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鸡源Wnt3a融合蛋白表达载体的构建及其对鸡胚脊髓神经前体细胞增殖和轴突形成的影响

解剖学报 2017年第1期48卷 7-13页

作者：李秋玲杨慈清张必超朱少义林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的构建鸡源Wnt3a融合蛋白真核表达载体(pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP),并探讨其在鸡胚脊髓发育过程中超表达后对神经前体细胞增殖及轴突形成的影响。方法利用分子生物学手段,提取鸡胚脊髓总RNA并获得Wnt3a片段,将其克隆到pCAG-MCs-EGFP载体中... 详细信息

目的构建鸡源Wnt3a融合蛋白真核表达载体(pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP),并探讨其在鸡胚脊髓发育过程中超表达后对神经前体细胞增殖及轴突形成的影响。方法利用分子生物学手段,提取鸡胚脊髓总RNA并获得Wnt3a片段,将其克隆到pCAG-MCs-EGFP载体中构建pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体。在鸡胚发育至2.5~3d(E2.5~E3)时,利用鸡胚活体电转技术将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP(实验组)和pCAG-MCs-EGFP(对照组)质粒分别转入鸡胚脊髓,E4时取材切片,每组5个胚胎组织,采用免疫荧光染色技术检测Wnt3a和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达变化分析Wnt3a与细胞增殖间的关系,根据载体自发绿色荧光蛋白(GFP)观察脊髓神经前体细胞轴突生成情况。结果 pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体基因测序结果与Gene bank中基因序列一致,将pCAGMCs-Wnt3a-EGFP导入鸡胚脊髓中发现绿色荧光。在脊髓组织切片水平上,免疫荧光染色结果表明,Wnt3a在鸡胚脊髓中能够超表达。Wnt3a超表达后,与对照组比较,含有轴突的神经元数量明显减少(n=3,P<0.01),而PCNA的表达量显著增加(n=3,P<0.01)。结论成功构建了鸡源性Wnt3a融合蛋白真核表达载体,并证实Wnt3a在鸡胚发育过程中促进神经前体细胞的增殖并抑制轴突的形成。

关键词： Wnt3a 增殖轴突形成活体原位电转免疫荧光鸡胚

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不同发育时段大鼠心肌组织中HCN4阳性细胞的分布特征

不同发育时段大鼠心肌组织中HCN4阳性细胞的分布特征

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中国解剖学会2018年年会

作者：张亚南任明芬郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡 453003 新乡医学院第二附属医院心内科新乡 453003

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河南地区汉族人群ADAMTS7基因多态性与冠心病相关性分析

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解剖学杂志 2018年第6期41卷 682-686页

作者：郭永龙冯颖王建发常玉巧赵国安郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453000 新乡医学院第一附属医院心内科新乡453000 新乡医学院第三附属医院心内科新乡453000

目的:研究河南地区汉族人群含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7(ADAMTS7)基因rs3825807和rs4380028位点单核苷酸多态性(SNP)与冠心病易感性、病变程度间的关系。方法:提取经冠状动脉造影或冠状动脉电子计算机断层扫描成像... 详细信息

目的:研究河南地区汉族人群含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7(ADAMTS7)基因rs3825807和rs4380028位点单核苷酸多态性(SNP)与冠心病易感性、病变程度间的关系。方法:提取经冠状动脉造影或冠状动脉电子计算机断层扫描成像(CTA)确诊的416例冠心病患者及同期270例健康体检人群的全血基因组DNA,采用PCR扩增测序确定rs3825807和rs4380028位点的基因型,分析单核苷酸多态性与冠心病易感性、冠状动脉病变程度(Gensini评分量化)、颈动脉内膜厚度(超声检测)及其斑块数量间的关系。结果:在rs3825807位点中,等位基因T增加冠心病易感性,即使调整性别、年龄、高血压、吸烟等危险因素后差异仍具有统计学意义;在rs4380028位点中,等位基因G与冠心病易感性无相关性,调整危险因素后差异无统计学意义。rs3825807位点中的等位基因T与Gensini评分、颈动脉内膜厚度呈正相关,与颈动脉斑块数量无相关性;rs4380028等位基因G与Gensini评分、颈动脉内膜厚度无相关性,但与颈动脉斑块数量相关。结论:ADAMTS7的rs3825807等位基因T是冠心病的危险等位基因,增加冠心病易感性,主要是通过使血管内膜增厚影响冠状动脉病变程度;rs4380028等位基因G可能与动脉粥样硬化斑块数量有关,ADAMTS7的SNPs参与冠心病的发生发展。

