检索结果-内蒙古大学图书馆

携带Fluc与mCherry双报告基因的重组痘苗病毒WR株的构建及体外应用

微生物学报 2024年第12期64卷 4789-4803页

作者：孙洁伟黄保英王梦微吴依依楚巧鸿霍恕婷赵莉翟德胜邓瑶赵营谭文杰新乡医学院药学院河南新乡453003 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会生物安全重点实验室传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 新乡医学院公共卫生学院河南新乡453003

【目的】构建同时表达双报告基因(荧光素酶Fluc和红色荧光蛋白mCherry)的重组痘苗病毒WR株。【方法】采用CRISPR/Cas9技术构建针对WR株J2R区的gRNA CRISPR/Cas9质粒及表达Fluc和mCherry的质粒pJSE-Fluc/mCherry,插入至TK区构建重组痘苗... 详细信息

【目的】构建同时表达双报告基因(荧光素酶Fluc和红色荧光蛋白mCherry)的重组痘苗病毒WR株。【方法】采用CRISPR/Cas9技术构建针对WR株J2R区的gRNA CRISPR/Cas9质粒及表达Fluc和mCherry的质粒pJSE-Fluc/mCherry,插入至TK区构建重组痘苗病毒rWR-Fluc/mCherry。采用PCR与测序分析基因插入位置与序列的准确性;通过mCherry、Fluc活性、空斑形态鉴定重组病毒;重组病毒连续盲传12代,检测双报告基因及E3L表达分析重组病毒的遗传稳定性;检测重组病毒(rWR)与野生型病毒(WR)感染Vero和HeLa细胞后的细胞病变、TCID50、报告基因表达,分析病毒的复制动力学。采用空斑法、qPCR法、双报告基因活性检测,评价ST-246作为阳性药物的体外抗病毒药效。【结果】体外鉴定结果显示,Fluc和mCherry准确插入WR株的TK区域,感染Vero细胞后可检测到mCherry荧光及Fluc酶活性,空斑形态与野生型病毒一致,连续盲传12代病毒滴度保持稳定,并且双报告基因活性及E3L表达均可稳定检出,表明重组病毒rWR-Fluc/mCherry构建成功且遗传稳定;重组病毒感染Vero和HeLa细胞后的细胞病变、TCID50滴定、双报告基因活性检测均表明,感染后48-72h达到复制高峰,与WR的复制动力学一致。采用重组病毒rWR-Fluc/mCherry测得ST-246的 EC50与WR野生型病毒一致,多个检测方法(病毒蚀斑、DNA拷贝数、双报告基因活性) EC50结果(2-7 nmol/L之间)间均具有良好的一致性(相关系数r均大于0.500 0,P<0.05)。【结论】成功构建了可同时表达Fluc与mCherry双报告基因且遗传稳定的重组痘苗病毒rWR-Fluc/mCherry,可应用于抗病毒药物体外快捷筛选及药效分析。

关键词：痘苗病毒重组双报告基因抗正痘病毒药物半数有效浓度

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CVA6高通量测序方法的建立及应用

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现代预防医学 2023年第9期50卷 1700-1705页

作者：裴书君李懿卢世栋索文帅王笑阳陈泽倩王若琳黄学勇新乡医学院公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所郑州大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室

目的建立柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）基于多重PCR扩增的高通量测序方法，并应用于CVA6的基因进化研究。方法利用PRIMER5.0设计7对CVA6型特异性引物，在同一体系构建并优化多重PCR高通量测序方法，并应用该方法对河南... 详细信息

目的建立柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）基于多重PCR扩增的高通量测序方法，并应用于CVA6的基因进化研究。方法利用PRIMER5.0设计7对CVA6型特异性引物，在同一体系构建并优化多重PCR高通量测序方法，并应用该方法对河南省39份CVA6标本开展基因测序，分析核苷酸氨基酸同源性和构建系统进化树。结果本研究成功建立基于多重PCR的CVA6高通量测序方法，基因特征分析表明此次河南省检出的CVA6流行亚型为D3a亚型，与山东、湖南、浙江、云南、辽宁、江西等地区的毒株亲缘关系较近。结论本研究建立CVA6的高通量测序方法特异性强，扩增效率高，为CVA6型基因型遗传特征和变异规律提供了技术支持，可应用于CVA6的同源性分析及基因进化研究分析。

