突变，根据三株肝癌细胞的突变谱构建其进化发育树。

关键词：肝细胞癌肿瘤异质性克隆进化全外显子组测序转移潜能

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数字聚合酶链反应及其在感染性疾病中的应用

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微生物与感染 2019年第3期14卷 185-192页

作者：赵云王蕾郭雅萌陈力汤慧重庆大学生命科学学院重庆405200 复旦大学上海医学院基础医学院教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室上海200032 教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院感染科重庆400010

数字聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)采用与定量PCR相同的荧光化学原理和不同的数学原理来实现对靶标核酸序列的绝对定量,其摒弃了对外部参照的依赖,同时具有更高的数据精密度,提高了重复性和再现性。数字PCR的应用涵盖生... 详细信息

数字聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)采用与定量PCR相同的荧光化学原理和不同的数学原理来实现对靶标核酸序列的绝对定量,其摒弃了对外部参照的依赖,同时具有更高的数据精密度,提高了重复性和再现性。数字PCR的应用涵盖生命科学众多领域,特别是在医学检验领域,其对疾病相关核酸分子标记的准确分析,为疾病的早期诊断、进展监测、疗效评估提供了动态量化指标。数字PCR的出现将推动基于核酸扩增技术的分子生物学检测迈入精准定量阶段。本文就数字PCR尤其是微滴式数字PCR在感染性疾病中的应用进展及前沿进行综述。

关键词：数字聚合酶链反应微滴式数字聚合酶链反应泊松分布绝对定量感染性疾病

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