检索结果-内蒙古大学图书馆

内科理论与实践 2015年第5期10卷 353-358页

作者：冯晓静余韵丁秋兰卢莹上海交通大学医学院病理生理学教研室细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科上海200025

目的:探究RAS相关的C3肉毒素底物1(RAC1)在胃癌中的表达及其与临床病理学特征的相关性,并观察RAC1对胃癌细胞的增殖、迁移等生物学特性的影响。方法:使用免疫组织化学染色方法研究RAC1在胃癌中的表达情况。分别使用χ2检验及Kaplan-Meie... 详细信息

目的:探究RAS相关的C3肉毒素底物1(RAC1)在胃癌中的表达及其与临床病理学特征的相关性,并观察RAC1对胃癌细胞的增殖、迁移等生物学特性的影响。方法:使用免疫组织化学染色方法研究RAC1在胃癌中的表达情况。分别使用χ2检验及Kaplan-Meier生存分析的统计学方法分析RAC1的表达与胃癌临床病理学的特征及预后的相关性。并探究高表达RAC1在体外实验中对胃癌细胞生长、迁移、侵袭的影响。结果:RAC1在胃癌组织中高表达,且不同分化程度、有无局部侵袭、淋巴结转移和不同Lauren’s分型间均有差异(均P<0.05)。RAC1高表达预示了胃癌患者的不良预后。在胃癌细胞中诱导RAC1高表达后发现其在体外促进胃癌细胞的生长、迁移及侵袭(均P<0.05)。使用特异性抑制剂抑制RAC1表达后发现,胃癌细胞生长、迁移及侵袭的生物学功能也受到相应的抑制(均P<0.05)。结论 :RAC1与胃癌的侵袭性相关且是预后不良的指标。体外实验结果也进一步证实了RAC1高表达与胃癌细胞的侵袭性相关,鉴于其在胃癌生长及进展中所起的重要作用,RAC1可作为胃癌治疗的潜在靶点。

关键词： RAC1 胃癌转移肿瘤形成预后

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FRAP技术揭示PLZF-RARα融合蛋白在细胞核内的运动性依赖于其配基及转录活性

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第10期34卷 1463-1470页

作者：贺薇黄莺上海交通大学基础医学院病理生理学教研室细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025

目的运用光漂白荧光恢复(FRAP)技术检测一系列带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的野生型及突变型的早幼粒细胞性白血病锌指-维甲酸受体α(PLZF-RARα)表达蛋白分子在细胞核内运动性。方法运用凝胶迁移实验(EMSA)检测带有GFP标签的野生型及突变... 详细信息

目的运用光漂白荧光恢复(FRAP)技术检测一系列带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的野生型及突变型的早幼粒细胞性白血病锌指-维甲酸受体α(PLZF-RARα)表达蛋白分子在细胞核内运动性。方法运用凝胶迁移实验(EMSA)检测带有GFP标签的野生型及突变型PLZF-RARα融合蛋白结合维甲酸反应元件(RARE)的能力;运用FRAP以及共聚焦荧光显微镜分析一系列GFP-PLZF-RARα及其突变体表达蛋白在细胞核内的运动性;运用转录抑制剂放线菌素D(Act D)和/或全反式维甲酸(ATRA)处理GFP-RARα和GFPPLZF-RARα表达细胞,运用FRAP观察PLZF-RARα和野生型RARα在细胞核内的运动性变化情况。结果位于PLZF结构区的POZ以及锌指结构域不仅是引起PLZF-RARα核内运动性降低的主要原因,同时也是引起配体诱导的核内运动性减慢的关键因素。Act D能够显著地抑制PLZF-RARα和RARα蛋白分子在细胞核内的运动性;分化诱导剂ATRA处理可逆转Act D引起的RARα核内运动性降低效应,但经Act D处理的PLZF-RARα分子无此效应。结论运用FRAP技术发现PLZF-RARα融合蛋白在细胞核内的运动性减慢可能依赖于配体的存在及其转录活性。

关键词：早幼粒细胞性白血病锌指-维甲酸受体α 维甲酸受体α 绿色荧光蛋白光漂白荧光恢复转录

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阿的平联合硫利达嗪对慢性粒细胞白血病细胞的诱导凋亡作用

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第7期34卷 1016-1021页

作者：涂瑶瑶徐含章雷虎吴英理上海交通大学基础医学院病理生理学教研室细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025

