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中国免疫学杂志 2016年第10期32卷 1450-1453页

作者：张婧婧赵庆伟杨景瑞段巨洪于海川河南省新乡医学院医学检验学院分子诊断与医学检验技术河南省协同创新中心新乡453003

目的：研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2表达的关系。方法：采用cell counting kit-8法、细胞核Hochest33258染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细... 详细信息

目的：研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2表达的关系。方法：采用cell counting kit-8法、细胞核Hochest33258染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827的活性、凋亡和细胞周期的影响;采用Western blot法,观察药物作用后细胞中Bcl-2蛋白表达的变化。结果：吉西他滨（0.1～1 000 ng/ml）对人非小细胞肺癌HCC827活性具有抑制作用,并有促凋亡效应。此外,可以将细胞阻滞在S期。在吉西他滨诱导的细胞凋亡过程中,凋亡因子Bcl-2蛋白的表达下调。结论：吉西他滨可以抑制人非小细胞肺癌HCC827细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,S期周期阻滞,其诱导的凋亡可能是其杀死肿瘤细胞的主要机制之一,此外,凋亡与相关基因Bcl-2蛋白的表达具有一定关系。

关键词：细胞凋亡人非小细胞肺癌HCC827细胞吉西他滨 Bcl-2蛋白

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甘露聚糖结合凝集素对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节作用及机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第4期41卷 270-279页

作者：杨婧文李志欣孙彦威任智宏黄晓愉王凡平张伟于莉莉王明永新乡医学院医学检验学院 453003 新乡医学院基础医学院 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003 新乡市免疫调控与分子诊断重点实验室 453003

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制,为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化。油红O染色分析细胞分... 详细信息

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制,为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化。油红O染色分析细胞分化成熟及脂滴积累情况,CCK-8法检测不同浓度MBL(0、1、5、10μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖能力的影响,Western blot分析MBL(10μg/ml)对不同分化阶段细胞自噬关键因子LC3B、Beclin1和p62蛋白的表达,油红O染色观察MBL干预下脂滴蓄积的改变,Western blot、qRT-PCR检测不同浓度MBL干预下自噬关键因子蛋白质及mRNA表达水平,基于自噬性降解的自噬流分析来进一步说明自噬活性,Western blot分析单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号分子的表达及磷酸化。结果油红O染色结果显示经过10 d诱导的3T3-L1前脂肪细胞可达到完全分化状态;CCK-8结果表明实验组各浓度MBL(1~10μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖无影响;Western blot及qRT-PCR检测发现在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中,MBL处理组自噬相关蛋白及mRNA表达水平增强,并呈一定浓度依赖关系;油红O染色显示不同分化阶段脂肪细胞内脂滴在MBL干预下呈不同程度的减少;荧光显微镜检测结果进一步证实MBL通过增加自噬体的合成增强脂肪细胞自噬活性;并且在MBL干预下,AMPK的磷酸化水平明显上调,mTOR的磷酸化水平明显下调,同样呈现浓度依赖关系。结论MBL通过AMPK/mTOR信号通路加快3T3-L1脂肪细胞分化过程中的自噬进程,降低脂质积累,为治疗肥胖及其相关代谢疾病提供了一种潜在的功能途径。

关键词：甘露聚糖结合凝集素 3T3-L1细胞自噬 AMPK/mTOR 成脂分化

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蓝萼甲素通过IL-6调节HCCLM3细胞STAT3信号通路的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第8期39卷 608-612页

作者：朱琳琳徐祉轩张明明新乡医学院医学检验学院、河南省免疫与靶向药物重点实验室、河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心 453003 新乡医学院医学检验学院科研创新班 453003