关键词： CVA6 多重PCR引物高通量测序系统进化

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BRACO-19和TMPyP4在HBV-1.3mer质粒感染模型对HBV转录和复制的抑制作用

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中国病原生物学杂志 2024年第9期19卷 999-1003,1008页

作者：马海洋贺丽娜吕树娟余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室安徽合肥230032 动物源性传染病安徽省重点实验室

目的探讨G-四链体小分子配体BRACO-19和TMPyP4对乙型肝炎病毒转录和复制的影响。方法利用含有HBV全基因组1.3倍复制子(HBV 1.3-mer)质粒转染HepG2细胞感染模型,BRACO-19和TMPyP4分别作用48 h,酶联免疫吸附试验检测上清表面抗原(HBsAg)和... 详细信息

目的探讨G-四链体小分子配体BRACO-19和TMPyP4对乙型肝炎病毒转录和复制的影响。方法利用含有HBV全基因组1.3倍复制子(HBV 1.3-mer)质粒转染HepG2细胞感染模型,BRACO-19和TMPyP4分别作用48 h,酶联免疫吸附试验检测上清表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达水平,实时荧光定量PCR检测细胞内HBV Total RNA、3.5kbRNA以及DNA表达水平,将HBV DNA用plasmid SafeTMATP-Dependent DNase 37℃作用3 h后,定量PCR检测病毒cccDNA的表达;QGRS Mapper软件分析HBV推定的四链体形成序列(putative quadruplex-forming sequences,PQS),并在HBV 1.3-mer质粒DNA上设计PQS区域上下游引物及非PQS区域对照引物,两种小分子配体分别作用HBV 1.3-mer质粒DNA,qPCR stop试验分别定量PQS和非PQS区域DNA扩增水平,1%琼脂糖凝胶电泳可视化验证。结果20μmol/L BRACO-19和TMPyP4作用HepG2转染模型显著抑制HBsAg和HBeAg的表达水平,HBV的Total RNA、3.5 kb RNA、DNA和cccDNA水平相较于对照组均显著下调。通过不同浓度BRACO-19和TMPyP4作用HBV质粒DNA,qPCR stop试验发现随着BRACO-19和TMPyP4药物浓度递增可以显著抑制DNA聚合酶在基因组中三个HBV PQS区域的扩增。结论小分子配体BRACO-19和TMPyP4均能抑制HBV转染模型中的转录和复制,HBV基因存在富含鸟嘌呤的四链体形成序列,BRACO-19和TMPyP4特异性阻滞DNA聚合酶在HBV的PQS区域复制延伸。

关键词：乙型肝炎病毒 BRACO-19 TMPyP4 PCR stop assay

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2005-2021年河南省人间布鲁氏菌病流行特征与时空分布分析

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中华地方病学杂志 2023年第7期42卷 540-547页

作者：索文帅裴书君王笑阳陈泽倩易志杰吕家锐张白帆叶莹黄学勇郑州大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室郑州450001 新乡医学院公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室新乡453003 河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所郑州450018

目的分析河南省人间布鲁氏菌病(简称布病)的流行特征和时空特征。方法通过中国疾病预防控制信息系统收集2005-2021年河南省人间布病病例资料,采用描述流行病学方法分析河南省布病疫情概况及三间分布特征;分别采用全局和局部空间自相关... 详细信息

目的分析河南省人间布鲁氏菌病(简称布病)的流行特征和时空特征。方法通过中国疾病预防控制信息系统收集2005-2021年河南省人间布病病例资料,采用描述流行病学方法分析河南省布病疫情概况及三间分布特征;分别采用全局和局部空间自相关分析河南省布病空间分布规律和发病热点地区,并采用时空扫描分析河南省布病时空聚集区域。结果2005-2021年河南省累计报告布病病例39862例,年均发病率为2.44/10万,各年发病人数整体呈上升趋势(χ^(2)趋势=11127.85,P=0.001)。发病月份主要集中在3-7月,共占59.00%(23517/39862),5月为发病峰值(5478例)。全省157个县(市、区)均有布病病例报告。男、女性别比为2.52∶1.00(28542/11320);职业以农民为主,共32985例(82.75%);发病年龄主要集中在45~65岁,共20226例(50.74%)。全局空间自相关分析显示,除2006-2008年外,其余年份全局莫兰指数均>0,均Z>1.96,均P<0.05,均呈空间聚集性;进一步进行局部空间自相关分析,2012-2021年均存在高-高和低-低聚集区(均P<0.01)。时空扫描分析显示,高发病人数区存在1个时空聚集区,低发病人数区存在2个时空聚集区;高发聚集区以内乡县为中心,覆盖了嵩县、汝州市等48个县(市、区),聚集时间为2014-2021年;2个低发聚集区分别以永城市、博爱县为中心,分别覆盖了58和18个县(市、区),聚集时间分别为2016-2021、2005-2012年。结论2005-2021年河南省布病发病人数整体呈上升趋势,发病人群以中老年男性农民为主,且河南省存在布病时空聚集区域。

