检索结果-内蒙古大学图书馆

T细胞活力响应性启动子(TARP)萤光素酶报告系统在CAR⁃T细胞功能鉴定中的应用

细胞与分子免疫学杂志 2023年第5期39卷 397-403页

作者：梁思辛郑瑞赵晓娟张仪婷王鹏举蒙若彤阎博杨安钢新乡医学院医学技术学院河南新乡453003 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 延安大学生命科学学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR⁃T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案。方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒。慢病... 详细信息

目的将T细胞活力响应性启动子(TARP)纳米萤光素酶报告基因系统导入含有嵌合抗原受体(CAR)编码基因的慢病毒质粒中,为CAR⁃T细胞活化水平及功能鉴定提供一种便捷的、定量分析的方案。方法采用全基因合成及分子克隆技术构建重组质粒。慢病毒包装并感染人原代T淋巴细胞,流式细胞术检测慢病毒感染T细胞的阳性率。通过萤光素酶报告基因系统、Western blot法、流式细胞术、小动物活体成像技术鉴定CAR⁃T细胞的功能。结果酶切鉴定和质粒测序结果表明重组质粒的顺利构建,流式细胞术结果显示CAR⁃T细胞的正常制备,萤光素酶活力检测结果表明本系统能够动态响应CAR⁃T细胞的激活,体外功能实验证实本系统能够反映CAR⁃T细胞的耗竭状态,小动物活体成像结果体现了本系统在小鼠体内的示踪功能。结论TARP纳米萤光素酶报告基因系统为评估CAR⁃T细胞活化水平,耗竭状态以及体内示踪等方面提供了更加便捷、灵敏、定量分析的技术手段。

关键词： T细胞活力响应性启动子(TARP) 萤光素酶报告基因系统嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR⁃T cells)

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miR-98-5p靶向HIF1AN对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及炎症因子的影响

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中国免疫学杂志 2023年第1期39卷 55-58,64页

作者：蒋刚健胡淼胡东坡漯河市中心医院检验科漯河462000 新乡医学院三全学院临床生物化学与仪器教研室新乡453003 商丘医学高等专科学校医学检验技术教研室商丘476100

目的:探讨miR-98-5p对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡、炎症因子的影响及对HIF1AN的调控作用。方法:体外培养人支气管上皮细胞16-HBE,LPS刺激细胞建立细胞损伤模型(LPS组),分别将miR-NC、miR-98-5p mimics、si-NC、si-HIF1AN、pcDNA-NC、p... 详细信息

目的:探讨miR-98-5p对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡、炎症因子的影响及对HIF1AN的调控作用。方法:体外培养人支气管上皮细胞16-HBE,LPS刺激细胞建立细胞损伤模型(LPS组),分别将miR-NC、miR-98-5p mimics、si-NC、si-HIF1AN、pcDNA-NC、pcDNA-HIF1AN、miR-98-5p mimics与pcDNA-NC、miR-98-5p mimics与pcDNA-HIF1AN转染至16-HBE细胞后进行LPS处理(miR-NC+LPS组、miR-98-5p+LPS组、si-NC+LPS组、si-HIF1AN+LPS组、pcDNA-NC+LPS组、pcDNAHIF1AN+LPS组、miR-98-5p+pcDNA-NC+LPS组、miR-98-5p+pcDNA-HIF1AN+LPS组);qRT-PCR与Western blot分别检测miR-98-5p、HIF1AN表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1α水平;双荧光素酶报告实验检测miR-98-5p、HIF1AN的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、HIF1AN、BNIP3蛋白表达。结果:转染miR-98-5p mimics或si-HIF1AN可明显降低LPS诱导的16-HBE细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1α水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-98-5p可靶向结合HIF1AN;共转染miR-98-5p mimics与pcDNA-HIF1AN可明显提高细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、BNIP3蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1α水平(P<0.05)。结论:miR-98-5p过表达可通过下调HIF1AN表达抑制LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及炎症因子释放进而减轻细胞损伤。

关键词： miR-98-5p HIF1AN 脂多糖支气管上皮细胞凋亡炎症

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硫氢化钠对2型糖尿病小鼠模型视网膜病变的影响

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成都医学院学报 2024年第6期19卷 943-948页