目的研究蓝萼甲素(glaucocalyxin A,GLA)调节HCCLM3细胞信号转导转录激活因子(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号通路表达的作用,探讨GLA影响HCCLM3细胞转移的作用机制。方法不同浓度(0.1 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml)GLA分组刺激培养HCCLM3细胞48 h,qRT-PCR与Western blot分别检测IL-6、STAT3/pSTAT3^Tyr705、MMP9 mRNA与蛋白质的表达;Transwell检测细胞迁移与侵袭;ELISA检测细胞培养液中IL-6的浓度。结果0.1 ng/ml GLA刺激培养HCCLM3细胞48 h,IL-6 mRNA与蛋白质的表达升高,STAT3^Tyr705磷酸化增强,侵袭迁移的细胞增多,分泌至胞外的IL-6浓度也有所升高;随浓度增加,1 000 ng/ml GLA对IL-6的表达、STAT3磷酸化及细胞侵袭迁移表现出明显的抑制作用。结论GLA能够调节HCCLM3细胞IL-6的表达,并通过IL-6影响STAT3信号通路的活化,作用效果与剂量密切相关。

关键词：蓝萼甲素白细胞介素-6 信号转导与转录激活因子3 肝癌

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IFI16在HTLV-1阳性T细胞中对病毒蛋白和促炎因子表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第9期39卷 668-673页

作者：崔钰晗关宇鹤刘月张葛陈凡陈蒙蒙孙静靓任晓文杨波王洁新乡医学院河南省免疫与靶向药物重点实验室453003 新乡医学院医学检验学院科研创新班 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003

目的探讨DNA识别受体干扰素诱导蛋白16(IFI16)在成人T淋巴细胞白血病1型病毒(HTLV-1)阳性T细胞中对HTLV-1病毒蛋白和促炎因子表达的影响。方法在不同的HTLV-1阳性T细胞系中,采用免疫印迹试验检测IFI16在HTLV-1阳性T细胞中的表达变化;构... 详细信息

目的探讨DNA识别受体干扰素诱导蛋白16(IFI16)在成人T淋巴细胞白血病1型病毒(HTLV-1)阳性T细胞中对HTLV-1病毒蛋白和促炎因子表达的影响。方法在不同的HTLV-1阳性T细胞系中,采用免疫印迹试验检测IFI16在HTLV-1阳性T细胞中的表达变化;构建IFI16基因沉默siRNA并用免疫印迹检测其IFI16敲低表达的效率;用siRNA在HTLV-1阳性T细胞系中敲低IFI16表达后,通过real-time PCR和采用免疫印迹分别检测HTLV-1病毒蛋白Tax在mRNA和蛋白质水平上的表达量;并通过real-time PCR检测干扰素(IFN)-α、IFN-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和HTLV-1病毒基因Tax以及Env的表达量。结果与HTLV-1病毒阴性T细胞Jurkat相比,IFI16在HTLV-1阳性T细胞MT2、MT4以及C8166中表达均增高;在MT2和MT4细胞中用siRNA敲低IFI16表达后,HTLV-1病毒蛋白Tax表达量上升,IFN-α、IFN-γ以及TNF-α的表达量下降。结论在HTLV-1病毒稳定感染的MT2和MT4细胞中,IFI16表达量上升,从而促进干扰素和促炎因子的产生,进而抑制HTLV-1病毒蛋白的表达。

关键词： IFI16 成人T淋巴细胞白血病病毒1型干扰素 T淋巴细胞肿瘤坏死因子-α

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cGAS识别HTLV-1反转中间体并诱导STING依赖性的固有免疫应答

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第3期39卷 168-173页

作者：刘月崔钰晗宋迪关宇鹤陈凡陈蒙蒙杨波王洁新乡医学院河南省免疫与靶向药物重点实验室453003 新乡医学院医学检验学院科研创新班 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检... 详细信息

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检测cGAS与ssDNA90的相互作用;将HeLa细胞与HTLV-1阳性细胞系MT2共培养,采用免疫共沉淀的方法检测cGAS与干扰素基因刺激蛋白(STING)的相互作用;采用siRNA的方法在HeLa细胞中敲减STING,24 h后再转染入cGAS表达质粒,24 h后与MT2细胞共培养24 h,real-time PCR实验检测HeLa细胞中干扰素(IFN)-β、调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、HTLV-1病毒蛋白Tax、p19以及HBZ的表达,免疫印迹检测HeLa细胞中干扰素调节因子3(IRF3)和p65的磷酸化水平。结果cGAS与ssDNA90存在相互作用;cGAS与STING存在相互作用,且作用部位在胞质中;在敲减STING的HeLa细胞中,cGAS过表达对IFN-β、RANTES和TNF-α的表达量无明显影响,对HTLV-1病毒蛋白Tax、p19和HBZ的表达量无明显影响,对IRF3和p65的磷酸化水平无明显影响。结论cGAS可结合HTLV-1的反转中间体ssDNA90并通过STING激活固有免疫应答。