关键词：布鲁杆菌病流行特征空间自相关时空扫描

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基于Apriori算法的布鲁菌病感染相关危险因素关联性

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中华疾病控制杂志 2023年第7期27卷 776-782页

作者：周立雯孙喜红丁子琛王浩桦丛慧文包绮晗王廉源杨毅李承圣石福艳王素珍潍坊医学院公共卫生学院卫生统计学教研室潍坊261053 济宁市疾病预防控制中心传染病防制科济宁272000

目的分析布鲁菌病(布病)感染相关危险因素间的关联作用,为制定布病防控措施提供依据。方法基于全国传染病疫情信息网络直报系统中济宁市2014-2017年数据,识别布病感染高发地区;在高发地区中采用多阶段整群抽样的方法,依靠问卷和血样检... 详细信息

目的分析布鲁菌病(布病)感染相关危险因素间的关联作用,为制定布病防控措施提供依据。方法基于全国传染病疫情信息网络直报系统中济宁市2014-2017年数据,识别布病感染高发地区;在高发地区中采用多阶段整群抽样的方法,依靠问卷和血样检测共调查2892人。通过二分类logistic回归分析模型分析布病的危险因素;运用Apriori算法挖掘相关危险因素的关联规则。结果有279人感染布病,感染率为9.65%;logistic回归分析模型显示养殖人员(OR=2.406,95%CI:1.726~3.353)、接触羊(OR=3.323,95%CI:2.448~4.511)、收购皮毛(OR=21.141,95%CI:14.154~31.577)是布病感染的危险因素,差异均有统计学意义(均P<0.001);Apriori算法共挖掘出以感染布病为后项的强关联规则203条,最大提升比为10.37,最小为6.22,不同的危险因素组合对布病感染的可能性在关联强度等方面存在差异。结论布病感染率较高,应重点关注畜牧养殖、羔羊接触及皮毛收购等重点人群;多种危险因素存在紧密关联性,应注意同时具备强关联规则危险因素的人群,开展针对性措施以降低感染风险,筑牢布病防控屏障。

关键词：布鲁菌病危险因素健康教育关联规则

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基于高通量测序技术的发热伴血小板减少综合征病毒全基因组多重PCR测序方法的建立与评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第12期42卷 931-939页

作者：王笑阳裴书君陈泽倩索文帅易志杰李懿黄学勇郭万申郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州450001 新乡医学院公共卫生学院流行病学教研室新乡453000 河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所郑州450016

目的基于二代测序(next generation sequencing,NGS)技术建立一种发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)基因组的测序方法。方法提取SFTSV阳性血清样本病毒核酸,利用Primer5.0软件设计SFTSV特异性引物,构建多重PCR方法对病毒核苷酸序列进行特异性扩增,利用二代测序仪进行全基因组测序。结果28份SFTSV阳性血清样本均能进行特异性扩增并获得全序,覆盖度均超过94%,A型病毒株最多(20株)、其次为B型(4株)、E型(3株)。结论本研究基于多重PCR建立了针对SFTSV的特异性强、质量好的高通量测序方法,提高了测序效率。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒多重PCR 高通量测序基因组

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白24多克隆抗体的制备与初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 279-285页

