检索结果-内蒙古大学图书馆

临床心血管病杂志 2016年第3期32卷 287-290页

作者：刘振李硕刘玲玲郭志坤王鹏飞新乡市中心医院河南新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室

目的:研究c-kit与microRNA-21基因在大鼠左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常对照组和心衰模型组。心衰模型制作:4 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周1次,共6周。正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。在... 详细信息

目的:研究c-kit与microRNA-21基因在大鼠左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常对照组和心衰模型组。心衰模型制作:4 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周1次,共6周。正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。在8周时对大鼠进行心功能检测,证明心衰形成。取心脏组织,冰冻切片,利用免疫组织化学、免疫荧光显色、RT-PCR等技术检测心肌组织中microRNA-21和c-kit的基因表达变化。结果:HE染色示:各个时间点呈现不同的病理学变化;对照组未出现心肌梗死表现。免疫组织化学和免疫荧光显示:在正常和心衰心肌中microRNA-21阳性细胞主要表达于血管内皮,少量心肌细胞和干细胞,而在心衰心肌组织中的表达量明显减少;c-kit阳性细胞常成群分布,主要聚集于心外膜及其附近,心衰后表达量较正常心肌明显减少。在两组心肌组织中均有少数细胞存在microRNA-21和c-kit共表达。RT-PCR结果显示:心衰模型组c-kit和microRNA-21表达比正常对照组明显减少(P<0.05)。结论:阿霉素致大鼠左室重构的心肌内c-kit和microRNA-21阳性干细胞减少,其表达异常与左室重构具有高度的相关性且存在一定的内在联系。

关键词： c-kit microRNA-21 免疫组织化学免疫荧光心室重构

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损伤双侧黑质引发体脂减少可能与弓状核神经肽-Y和阿片-促黑素皮质素原的表达变化有关

损伤双侧黑质引发体脂减少可能与弓状核神经肽-Y和阿片-促黑素皮...

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中国生理学会内分泌代谢、比较生理与应激生理学术会议

作者：张毅敏洪丰周立王志勇朱进霞新乡医学院河南医用组织再生重点实验室首都医科大学生理学与病理生理学系

目的帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种以黑质(substantia nigra,SN)多巴胺能神经元退行性变为特征的疾病,脂肪减少引起的消瘦是PD病人常见的一种非运动功能紊乱的表现。然而,机制尚不清楚。弓状核(arcuate nucleus,Arc)中的... 详细信息

目的帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种以黑质(substantia nigra,SN)多巴胺能神经元退行性变为特征的疾病,脂肪减少引起的消瘦是PD病人常见的一种非运动功能紊乱的表现。然而,机制尚不清楚。弓状核(arcuate nucleus,Arc)中的神经肽-Y(NeuropeptideY,NPY)与阿片-促黑素皮质素原(pro-opiomelanocortin,POMC)可以通过交感神经调控糖脂代谢,也可作为感受外周糖脂代谢水平变化的靶点,通过神经-代谢环路,调控机体的能量平衡与血糖稳定。我们前期研究发现黑质与下丘脑、篮斑等有往返纤维投射,而且多巴胺受体广泛存在于包括弓状核在内的下丘脑。黑质损伤可能通过弓状核的NPY/POMC神经元影响6-OHDA大鼠脂肪代谢进而改变其脂肪含量。本研究拟观察SN损伤后Arc中酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)、多巴胺受体、NPY和POMC等与脂肪调控相关的主要蛋白的表达变化,为PD病人脂肪代谢紊乱发生的机制提供线索。方法 50只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和免疫印迹检测SN内TH,Arc内TH、NPY、POMC和多巴胺受体(D1,D2)的表达。结果(1)与对照组相比,6-OHDA大鼠体重与摄食量无显著性差异,但是腹膜后和附睾脂肪重量显著减少。(2)与对照组相比,6-OHDA大鼠腹膜后脂肪激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)与p-HSL蛋白表达显著增加,脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白表达显著降低。腹膜后脂肪组织中TH以及β3肾上腺素受体(beta3-adrenergic receptor,β3-AR)的表达显著增加。同时,弓状核中NPY表达减少、POMC表达增加。(3)在弓状核中,D1、D2均广泛表达在NPY、POMC神经元上,6-OHDA大鼠弓状核中D1表达增加,D2表达减少,同时,TH的显著降低,而NPY减少、POMC增加。结论1)黑质多巴胺能神经元损伤可以引起下丘脑弓状核NPY/POMC的变化,后者可能通过增强交感神经活性引发脂肪分解。2)Arc中NPY和POMC的变化可能受黑质DA-弓状核DA受体(D1、D2)通路调控。