关键词：环鸟苷酸-腺苷酸合成酶成人T淋巴细胞白血病病毒1型干扰素基因刺激蛋白 DNA识别受体反转中间体

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cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第6期38卷 434-439页

作者：郭志祥宋迪刘月崔钰晗马玲玲关宇鹤杨波王洁新乡医学院河南省免疫与靶向药物重点实验室 453003 新乡医学院医学检验学院科研创新班 453003 新乡医学院河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心 453003

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞，采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞... 详细信息

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞，采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化；将cGAS表达质粒，转染入HeLa细胞，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平；采用siRNA的方法在HeLa和佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）诱导分化的THP1（PMA-THP1）细胞中沉默cGAS的表达，24 h后再转染入ssDNA90，real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达，免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平。结果ssDNA90转染后，HeLa细胞中cGAS的表达升高；转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加，IRF3和p65的磷酸化水平升高；沉默cGAS表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比，在ssDNA90刺激后，IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低，IRF3和p65的磷酸化水平下降。结论cGAS在HTLV-1的反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能。

关键词：环鸟苷酸-腺苷酸合成酶成人T淋巴细胞白血病病毒1型 DNA识别受体反转中间体固有免疫应答

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长链非编码RNA HOTAIR通过调控PIK3R3促进肝癌HepG2细胞的转移和侵袭

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中国病理生理杂志 2016年第10期32卷 1775-1781页

作者：张婧婧吴伟王鹏杨景瑞段巨洪于海川新乡医学院医学检验学院和分子诊断与医学检验技术河南省协同创新中心河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院河南新乡453003

目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)对肝癌Hep G2细胞转移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化技术检测磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)在正常肝脏组织和肝癌组织的表达;运... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)对肝癌Hep G2细胞转移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化技术检测磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)在正常肝脏组织和肝癌组织的表达;运用q PCR和Western blot检测慢病毒LV3-sh HOTAIR和LV3-sh PIK3R3对HOTAIR和PIK3R3基因的沉默效率;Transwell侵袭实验检测HOTAIR和PIK3R3的表达对肝癌细胞Hep G2侵袭能力的影响;划痕实验检测HOTAIR和PIK3R3的表达对肝癌细胞Hep G2迁移能力的影响;q PCR检测沉默HOTAIR和PIK3R3后miR-214的表达;q PCR检测转染miR-214 mimics和miR-214 inhibitor后HOTAIR和PIK3R3的表达;双萤光素酶报告基因系统检测miR-214对HOTAIR和PIK3R3转录活性的影响。结果:和正常肝组织比较,PIK3R3在肝癌组织中的表达明显增加;沉默HOTAIR和PIK3R3基因后,肝癌细胞株Hep G2的侵袭和转移能力明显降低;沉默HOTAIR和PIK3R3基因后,miR-214表达上调;转染miR-214 mimics后,HOTAIR和PIK3R3的表达降低;转染miR-214 inhibitor后,HOTAIR和PIK3R3的表达上调;双萤光素酶报告基因系统检测结果显示miR-214可以直接调控HOTAIR和PIK3R3的转录活性。结论:HOTAIR可以通过miR-214调控PIK3R3的表达。

关键词： HOX转录反义RNA 肝癌磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3

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细胞自噬对HTLV-1在HeLa细胞中复制动力学的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第3期37卷 208-212页

作者：黄青松丁自强牛志国王婷婷侯小美毛璐爽吕若涵李泽黄新祥王辉江苏大学医学院镇江212013 新乡医学院医学检验学院免疫学研究中心 453003 新乡医学院医学检验学院科研创新班 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003

目的探讨成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后的复制动力学及其对宿主细胞状态的影响。方法将HTLV-1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、凋亡相关蛋白caspase-3/9、... 详细信息