作者：杨志凰王利萍刘鹏飞成都中医药大学银海眼科医院近视防控中心眼综合科成都610081 新乡医学院三全学院基础医学院解剖学教研室新乡453000

目的探讨硫氢化钠(NaHS)对2型糖尿病小鼠视网膜病变(DR)的影响。方法将C57BL/6J雄性小鼠随机分为Sham组、T2DM组、T2DM+NaHS组,每组20只。Sham组采用常规饲料喂养,T2DM组构建2型糖尿病小鼠模型[使用高糖高脂饲料喂养8周,再腹腔注射链脲... 详细信息

目的探讨硫氢化钠(NaHS)对2型糖尿病小鼠视网膜病变(DR)的影响。方法将C57BL/6J雄性小鼠随机分为Sham组、T2DM组、T2DM+NaHS组,每组20只。Sham组采用常规饲料喂养,T2DM组构建2型糖尿病小鼠模型[使用高糖高脂饲料喂养8周,再腹腔注射链脲佐菌素(STZ)],T2DM+NaHS组在构建2型糖尿病小鼠模型后腹腔注射100μmol/kg NaHS,连续给药8周。蛋白酶消化实验比较3组视网膜血管损伤情况;HE染色比较3组视网膜血管增生情况;TUNEL染色比较3组凋亡阳性细胞数量;蛋白质印记法检测3组视网膜B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2关联X蛋白(Bax)、白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β(IL-1β)、血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达。结果与Sham组相比,T2DM组和T2DM+NaHS组视网膜血管周细胞迁移、新生血管平均数、TUNEL阳性细胞数及视网膜Bax/Bcl-2、IL-18、IL-1β、VEGF、HIF-1α的蛋白表达量明显增加(P<0.05),且T2DM组比T2DM+NaHS组增加更明显(P<0.05)。结论NaHS可抑制VEGF表达,降低2型糖尿病视网膜血管损伤、视网膜炎症和细胞凋亡。

关键词：糖尿病视网膜病变抗血管内皮生长素硫氢化钠 2型糖尿病

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脊柱内镜技术处理腰椎关节突关节毗邻出口神经根伴随动脉的解剖学应用研究

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四川解剖学杂志 2024年第1期32卷 1-3,17页

作者：苗莹莹张浩平王斌李宽宽新乡医学院三全学院人体解剖学教研室新乡453003 河南省直第三人民医院椎间盘中心郑州450002 新乡医学院三全学院生物化学与分子生物学教研室新乡453003

目的:探讨脊柱内镜技术处理腰椎关节突关节毗邻出口神经根伴随动脉的解剖学应用.方法:选择新鲜人体标本男、女各5具为研究对象.采取剥离显露腰椎脊柱及关节突关节周围组织结构方法,观察该区域血管形态、走行规律及与周围毗邻组织关系.结... 详细信息

目的:探讨脊柱内镜技术处理腰椎关节突关节毗邻出口神经根伴随动脉的解剖学应用.方法:选择新鲜人体标本男、女各5具为研究对象.采取剥离显露腰椎脊柱及关节突关节周围组织结构方法,观察该区域血管形态、走行规律及与周围毗邻组织关系.结果:腰椎关节突关节毗邻出口神经根处血管网与内镜工作通道,或者环锯距离,在L3/4节段,男性为(11.39±0.72)mm,女性为(11.03±0.52)mm;在L4/5节段,男性为(11.78±1.26)mm,女性为(11.29±0.38)mm;在L5/S1节段,男性为(11.1±0.98)mm,女性为(10.45±0.45)mm.在男、女性的L3/4、L4/5及L5/S1节段中,该出口神经根处血管网与内镜工作通道或者环锯的距离左、右两侧比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:采取人体尸体标本解剖研究,从开放角度探讨关节突关节毗邻出口神经根伴随动脉的走行与周围组织的关系,可指导施术者术中穿刺及工作通道置入,降低甚至避免术中出血量或术后血肿发生率.