关键词：弓状核促黑素神经肽多巴胺受体 NPY 皮质素

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钙激活的氯离子通道Anoctamin 5在骨骼肌发育过程中的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2016年第3期34卷 318-321页

作者：宋海岩张毅敏周立田岳民付升旗新乡医学院基础医学院人体解剖学教研室河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨钙依赖的氯离子通道Anoctamin5在骨骼肌发育过程中的可能作用。方法采用RT-PCR检测Anoctamin5 m RNA在小鼠骨骼肌发育的不同时期的表达变化,同时,采用免疫荧光,Western blot的方法检测Anoctamin 5蛋白在小鼠骨骼肌发育不同时期... 详细信息

目的探讨钙依赖的氯离子通道Anoctamin5在骨骼肌发育过程中的可能作用。方法采用RT-PCR检测Anoctamin5 m RNA在小鼠骨骼肌发育的不同时期的表达变化,同时,采用免疫荧光,Western blot的方法检测Anoctamin 5蛋白在小鼠骨骼肌发育不同时期的表达变化。结果 Anoctamin5m RNA与蛋白在1 d至6月的小鼠骨骼肌中均有表达,但随着年龄的增长,Anoctamin5 m RNA与蛋白的表达呈逐渐降低的趋势。结论 Anoctamin5在骨骼肌的发育过程中发挥着重要的作用,也可能参与骨骼肌的分化、增殖及损伤修复,这也与Anoctamin5突变的病人出现症状较晚相一致。

关键词： Anoctamin5 骨骼肌发育表达

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淫羊藿苷对经血源性子宫内膜干细胞成心肌样细胞分化的影响

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中国细胞生物学学报 2016年第11期38卷 1373-1381页

作者：杨芬刘彦礼闫岩张大林吉祥林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

选择安全高效的诱导剂促进干细胞成心肌样细胞分化,将为干细胞治疗心脏疾病提供更佳的种子细胞,加强干细胞治疗效果。该研究重在明确淫羊藿苷(icariin,ICA)对经血源性子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Me... 详细信息

选择安全高效的诱导剂促进干细胞成心肌样细胞分化,将为干细胞治疗心脏疾病提供更佳的种子细胞,加强干细胞治疗效果。该研究重在明确淫羊藿苷(icariin,ICA)对经血源性子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men ESC)成心肌样细胞分化的影响。首先,通过MTT法和划痕实验检测ICA对Men ESC增殖和迁移的影响。RT-PCR检测ICA与5氮杂胞苷(5azacytidine,5aza C)诱导前后心肌特异性转录调控因子肌细胞增强因子-2C(myocyte enhancer factor-2C,MEF-2C)、NK2转录因子相关蛋白5(NK2 transcription factor related locus 5,Nkx2.5)、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)以及心肌特异性标志物人类心房钠尿肽(human atrial natriuretic peptide,h ANP)、肌钙蛋白I(cardiac tropomin I,c Tn I)、肌钙蛋白T(cardiac tropomin T,c Tn T)基因的表达水平。免疫荧光检测ICA与5aza C诱导后细胞中c Tn T的蛋白质水平表达。结果表明,ICA对Men ESC的增殖和迁移无显著性影响;进一步发现,ICA与5aza C诱导Men ESC后,均能显著上调MEF-2C、Nkx2.5、GATA4、h ANP、c Tn I及c Tn T基因的表达;而最终的免疫荧光结果也证实,ICA诱导后的Men ESC阳性表达c Tn T。综上所述,ICA可在不影响Men ESC增殖和迁移活性的基础上促进其成心肌样细胞分化,为Men ESC在临床上治疗心脏疾病提供新途径。