关键词：含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7 单核苷酸多态性 Gensini积分冠状动脉粥样硬化

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大鼠急性心肌梗死后干细胞抗原-1和Nanog阳性细胞的动态变化

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解剖学报 2017年第4期48卷 457-462页

作者：杨黎晓任明芬郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第二附属医院心内科河南新乡453003

目的观察大鼠急性心肌梗死后心肌干细胞在梗死病程中的动态变化。方法成年SD大鼠50只,结扎冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型,在术前及术后1周、2周、3周和4周分别检测心功能指标:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒... 详细信息

目的观察大鼠急性心肌梗死后心肌干细胞在梗死病程中的动态变化。方法成年SD大鼠50只,结扎冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型,在术前及术后1周、2周、3周和4周分别检测心功能指标:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)和左室后壁舒张末期厚度(LVPWT)。取各组大鼠新鲜心脏,石蜡切片、Masson染色,确定心肌梗死的病理变化。利用免疫组织化学技术对各组心脏切片进行免疫染色,观察干细胞抗原-1(Sca-1)、Nanog阳性心肌干细胞的动态变化。对每组切片阳性表达的细胞数进行定量分析。利用Western blotting技术观察Sca-1、Nanog的蛋白含量。结果大鼠心功能于术后1周开始降低,自第3周稳定于较低水平;Masson染色显示心肌梗死区域瘢痕组织明显,证实模型制备成功;免疫组织化学结果显示,Sca-1、Nanog阳性心肌干细胞数量在2周时上升至高峰,随后下降。结论 Sca-1、Nanog阳性心肌干细胞在心肌梗死病理演变过程中呈先上升后下降的趋势,提示心肌干细胞在心肌损伤和修复过程中发挥了重要作用。

关键词：心脏干细胞抗原-1 Nanog 心肌梗死免疫组织化学大鼠

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脂多糖损伤黑质导致迷走神经背核DR1和DR2表达变化

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中国临床解剖学杂志 2017年第3期35卷 286-290页

作者：连辉张毅敏付升旗王志勇河南省医用组织再生重点实验室新乡医学院人体解剖学教研室新乡医学院人体解剖学实验室河南新乡453003

目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤大鼠黑质(substantia nigra,SN)后迷走神经背核(dorsal motor nucleus of the vagus,DMV)中酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和多巴胺受体1(dopamine receptor 1,DR1)和多巴胺受体2(dopamine receptor 2,DR2)的表达变化。方法 30只SD大鼠根据随机数字表分为LPS大鼠组和对照组。LPS大鼠组双侧SN内注射LPS,对照组双侧SN内注射等体积的生理盐水。6周后进行转棒实验,检测胃排空能力,免疫荧光和免疫印迹检测SN内TH和DMV内TH、DR1和DR2的表达。结果经鉴定LPS组大鼠造模成功,胃排空能力降低,DMV中TH阳性细胞数量从(7±3)个增加到(12±2)个(P<0.05),DR1阳性细胞数量从(28±5)个减少到(18±6)个(P<0.05),DR2阳性细胞数量从(20±3)个增加到(33±4)个(P<0.05)。背侧延髓内,TH蛋白表达水平从(0.16±0.02)增多到(0.43±0.04)(P<0.05),DR1的蛋白表达水平从(0.78±0.05)下降至(0.36±0.03)(P<0.05),DR2的蛋白表达水平从(0.43±0.03)增加至(0.58±0.07)(P<0.05)。结论 LPS大鼠DMV中TH、DR1和DR2表达变化可能与帕金森病患者的胃排空障碍存在一定的联系。