关键词：脊柱内镜腰椎关节突关节脊神经根脊髓血管解剖学

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HER2靶向TRAC和B2M双基因敲除通用型CAR-T细胞的制备及对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第5期38卷 432-438页

作者：宋源李秧阎博左百乐赵丽君赵晓娟王鹏举王依依杨安钢王向鹏新乡医学院医学检验学院河南省免疫与靶向药物重点实验室河南新乡453003 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军第九八六医院陕西西安710054 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CA... 详细信息

目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CAR-T细胞;利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术敲除CAR-T的T细胞受体(TCR)和人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ),制备靶向HER2的通用型CAR-T细胞,CCK-8试验检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。结果制备通用型CAR-T细胞,CAR阳性率为(67.1±1.46)%,TCR和HLA-Ⅰ类分子的敲除率为(86.31±1.78)%。体外杀伤试验显示通用型CAR-T细胞能够有效杀伤HER2阳性肿瘤细胞,其杀伤能力与CAR-T细胞无明显区别。结论成功制备能够靶向杀伤HER2阳性肿瘤细胞的通用型CAR-T细胞,为实现应用通用型同种异体CAR-T细胞治疗HER2阳性肿瘤患者奠定了基础。

关键词：同种异体表皮生长因子受体2 嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞通用型CAR-T细胞

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组蛋白去乙酰化酶9基因rs73307079位点与烟雾病发生风险的关系

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新乡医学院学报 2022年第11期39卷 1036-1040页

作者：彭俊宇邢红霞吴亦琦刘梦豪左书茜张雪薇邢瑶平李超堃赵新利新乡医学院第一附属医院神经内科河南卫辉453100 新乡市运动障碍性疾病重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院神经内科河南新乡453003 新乡医学院基础医学院生理学与病理生理学教研室河南新乡453003 河南省生物精神病学重点实验室河南新乡453002 新乡医学院第一附属医院神经外科河南卫辉453100

目的探讨烟雾病(MMD)患者组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因rs73307079位点与MMD发生风险的关系及该位点不同基因型对HDAC9基因表达的影响。方法选择2019年9月至2020年12月于新乡医学院第一附属医院神经内科及神经外科就诊的54例MMD患者为MM... 详细信息

目的探讨烟雾病(MMD)患者组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因rs73307079位点与MMD发生风险的关系及该位点不同基因型对HDAC9基因表达的影响。方法选择2019年9月至2020年12月于新乡医学院第一附属医院神经内科及神经外科就诊的54例MMD患者为MMD组,另选择53例性别、年龄与MMD组匹配的健康体检者作为对照组。取所有受试者空腹外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应法扩增HDAC9基因rs73307079位点DNA片段并测序,应用Chromas软件分析所有受试者的HDAC9基因rs73307079位点基因型。采用二元logistic分析多重遗传模型(加性、显性、隐性、超显性)下HDAC9基因rs73307079位点不同基因型与MMD发生风险的关联性。采用实时定量聚合酶链式反应法检测HDAC9基因mRNA相对表达量。结果MMD组和对照组受试者rs73307079位点均存在TT、TC、CC 3种基因型及T、C 2种等位基因。MMD组受试者TT基因型频率显著低于对照组(P<0.05),TC基因型频率显著高于对照组(P<0.05);2组受试者的CC基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05);2组受试者的T、C 2种等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。在加性遗传模型下,TC基因型携带者发生MMD的风险显著高于TT基因型携带者(P<0.05),CC基因型携带者与TT基因型携带者的MMD发生风险比较差异无统计学意义(P>0.05);在显性遗传模型下,TC+CC基因型携带者发生MMD的风险显著高于TT基因型携带者(P<0.05);在隐性遗传模型下,CC基因型携带者与TT+TC基因型携带者的MMD发生风险比较差异无统计学意义(P>0.05);在超显性遗传模型下,TC基因型携带者发生MMD的风险显著高于TT+CC基因型携带者(P<0.05)。MMD组患者中rs73307079位点TT、TC、CC基因型患者的HDAC9 mRNA相对表达量分别为1.173±0.642、1.123±0.203、1.045±0.386,两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论HDAC9基因rs73307079位点基因型多态性与MMD的发生存在关联,但不影响HDAC9基因表达水平,该位点的TC基因型携带者具有较高的MMD发病风险。