目的探讨阿的平(QC)联合硫利达嗪(THZ)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞(K562)的影响。方法以不同浓度QC(0、1、2、3和4μmol/L)和THZ(0、2、4、8和16μmol/L)处理K562细胞不同时间(0、24和48 h)后,锥虫蓝排斥实验检测两药单加对K562细胞活... 详细信息

目的探讨阿的平(QC)联合硫利达嗪(THZ)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞(K562)的影响。方法以不同浓度QC(0、1、2、3和4μmol/L)和THZ(0、2、4、8和16μmol/L)处理K562细胞不同时间(0、24和48 h)后,锥虫蓝排斥实验检测两药单加对K562细胞活性的影响。以不同浓度的QC(2、3和4μmol/L)和THZ(2、4和8μmol/L)分别单加及合加处理K562细胞24 h,锥虫蓝排斥实验检测K562细胞活力,利用CompuSyn软件计算两药合加的协同指数。3μmol/L的QC与4μmol/L的THZ分别单加及合加处理K562细胞,用或不用caspase不可逆抑制剂Z-VAD-FMK(20μmol/L)处理,RH-123/PI双染后流式细胞术检测线粒体跨膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果锥虫蓝排斥实验结果显示:QC与THZ单加,低浓度时对K562细胞的抑制效应并不明显;两药合加对K562细胞有良好的协同杀伤效应。Western blotting检测结果显示:K562经两药合加处理后出现PARP-1的剪切及凋亡相关蛋白Bcl-2、Mcl-1表达的减少,且这种效应不能被Z-VAD-FMK逆转。流式细胞术检测结果表明:相对于两药单加,3μmol/L的QC与4μmol/L的THZ合加处理24 h后K562细胞线粒体膜电位明显降低,并且这种效应不能被Z-VADFMK逆转。结论 QC与THZ两药联合能协同诱导K562细胞凋亡,这种效应为非caspase依赖,线粒体跨膜电位下降可能参与了这一过程。

关键词：慢性粒细胞白血病阿的平硫利达嗪协同作用线粒体跨膜电位

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紫菀酮对去泛素化酶2活性的抑制作用

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第11期34卷 1563-1567页

作者：谢文娟秦东军张健周虎臣吴英理上海交通大学基础医学院病理生理学教研室细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025 上海交通大学药学院上海200240

目的从天然产物中发现新的去泛素化酶2(USP2)抑制剂。方法利用泛素荧光检测试剂盒进行USP2抑制剂筛选。100μmol/L紫菀酮(SH)处理NB4细胞不同时间,Western blotting检测USP2底物蛋白Cyclin D1表达变化,流式细胞术检测细胞周期分布,分子... 详细信息

目的从天然产物中发现新的去泛素化酶2(USP2)抑制剂。方法利用泛素荧光检测试剂盒进行USP2抑制剂筛选。100μmol/L紫菀酮(SH)处理NB4细胞不同时间,Western blotting检测USP2底物蛋白Cyclin D1表达变化,流式细胞术检测细胞周期分布,分子对接技术分析SH与USP2结合情况。结果体外筛选结果显示:SH抑制USP2活性,50%抑制浓度(IC50值)为69μmol/L。Western blotting检测结果显示:SH引起USP2底物蛋白Cyclin D1表达水平降低。流式细胞术检测结果显示:SH处理NB4细胞48 h时,S和G2/M期细胞减少,并出现典型的细胞凋亡峰(Sub-G1峰);分子对接结果显示:SH的氧原子及其骨架中心和USP2的K503、W439、R363及D440对于两者之间的结合起到重要作用。结论 SH能够抑制USP2活性,为发展新的USP2抑制剂提供了先导化合物。

关键词：去泛素化酶2 抑制剂紫菀酮分子对接

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黏蛋白1基因敲除小鼠模型的构建

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中国科学：生命科学 2014年第2期44卷 143-150页

作者：程布凯杨杰茅文莹石吉晶靳伟廖晓东匡颖赵克温黄雷上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室模式生物E-研究院上海200025 上海南方模式生物研究中心上海201210

黏蛋白1(MUC1)属黏蛋白家族成员,分布于上皮细胞膜表面,由于在免疫炎症反应以及肿瘤发生中的重要作用而日益受到重视.为了进一步深入研究MUC1的生物学功能,构建了Muc1基因敲除小鼠模型.首先,根据小鼠Muc1基因组序列设计基因剔除策略,将2... 详细信息