目的探讨成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）感染后的复制动力学及其对宿主细胞状态的影响。方法将HTLV-1病毒阳性细胞系MT2与HeLa细胞进行共培养，获得病毒早期感染模型，免疫印迹检测病毒核心蛋白p19、凋亡相关蛋白caspase-3/9、自噬相关蛋白LC3；real-time PCR检测病毒载量；荧光素酶活性检测3′长末端重复序列（3′-LTR）转录活性；免疫荧光检测自噬体数目。结果通过细胞共培养成功模拟了早期病毒感染；共培养后4 h、8 h、16 h、24 h、36 h，病毒核酸载量及长末端重复序列3′-LTR转录活性逐渐增加（P〈0.01），24-36 h达到平台期；而核心蛋白p19的表达4 h可以检测到，但8 h后降低，16 h后又升高，24 h和36 h差异无统计学意义；病毒感染后宿主细胞中caspase-3/7/9的活性及蛋白没有明显变化（P〉0.05），但是自噬相关蛋白LC3B/LC3A比例逐渐上升，伴有胞内自噬体数目的增加（P〈0.01）。结论HTLV-1病毒复制动力学与宿主细胞的自噬密切相关。

关键词：成人T淋巴细胞白血病病毒1型复制动力学细胞凋亡细胞自噬

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甘露聚糖结合凝集素(MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节作用及机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第2期40卷 122-128页

作者：杨泳慧杨婧文李志欣孙彦威杨易孟张伟王凡平于莉莉王明永新乡医学院医学检验学院 453003 新乡医学院国际教育学院 453003 新乡医学院基础医学院 453003 河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡453003 新乡市免疫调控与分子诊断重点实验室 453003

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节及其机制。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,同时给予不同浓度的MBL(0、1、10、20μg/ml)干预。CCK-8法检测细胞增殖能力变化,油红O染色... 详细信息

目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化的调节及其机制。方法体外诱导3T3-L1前脂肪细胞成脂分化,同时给予不同浓度的MBL(0、1、10、20μg/ml)干预。CCK-8法检测细胞增殖能力变化,油红O染色和细胞内甘油三酯含量测定法分析脂质积累情况。Western blot及qRT-PCR检测脂肪细胞成脂分化相关因子PPARγ及C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平。Western blot分析脂肪合成调控信号分子Akt的表达及磷酸化。结果实验组各浓度MBL(0、1、10、20μg/ml)对3T3-L1前脂肪细胞增殖都无影响。3T3-L1前脂肪细胞诱导分化3 d,甘油三酯检测发现MBL处理组细胞内甘油三酯水平下降,并呈剂量依赖关系;油红O染色结果进一步显示,MBL处理组的脂滴数量显著减少,吸光度值也显著降低,同样呈现浓度依赖关系。Western blot及qRT-PCR检测结果证实,MBL处理组PPARγ和C/EBPα的蛋白质及mRNA表达水平均显著下降,呈剂量依赖性。在MBL干预下,Akt的磷酸化水平也明显下调。结论MBL通过Akt信号通路调控3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化。

关键词：甘露聚糖结合凝集素 3T3-L1前脂肪细胞 Akt 成脂分化

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分子流行病学进展——机遇和挑战

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中华流行病学杂志 2016年第8期37卷 1059-1062页

作者：段广才陈帅印郑州大学公共卫生学院 450001 新乡医学院分子诊断与医学检验技术河南省协同创新中心 453003

分子流行病学是流行病学的分支，是流行病学和分子生物学的交叉学科。分子流行病学主要通过对生物标志的研究，在分子水平阐明疾病的分布、发生、发展规律及其影响因素。随着人类基因组学、精准医学、大数据等领域的快速发展，给分子流... 详细信息

分子流行病学是流行病学的分支，是流行病学和分子生物学的交叉学科。分子流行病学主要通过对生物标志的研究，在分子水平阐明疾病的分布、发生、发展规律及其影响因素。随着人类基因组学、精准医学、大数据等领域的快速发展，给分子流行病学提供了新的发展机遇和挑战。

关键词：分子流行病学流行病学研究

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