关键词：烟雾病组蛋白去乙酰化酶9 基因型卒中

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中药熏蒸治疗儿童过敏性紫癜适宜温度研究

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中国中西医结合儿科学 2023年第2期15卷 99-104页

作者：张君胡桂丽王娅如王妍炜新乡医学院三全学院基础护理教研室河南新乡453000 河南中医药大学第一附属医院儿科

目的探索不同年龄阶段的过敏性紫癜患儿中药熏蒸治疗适宜温度,为中药熏蒸治疗儿童过敏性紫癜护理操作规范化应用提供参考依据。方法通过患儿年龄、熏蒸温度两个因素进行三水平析因设计,患儿年龄为3~6岁、7~12岁、13~14岁三水平、熏蒸温... 详细信息

目的探索不同年龄阶段的过敏性紫癜患儿中药熏蒸治疗适宜温度,为中药熏蒸治疗儿童过敏性紫癜护理操作规范化应用提供参考依据。方法通过患儿年龄、熏蒸温度两个因素进行三水平析因设计,患儿年龄为3~6岁、7~12岁、13~14岁三水平、熏蒸温度为39℃、41℃、43℃三水平,选取243例过敏性紫癜患儿,随机分为9组,每组各27例。观察每组患儿治疗前后临床症状评分、舒适度并评价安全性。结果(1)不同温度对不同年龄患儿的治疗后临床症状评分比较:在年龄与温度的交互作用统计分析结果中,F=0.564,P>0.05,提示年龄、温度之间的交互作用差异无统计学意义。进一步采用两因素方差分析,年龄的单独效应结果显示,F=0.022,P>0.05,差异无统计学意义。温度的单独效应结果显示,F=14.528,P<0.05,差异有统计学意义,即不同的温度对临床症状评分具有显著影响,相较于39℃温度水平,41℃、43℃温度条件下对临床症状评分影响更为显著(P<0.05),41℃与43℃对临床症状评分的影响比较,差异无统计学意义(P>0.05);每组患儿治疗后临床症状评分均低于治疗前评分,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)不同温度对不同年龄患儿的温度主观舒适度评分比较:在年龄与温度的交互作用统计分析结果中,F=50.620,P<0.05,提示年龄、温度之间的交互作用差异有统计学意义。年龄的单独效应结果中显示,F=14.665,P<0.05,差异有统计学意义。温度的单独效应结果显示,F=12.590,P<0.05,差异有统计学意义,即不同的温度对患儿舒适度具有显著影响。3~6岁患儿对39℃、41℃两个温度水平的舒适度高于43℃,7~12岁患儿在41℃温度条件下舒适度最高,13~14岁患儿在43℃条件下舒适度最高。(3)不同温度对不同年龄患儿的安全性分级比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1)中药熏蒸不同温度对过敏性紫癜患儿治疗效果不同,不同年龄阶段的患儿疗效并无区别,年龄不会影响治疗效果。(2)不同年龄阶段的患儿对不同温度中药熏蒸治疗舒适度不同。(3)临床建议3~6岁患儿中药熏蒸治疗采用41℃,7~12岁患儿采用41℃,13~14岁患儿采用43℃。

关键词：过敏性紫癜年龄温度中药熏蒸

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用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第7期37卷 590-595页

作者：王鹏举王依依张仪婷杨甜宋源赵晶阎博杨安钢新乡医学院医学检验学院河南新乡453003 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK2... 详细信息

目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达。通过SDS-PAGE、Western blot法鉴定融合蛋白表达情况,通过Western blot法、ELISA、免疫组织化学实验验证其应用。结果酶切鉴定和基因测序显示pPA-HRP、pPG-HRP和pPA/G-HRP表达质粒构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot法结果表明,融合蛋白PA-HRP、PG-HRP和PA/G-HRP在HEK293F细胞中成功表达。Western blot法、ELISA和免疫组织化学结果显示,三种融合蛋白均能识别结合小鼠及兔来源的IgG,其中PA/G-HRP表现出更为灵敏的结合活性。结论成功制备了具有高亲和力、通用型二抗功能的融合蛋白,PA/G-HRP能够替代传统抗小鼠IgG及抗兔IgG,可用于多种免疫检测实验。