关键词：脂多糖迷走神经背核多巴胺受体1 多巴胺受体2

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C1型尼曼-匹克症小鼠脊髓胶质细胞的活性变化

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解剖学报 2017年第3期48卷 260-265页

作者：杨恩慧乔梁林俊堂闫欣新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的通过观察C1型尼曼-匹克症小鼠不同脊髓节段星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化,探讨Npc1基因突变对脊髓发育的影响。方法 Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生Npc^(1-/-)(n=3)和Npc1^(+/+)小鼠(n=3),PCR检测新生小鼠的基因型;选取35日龄的N... 详细信息

目的通过观察C1型尼曼-匹克症小鼠不同脊髓节段星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化,探讨Npc1基因突变对脊髓发育的影响。方法 Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生Npc^(1-/-)(n=3)和Npc1^(+/+)小鼠(n=3),PCR检测新生小鼠的基因型;选取35日龄的Npc1^(-/-)和Npc1^(+/+)小鼠,采用免疫荧光方法观察对比脊髓不同节段(颈、胸、腰、骶)星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化。采用免疫双染色检测胶质细胞中炎性因子的表达情况,采用免疫印迹方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、SMI31和磷酸化的tau蛋白表达情况。结果在35日龄Npc1^(-/-)小鼠脊髓的各个节段,其背角和腹角的星形胶质细胞和小胶质细胞的活性均明显增强(P<0.05),并伴随细胞炎性因子IL-1β表达量的显著增加;同时,脊髓神经丝蛋白和骨架蛋白tau蛋白发生超磷酸化。结论 Npc1基因突变引起脊髓神经胶质细胞发生病理性变化,可能是脊髓神经元病理性损伤的重要原因。

关键词： C1型尼曼-匹克症脊髓星形胶质细胞小胶质细胞免疫印迹法小鼠

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心肌微环境与5-氮杂胞苷诱导脂肪间充质干细胞心肌分化的差异（英文）

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解剖学报 2017年第5期48卷 538-544页

作者：郭志坤常丹阳刘玲玲李琼新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡市中心医院心内科河南新乡453000

目的探讨体内心肌微环境及体外5-氮杂胞苷(5-aza)诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用差异。方法取小鼠腹股沟的皮下脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs),对其进行表面标记和成骨、成脂分化能力鉴定。选取生长状态良好的... 详细信息

目的探讨体内心肌微环境及体外5-氮杂胞苷(5-aza)诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞的作用差异。方法取小鼠腹股沟的皮下脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs),对其进行表面标记和成骨、成脂分化能力鉴定。选取生长状态良好的第3代ADMSCs,分为5-aza体外诱导组、体内心肌移植组,体外诱导3周以及体内移植1周后,采用免疫荧光技术检测特异性心肌肌钙蛋白T(cT nT)的表达。结果两种诱导方法ADMSCs均表达cT nT,5-aza诱导组3周表达率(33.33±3.79)%,移植组1周表达率(42.93±4.04)%,移植组1周较5-aza诱导组3周具有更高的分化效率(P<0.05)。结论体外5-aza化学诱导和体内心肌微环境均可使ADMSCs分化为心肌样细胞,但心肌微环境的诱导分化效率明显高于5-aza的作用。

关键词：心肌肌钙蛋白T 5-氮杂胞苷脂肪间充质干细胞心肌微环境免疫荧光小鼠

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6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化

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中国病理生理杂志 2017年第6期33卷 975-980页

作者：张毅敏连辉宋海岩周立蔡君艳王志勇新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 东南大学附属中大医院江苏南京210009

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组... 详细信息

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P<0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P<0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P<0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P<0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P<0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P<0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P<0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P<0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P<0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。