关键词：经血源性子宫内膜干细胞淫羊藿苷心肌分化心脏疾病

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新生大鼠心telocytes的形态学和蛋白标记

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解剖学报 2016年第5期47卷 633-637页

作者：甘黎常玉巧张三林牛艳菲余霞郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 解放军第371中心医院心血管内科河南新乡4530030

目的探讨新生大鼠心telocytes(TCs)的形态学特征并验证其是否表达神经细胞、神经胶质细胞的特异性标记。方法酶消化法培养新生大鼠原代细胞,免疫细胞化学、扫描电子显微镜鉴定TCs,免疫荧光技术检测TCs的神经细胞和神经胶质细胞的蛋白表... 详细信息

目的探讨新生大鼠心telocytes(TCs)的形态学特征并验证其是否表达神经细胞、神经胶质细胞的特异性标记。方法酶消化法培养新生大鼠原代细胞,免疫细胞化学、扫描电子显微镜鉴定TCs,免疫荧光技术检测TCs的神经细胞和神经胶质细胞的蛋白表达。新生大鼠大脑组织免疫组织化学染色作为阳性对照。结果免疫组织化学检测显示波形蛋白(vimentin)表达阳性,免疫荧光检测vimentin和CD34共表达,但TCs内神经元特异性烯醇化酶(NSE)、GFAP、OX42、2’3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(CNpase)表达阴性。扫描电子显微镜下TCs形态清晰典型,特征形态明显。结论大鼠心TCs虽然具有与神经细胞类似的形态,但其并不具有神经细胞的特性。

关键词： Telocyte 神经细胞神经胶质细胞原代细胞培养新生大鼠

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肾性高血压大鼠左心室整合素β1和黏着斑激酶的表达

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解剖学报 2016年第3期47卷 391-395页

作者：田香勤刘迎春蔡新华新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中整合素β1(integrinβ1)和黏着斑激酶(FAK)的表达变化。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,40只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、术后2周组、术后5周组和术后7周组,血压及左心室重量指数评... 详细信息

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中整合素β1(integrinβ1)和黏着斑激酶(FAK)的表达变化。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,40只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、术后2周组、术后5周组和术后7周组,血压及左心室重量指数评价造模成功后,取左心室组织,采用HE染色观察心肌细胞的形态变化,免疫组织化学和Western blotting检测各组左心室肌组织integrinβ1和FAK的表达。结果 HE染色结果显示,实验组大鼠左心室组织的心肌纤维走向紊乱,心肌细胞间隙变大;integrinβ1和FAK蛋白分别表达于心肌细胞膜和心肌细胞质近膜区,呈线样或细颗粒状分布;integrinβ1的表达强度在术后随时间呈逐渐上升趋势,至5周组趋于平稳;FAK在2周组的表达强度相对于假手术组明显下降(P<0.01),实验组随术后时间增加表达量增强;Western blotting结果显示,integrinβ1和FAK在各手术组的表达均明显高于假手术组(P<0.01),5周组较2周组下降明显(P<0.01),7周组和5周组差异不明显(P>0.05)。结论 Integrinβ1和FAK在心室肌的表达变化可能是高血压心肌肥厚的重要原因。

关键词：整合素β1 黏着斑激酶心肌肥厚肾性高血压免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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大鼠纤维化心肌组织中神经钙黏附素蛋白的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2016年第1期34卷 78-82页

作者：穆灵敏闫晓晓郑辉张光谋郭志坤新乡医学院形态学实验室新乡医学院第三附属医院新乡医学院生命科学技术学院细胞工程教研室河南省高等学校组织再生重点开放实验室新乡453003

目的研究异丙肾上腺素致大鼠心肌纤维化中神经钙黏附素(N-cadherin)蛋白在心肌组织中的表达,为探讨心肌纤维化的信号转导机制和逆转心肌纤维化提供形态学资料。方法健康成年SD大鼠注射ISO,造成心肌纤维化模型;取心肌组织,常规石蜡切片,M... 详细信息