关键词：金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA) 链球菌蛋白G(SPG) 辣根过氧化物酶(HRP) 融合蛋白真核表达

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3种鲜食与完熟谷物营养成分及抗氧化活性比较

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粮食与油脂 2022年第4期35卷 66-71页

作者：何梦影张康逸郭东旭杨妍河南省农业科学院农副产品加工研究中心河南郑州450002 新乡医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南新乡453000

分别测定小麦、玉米、青豆3种谷物鲜食和完熟期的基本营养成分、生物活性物质含量以及抗氧化能力,并对活性物质含量与抗氧化能力进行相关性分析。结果表明:鲜食谷物中粗蛋白、膳食纤维、总酚、总黄酮、植酸、类胡萝卜素含量高于完熟谷物... 详细信息

分别测定小麦、玉米、青豆3种谷物鲜食和完熟期的基本营养成分、生物活性物质含量以及抗氧化能力,并对活性物质含量与抗氧化能力进行相关性分析。结果表明:鲜食谷物中粗蛋白、膳食纤维、总酚、总黄酮、植酸、类胡萝卜素含量高于完熟谷物,总糖、淀粉、维生素B_(1)、维生素B_(2)、维生素E及5种矿物质元素的含量低于完熟谷物;在抗氧化活性方面,3种鲜食谷物的DPPH·、O_(2)^(-)·及ABTS^(+)·清除率均高于完熟谷物,而鲜食谷物的·OH清除率低于完熟谷物;通过相关性分析可知,DPPH·与O_(2)^(-)·清除率与总黄酮含量相关性较强,·OH清除率与类胡萝卜素含量相关性较强,ABTS^(+)·清除率与总酚含量相关性较强,均呈正相关。

关键词：鲜食谷物完熟谷物营养成分生物活性成分抗氧化活性

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脂质运载蛋白-2在肿瘤进展中的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第3期36卷 252-258页

作者：李翠萍周贝仝李丹新乡医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南新乡453000 新乡医学院河南新乡453000

铁元素通过参与氧化损伤、分泌炎性因子、改变信号通路、影响免疫系统等过程,在肿瘤的发生发展中发挥重要的促进作用。靶向铁的治疗是肿瘤治疗的重要策略之一。转铁蛋白参与肿瘤细胞铁的运输,是肿瘤治疗的重要靶标。脂质运载蛋白-2(lipo... 详细信息

铁元素通过参与氧化损伤、分泌炎性因子、改变信号通路、影响免疫系统等过程,在肿瘤的发生发展中发挥重要的促进作用。靶向铁的治疗是肿瘤治疗的重要策略之一。转铁蛋白参与肿瘤细胞铁的运输,是肿瘤治疗的重要靶标。脂质运载蛋白-2(lipocalin-2,LCN2)是由肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞分泌的胞内可运输铁离子的蛋白质。LCN2在多种类型的肿瘤中表达均明显升高,有望成为相关癌症不良预后的标志物,是近年来研究的热点。LCN2主要通过结合不同的配体与受体参与铁的运输,保护基质金属蛋白酶-9活性,分泌细胞因子等机制,参与肿瘤细胞的增殖与凋亡、肿瘤细胞的侵袭与转移,以及肿瘤血管生成过程而影响肿瘤的治疗与预后。其中,LCN2的存在形式不同,对铁的运输方式不同,决定其对肿瘤细胞增殖与凋亡的调控作用不同,以及LCN2对信号通路影响的差异,造成LCN2在不同肿瘤,甚至相同肿瘤的研究中获得不一致结果,具体机制尚待进一步研究。本文就LCN2蛋白的结构特征、LCN2蛋白与肿瘤进展的关系,及其在肿瘤进展中可能的作用机制进行综述,为进一步的药物开发与临床研究提供理论参考。

关键词：脂质运载蛋白-2 肿瘤微环境转铁蛋白基质金属蛋白酶-9

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