作者：付胜男杨云王聪罗庆礼余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽... 详细信息

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽段的碱基序列,并连接至p ET-28a载体中。将获得的GRA24截短蛋白原核表达质粒转化于大肠埃希菌BL21感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白表达与纯化。使用纯化的GRA24截短蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠获得GRA24截短蛋白多克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体效价,采用Western blotting检测抗体特异性,并将该抗体应用于免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)。结果SDS-PAGE结果表明成功构建重组质粒,考马斯亮蓝染色结果显示获得高纯度重组GRA24截短蛋白。ELISA结果显示,GRA24截短蛋白多克隆抗体效价在1∶208400以上;Western blotting检测发现,该抗体可识别弓形虫不同虫株内源性GRA24蛋白,特异性识别重组GRA24截短蛋白;间接IFA检测发现,弓形虫入侵宿主细胞16 h后分泌的GRA24蛋白定位于宿主细胞核中。结论成功制备广适性、高效价、强特异性的抗弓形虫GRA24多克隆抗体,可应用于Western blotting与IFA,为进一步研究GRA24功能奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白24 多克隆抗体免疫荧光

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乙型肝炎病毒在不同丙氨酸氨基转移酶状态下对Th17、Treg细胞及其比率的影响

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北京大学学报（医学版） 2022年第2期54卷 272-277页

作者：高鹏雒艳萍李俊峰陈琳毛小荣兰州大学第一医院传染病研究室兰州730000 兰州大学基础医学院免疫教研室兰州730000 兰州大学第一医院传染科兰州730000

目的:探讨不同载量的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在不同丙氨酸氨基转移酶(alanine aminetransferase,ALT)状态下对慢性乙型肝炎患者辅助性T淋巴细胞17(helper T lymphocytes 17,Th17)、调节性T淋巴细胞(regulatory T lymphocyte,Treg)及其比率的影响。方法:分析兰州大学第一医院确诊为慢性乙型肝炎的患者336例,采用化学发光免疫分析仪检测乙肝抗原抗体,采用生化分析仪检测肝功能,采用荧光定量PCR分析仪检测被测者的病毒载量,采用流式细胞分析仪检测Th17、Treg细胞及其比率,其中ALT正常的乙肝患者111例(ALT<40 U/L),ALT≥正常上限且<2倍增高的慢性乙肝患者108例(40 U/L≤ALT<80 U/L),ALT≥正常上限2倍增高的慢性乙肝患者117例(ALT≥80 U/L),并且按病毒载量分为低复制组(HBV DNA<4.0 lg copies/mL),中复制组(4.0 lg copies/mL≤HBV DNA<6.0 lg copies/mL),高复制组(HBV DNA≥6.0 lg copies/mL)。采用Dunnett T3方差分析在不同ALT状态下,不同载量的乙型肝炎病毒对慢性乙型肝炎患者Th17、Treg细胞及其比率的影响。对ALT≥正常上限2倍增高的乙型肝炎患者进行抗病毒治疗24周,观察治疗前后病毒学及Th17、Treg细胞及其比率的变化。结果:在ALT正常组及ALT≥正常上限且<2倍增高的慢性乙肝组中不同载量的乙型肝炎病毒对Th17、Treg细胞及其比率的影响差异无统计学意义,而在ALT≥正常上限2倍增高的慢性乙肝患者组中,随着病毒载量的增加,Th17(低复制组3.18%±0.79%、中复制组3.78%±0.92%、高复制组4.57%±1.15%)、Treg细胞(低复制组5.52%±1.58%、中复制组5.89%±1.84%、高复制组6.37%±2.35%)及其比率Th17/Treg(低复制组0.57±0.25、中复制组0.65±0.29、高复制组0.73±0.36)均明显增高(P<0.05)。恩替卡韦治疗24周后,患者HBV DNA明显下降,Th17(3.89%±1.02%vs.2.06%±0.46%)、Treg细胞(6.02%±2.03%vs.5.06%±1.25%)及其比率(0.65±0.28 vs.0.41±0.14)均明显下降(P<0.05)。结论:在不同ALT状态下HBV对Th17、Treg细胞及其比率的影响不同,可以从免疫学的角度阐明HBV对机体的影响,进一步理解以ALT分组抗病毒治疗的意义,从而有助于临床治疗。

关键词：慢性乙型肝炎病毒载量 Th17细胞 Treg细胞

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基于德尔菲专家咨询法的内蒙古鄂托克旗鼠疫防控示范区防控效果评价指标体系构建

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中国公共卫生 2024年第7期40卷 868-873页

作者：张倩白钢王琪刘春芳武少卿王筱婉刘丹孙雪松乔婷鞠康宁铄安馨远李伟刘铮然内蒙古科技大包头医学院公共卫生学院社会医学教研室包头014000 乌兰察布市疾病预防控制中心鼠疫防控科乌兰察布012000 中国疾控中心传染病预防控制所鼠疫室北京102200