黏蛋白1(MUC1)属黏蛋白家族成员,分布于上皮细胞膜表面,由于在免疫炎症反应以及肿瘤发生中的重要作用而日益受到重视.为了进一步深入研究MUC1的生物学功能,构建了Muc1基因敲除小鼠模型.首先,根据小鼠Muc1基因组序列设计基因剔除策略,将2个loxP位点分别插在外显子2和3两侧,构建基因剔除载体Muc1-ABRLFn-pBR322.以电穿孔方法将载体导入胚胎干细胞(ES细胞),用G418和更昔洛韦进行正负筛选获得4个同源重组的ES细胞克隆.挑选其中一个阳性ES克隆行囊胚显微注射,获得16只嵌合率大于50%的雄鼠;其次,利用嵌合雄鼠与C57BL/6J野生型雌鼠交配后获得11只floxP杂合子小鼠(10雄1雌),通过杂合子小鼠回交,并进一步与EⅡa-Cre小鼠交配,最终成功得到Muc1全身敲除小鼠,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象.初步表型观察未发现Muc1基因敲除相关器官组织结构的异常改变.本研究为MUC1的生物学功能的挖掘,尤其是MUC1在肿瘤发生转移中的作用机制的揭示提供了实验平台.

关键词：黏蛋白1 条件性敲除小鼠生物学功能

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嗜酸乳杆菌ATCC4356 S-层蛋白的克隆、表达和纯化

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第6期34卷 946-950页

作者：孙琴曾乃燕周爱武叶玮上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防儿童科上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025

目的克隆嗜酸乳杆菌S层蛋白的编码基因,使其原核表达并纯化表达产物。方法对嗜酸乳杆菌S层蛋白(S-layer protein)基因进行提取和扩增,连接pET-SUMO3表达载体并转入大肠杆菌内使其表达;采用镍柱亲和层析技术对S层蛋白进行提取及纯化,经SD... 详细信息

目的克隆嗜酸乳杆菌S层蛋白的编码基因,使其原核表达并纯化表达产物。方法对嗜酸乳杆菌S层蛋白(S-layer protein)基因进行提取和扩增,连接pET-SUMO3表达载体并转入大肠杆菌内使其表达;采用镍柱亲和层析技术对S层蛋白进行提取及纯化,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting验证表达产物。结果嗜酸乳杆菌ATCC4356的S层蛋白编码基因(1 263 bp)被克隆,且与相关基因有98%同源性。SDS-PAGE及Western blotting证明,重组融合蛋白在细菌中能够高效表达且部分融合蛋白可经亲和层析及酶切去除融合标签获得重组S-层蛋白(43 0000 Da)。结论通过获得嗜酸乳杆菌S-层蛋白编码基因的方法可实现其原核表达,并得到纯度较高的S层蛋白,为后续的生物学功能研究奠定了基础。

关键词：嗜酸乳杆菌ATCC4356 S-层蛋白克隆表达纯化

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造血干细胞的干性维持与代谢调控

造血干细胞的干性维持与代谢调控

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中国生理学会第24届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：郑俊克上海交通大学医学院/细胞分化与凋亡教育部重点实验室

近年来,HSCs的代谢调控日益受到关注:我们的系列研究揭示了HSCs以糖酵解方式作为能量主要来源的特征,并在转录水平和细胞骨架水平阐明了Meis/Hif-1?或Hif-2α/ROS/p16以及Profilin 1/G?13/Egr1途径在调控HSCs代谢和自我更新能力中的重... 详细信息

近年来,HSCs的代谢调控日益受到关注:我们的系列研究揭示了HSCs以糖酵解方式作为能量主要来源的特征,并在转录水平和细胞骨架水平阐明了Meis/Hif-1?或Hif-2α/ROS/p16以及Profilin 1/G?13/Egr1途径在调控HSCs代谢和自我更新能力中的重要作用;我们初步的研究提示支链氨基酸除了参与蛋白质的构建之外,还可以作为营养信号分子而调节HSCs的干性维持;无独有偶,Speth等人发现可以通过16,16-二甲基前列腺素E2药物增加Hif-1α的表达而促进HSCs归巢和重建骨髓的能力,进一步证实了我们的前期发现;Ito等人也证实了PML-PPAR-δ途径所调控的脂肪氧化对HSCs干性维持的重要作用;同时Morrison等人发现HSCs具有较低的蛋白质合成水平的特性。这些研究提示葡萄糖、脂肪酸以及氨基酸三大营养物质的代谢可能在HSCs干性的维持中具有非常重要的作用,为深入研究HSCs的代谢调控提出了新的问题。此外,HSCs的体外扩增有望成为解决异体骨髓移植中HSCs供体来源不足和MHC配型困难的有效方法之一,但如何提高HSCs体外扩增的能力是目前亟待解决的难题之一,其中最为关键的因素是寻找合适的生长因子以提高HSCs自我更新的能力。鉴于目前研究所提示的HSCs具有独特的代谢方式(如糖酵解为主)、我们推测是否可以通过干预HSCs代谢调控的靶基因或信号通路(如使用代谢调节小分子化合物)而达到体外扩增的目的,这将也可能为HSCs体外扩增新分子的发现另辟蹊径,并在较大程度上促进该领域瓶颈问题的解决。