关键词： 6-羟多巴弓状核酪氨酸羟化酶离子钙接头蛋白1 阿片-促黑素皮质素原

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C1型尼曼-匹克病小鼠生长繁殖及血液生理生化指标的测定分析

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中国实验动物学报 2017年第3期25卷 250-255页

作者：乔梁杨恩慧杨记超顾巧美董宏天林俊堂闫欣新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠(Npc1^(-/-)小鼠)的生长繁殖及血液生理生化指标,为开展NPC1病人的研究提供理论性的基础资料。方法 (1)选取0~77日龄Npc1^(-/-)、Npc1^(+/-)和Npc1+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;(2)Npc1^(... 详细信息

目的测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠(Npc1^(-/-)小鼠)的生长繁殖及血液生理生化指标,为开展NPC1病人的研究提供理论性的基础资料。方法 (1)选取0~77日龄Npc1^(-/-)、Npc1^(+/-)和Npc1+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;(2)Npc1^(-/-)小鼠由Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生,统计Npc1^(+/-)小鼠连续4代的繁殖数据;(3)检测60日龄Npc1^(-/-)和Npc1+/+小鼠的血液生理生化指标。结果 (1)Npc1^(-/-)小鼠的体重在7周前随着日龄的增加而增加,7周后随着日龄的增加而减少,直至11周左右死亡。Npc1+/+和Npc1^(+/-)小鼠的体重均随着日龄的增长而逐渐增加,两者之间并没有显著差别。4周后雄性比雌性体重增加明显比雌性小鼠快;(2)Npc1^(+/-)小鼠不同代内交配分娩间隔、窝产仔数、离乳仔数、离乳仔数中雌雄数量及阳性数量差异无显著性(P>0.05),而第2代的离乳率明显大于第1代(P<0.05);(3)Npc1^(-/-)和Npc1+/+小鼠血液生理指标中平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均过氧化物酶指数(MPXI)差异有显著性(P<0.05),其余差异无显著性(P>0.05)。生化指标中尿素(UREA)差异有极显著性(P<0.01),而天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(GLU)、乳酸脱氢酶(LDH)、钾(K)和铜(Cu)等差异有显著性(P<0.05),其余差异无显著性(P>0.05)。结论 (1)Npc1^(-/-)、Npc1^(+/-)和Npc1+/+小鼠的生长曲线因基因型和性别的不同而存在差异;(2)Npc1^(+/-)小鼠不同代的繁殖能力差异无显著性;(3)Npc1^(-/-)和Npc1+/+小鼠的部分血液生理生化指标差异有显著性。

关键词： C1型尼曼-匹克病,小鼠生长曲线繁殖血液参数

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不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系

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广东医学 2017年第z2期38卷 13-16页

作者：胡春阳殷国田余悦欣新乡医学院第三附属医院心内科河南新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系。方法 SD大鼠共30只,分为幼年组(20~25日龄)、青年组(3~5月龄)和老年组(13~15月龄),每组10只,采用左冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死模型,Visual Sonic小动物超声成... 详细信息

目的探讨不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系。方法 SD大鼠共30只,分为幼年组(20~25日龄)、青年组(3~5月龄)和老年组(13~15月龄),每组10只,采用左冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死模型,Visual Sonic小动物超声成像系统测定术后1周左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)和左室舒张/收缩末期内径(LVIDd,LVIDs)。石蜡切片行Masson染色,免疫组织化学检测梗死区Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)、Ⅲ型胶原纤维(COLⅢ)表达。结果随着年龄增长,梗死区域COLⅠ、COLⅢ表达逐渐增多,其间的心肌细胞逐渐减少;梗死后1周LVEF幼年组(59.63±3.21)%、青年组(41.46±4.16)%和老年组(39.38±2.60)%(P<0.01)。结论急性心肌梗死后早期心功能的降低与梗死区胶原纤维的增多有关,且年龄越大越显著。

关键词：心肌梗死心功能 Ⅰ型胶原纤维 Ⅲ型胶原纤维大鼠

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