目的构建鼠疫防控效果评价指标体系,评估示范区鼠疫防控效果,进一步加强鼠疫防控体系建设。方法于2023年6—8月选择20名从事鼠疫防控与研究工作并具有权威性的专家学者,利用德尔菲法(Delphi)构建指标体系,层次分析法计算各级指标的权重... 详细信息

目的构建鼠疫防控效果评价指标体系,评估示范区鼠疫防控效果,进一步加强鼠疫防控体系建设。方法于2023年6—8月选择20名从事鼠疫防控与研究工作并具有权威性的专家学者,利用德尔菲法(Delphi)构建指标体系,层次分析法计算各级指标的权重。采用问卷回收率表示专家积极系数,采用专家权威系数(Cr)反映专家权威性,采用变异系数(CV)和肯德尔和谐系数(Kendall's W)反映专家咨询的协调性。使用SPSS 25.0和yaahp 10.1软件进行统计分析。结果3轮专家咨询的积极系数均为100%,专家积极程度高。3轮Cr均>0.7,专家权威程度较高。第3轮变异系数(CV)<0.25,第3轮指标的Kendall's W较第1、2轮递增,且接近0.4(P值均<0.01)。指标体系最终确定3个1级指标(事前准备能力、事中处理能力、事后恢复能力,所占权重分别为33.33%、33.34%、33.33%),10个2级指标(其中总结分析能力与损失修复能力的权重最高,为16.67%;其次是监测预警能力为15.68%)和58个3级指标(其中网络直报率与专业人员负责鼠疫资料的权重最高,为4.76%;其次是鼠疫监测数据库、预警平台,分别为3.62%、3.10%)。结论鼠疫防控示范区效果评价指标体系有一定的科学性及可靠性,能够较为全面、准确地评价示范区鼠疫防控效果,有利于建设更加完善的防控体系,并对于其他地区做好鼠疫防控工作提供参考与借鉴。

关键词：鼠疫示范区指标体系德尔菲法

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山西长治地区蜱媒病原微生物流行现状分析

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中国病原生物学杂志 2023年第9期18卷 1065-1069页

作者：崔佳李瑞晓刘益萍于娟缪玉徐爱玲栗冬梅饶华祥长治医学院基础医学部微生物学教研室山西长治046000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室长治医学院基础医学部寄生虫学教研室长治医学院公共卫生与预防医学系流行病与卫生统计学教研室

目的了解山西长治地区蜱媒病原体,为科学进行媒介生物防控提供理论依据。方法采集山西省长治市5个县(区)的游离蜱、寄生蜱标本,首先采用形态学与DNA条码技术分类鉴定蜱标本,再采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)... 详细信息

目的了解山西长治地区蜱媒病原体,为科学进行媒介生物防控提供理论依据。方法采集山西省长治市5个县(区)的游离蜱、寄生蜱标本,首先采用形态学与DNA条码技术分类鉴定蜱标本,再采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)方法检测巴尔通体(Bartonella spp)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、莫氏立克次体(Rickettsia mooseri)、噬吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)5种病原体,另外,随机挑取了来自不同地区的12个样品进行三代纳米孔测序(Nanopore sequencing)检测。结果本研究采集蜱虫标本523只,均为长角血蜱(Haemaphysalis longicornis),其中游离蜱109只,寄生蜱414只,雌性成蜱192只,雄性成蜱244只,若蜱87只。结果显示巴尔通体阳性5份,伯氏疏螺旋体、莫氏立克次体和噬吞噬细胞无形体阳性各1份,未检出土拉弗朗西斯菌。Nanopore测序结果发现蜱共生微生物主要分布在变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes),属水平上主要分布在甲基菌属(Methylobacterium),鞘脂单胞菌属(Sphingomonas),青枯菌属(Ralstonia),食酸菌属(Acidovorax),丛毛单胞菌属(Comamonas),不动杆菌属(Acietobacter),假单胞菌属(Pseudomonas),葡萄球菌属(Staphylococcus),链球菌属(Streptococcus)。结论 qPCR方法与第三代测序技术Nanopore相结合能全面反应山西长治地区长角血蜱中病原微生物与其他潜在致病微生物的分布,提示可能存在人类致病风险。

关键词：长角血蜱蜱媒微生物荧光定量PCR Nanopore 山西长治

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