关键词：干性维持体外扩增代谢调控

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补骨脂乙素诱导伊马替尼敏感和耐药的慢性粒细胞白血病细胞凋亡

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第9期34卷 1309-1314页

作者：宋利利王伟卫孙云韦炜徐含章吴英理上海交通大学医学院病理生理学教研室细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025 上海市黄浦区东南医院检验科上海200023 上海交通大学医学院附属新华医院血液科上海200092

目的探讨补骨脂乙素对伊马替尼敏感和耐药慢性粒细胞白血病细胞的影响。方法体外培养人慢性粒细胞白血病伊马替尼敏感细胞株K562s和伊马替尼耐药细胞株K562r,以不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)补骨脂乙素(IBC)处理K562s和K562r细胞... 详细信息

目的探讨补骨脂乙素对伊马替尼敏感和耐药慢性粒细胞白血病细胞的影响。方法体外培养人慢性粒细胞白血病伊马替尼敏感细胞株K562s和伊马替尼耐药细胞株K562r,以不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)补骨脂乙素(IBC)处理K562s和K562r细胞不同时间(0、24、48、72 h),锥虫蓝拒染法检测IBC对K562s和K562r细胞活性的影响,Annexin V/PI、Rh123/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡及线粒体跨膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果锥虫蓝拒染法检测结果显示:IBC对K562s和K562r均有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。流式细胞术检测结果表明,经[BC处理的K562s和K562r出现明显时间-剂量依赖性的凋亡及线粒体膜电位的降低。Western blotting检测结果显示:经IBC处理的K562s和K562r细胞发生caspase-3活化和PARP-1的剪切。结论 IBC能够诱导K562s和K5621,细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降可能参与了这一过程。

关键词：慢性粒细胞白血病补骨脂乙素细胞凋亡线粒体跨膜电位伊马替尼耐药

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利用秀丽线虫和化学蛋白质组学建立表型筛选和靶点鉴定的无缝对接技术

利用秀丽线虫和化学蛋白质组学建立表型筛选和靶点鉴定的无缝对接...

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中国药理学会生化与分子药理专业委员会2014年研讨会

作者：王立顺姚祝军韩冰上海交通大学医学院附属瑞金医院细胞分化与凋亡教育部重点实验室上海200025

药物发现策略包括"基于表型的筛选(phenotypic screening)"和"基于靶点的筛选(targetbased screening)".其中,基于靶点的药物筛选在近30年占主导地位.然而,1999年到2008年FDA批准的新药统计分析表明:基于表型的筛选...

药物发现策略包括"基于表型的筛选(phenotypic screening)"和"基于靶点的筛选(targetbased screening)".其中,基于靶点的药物筛选在近30年占主导地位.然而,1999年到2008年FDA批准的新药统计分析表明:基于表型的筛选在first-in-class原创新药开发中具有明显优势,近年来有回归主流的趋势.尽管如此,表型筛选策略因受困于靶点鉴定在产业界和学术界备受争议,其焦点集中于"表型筛选获得的活性化合物如何实现其靶点的鉴定"这一问题.表型筛选和靶点鉴定的对接已经成为推动药物研发模式新变革的关键.

关键词：

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A redox switch in angiotensinogen modulates angiotensin release

A redox switch in angiotensinogen modulates angiotensin rele...

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中国晶体学会第五届全国会员代表大会暨学术大会（大分子分会场）

作者： Aiwu ZHOU 上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室

Blood pressure is critically controlled by angiotensins,which are vasopressor peptides specifically released by the enzyme renin from the tail of angiotensinogen-a non-inhibitory member of the serpin family of protease *** angiotensinogen has long been regarded as a passive substrate,the crystal structures solved here to 2.1??resolution show that

关键词： A redox switch in angiotensinogen modulates angiotensin release

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