目的研究异丙肾上腺素致大鼠心肌纤维化中神经钙黏附素(N-cadherin)蛋白在心肌组织中的表达,为探讨心肌纤维化的信号转导机制和逆转心肌纤维化提供形态学资料。方法健康成年SD大鼠注射ISO,造成心肌纤维化模型;取心肌组织,常规石蜡切片,Masson染色,观察心肌组织胶原纤维改变;免疫组织化学和免疫荧光染色检测N-cadherin的表达及分布;RT-PCR方法检测大鼠心肌组织的N-cadherin蛋白的m RNA的表达变化;利用图像分析软件对N-cadherin蛋白的免疫组化结果进行定量分析。结果免疫组化和免疫荧光结果显示,实验组与对照组相比N-cadherin蛋白表达位置存在动态变化,表达量无显著差异;RT-PCR方法检测大鼠心肌组织的N-cadherin m RNA的表达与免疫组化结果具有一致性。结论 N-cadherin蛋白可能是维持心肌结构和生理功能所必需的。

关键词：神经钙黏附素 N-cadherin 免疫组织化学免疫荧光心肌纤维化

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大鼠乳鼠皮肤成纤维细胞的分离和体外培养

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新乡医学院学报 2016年第2期33卷 96-100页

作者：韩瑞孙永琨新乡医学院基础医学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立大鼠乳鼠背部皮肤组织和尾尖部皮肤组织成纤维细胞的体外培养方法,并比较二者的区别。方法分别取大鼠乳鼠的背部和尾尖部皮肤组织,利用组织贴块法分离和培养皮肤成纤维细胞,用酶消化法进行细胞传代培养,采用梯度温度冻存细胞。... 详细信息

目的建立大鼠乳鼠背部皮肤组织和尾尖部皮肤组织成纤维细胞的体外培养方法,并比较二者的区别。方法分别取大鼠乳鼠的背部和尾尖部皮肤组织,利用组织贴块法分离和培养皮肤成纤维细胞,用酶消化法进行细胞传代培养,采用梯度温度冻存细胞。倒置显微镜下观察成纤维细胞的形态,用细胞骨架波形蛋白抗体进行鉴定。结果光学显微镜下3-5 d可见细胞从组织块游出,7 d细胞数量增多,10 d可贴满培养瓶壁;且大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞波形蛋白表达均为阳性。结论大鼠乳鼠背部和尾尖部来源的皮肤成纤维细胞的生物特点无差别,均可作为皮肤成纤维细胞的取材部位。

关键词：皮肤成纤维细胞原代培养组织贴块法细胞培养波形蛋白

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体外培养状态下心肌细胞有丝分裂的证据

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解剖学报 2015年第1期46卷 63-68页

作者：李辞霞卢杏郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨体外培养状态下心肌细胞有丝分裂、增殖的证据。方法分离新生大鼠心肌细胞,分别原代培养0h至12d;免疫荧光分别双标心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）、磷酸化组蛋白H3（H3P）和微管蛋白（tubulin）,利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处... 详细信息

目的探讨体外培养状态下心肌细胞有丝分裂、增殖的证据。方法分离新生大鼠心肌细胞,分别原代培养0h至12d;免疫荧光分别双标心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）、磷酸化组蛋白H3（H3P）和微管蛋白（tubulin）,利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处于分裂期的心肌细胞。结果原代培养的心肌细胞生长状态好、纯度高,可观察到分裂各期的心肌细胞及其微管蛋白的变化。处于分裂各期的心肌细胞不隆起变圆仍维持扁平状。分裂前期细胞核形状规则,染色质凝集,H3P开始表达;前中期核膜破裂,纺锤体形成;中期染色体排列在赤道面,纺锤体呈典型纺锤样;后期染色单体分开并移向两极;末期子核形成,平行微管聚结在两子核之间;胞质分裂期形成两个子细胞,两个细胞分开后,可见有少量微管呈丝状连接。原代培养1～12d的心肌细胞在整个细胞分裂图像中很少见到双核心肌细胞。培养第3天开始发现分裂象的心肌细胞,占总心肌细胞数的2/127（1.57%）和1/92（1.09%）,培养第7天,分裂细胞比率达3/69（4.35%）和5/163（3.07%）,培养第12天有2/100（2%）和0/60（0）的心肌细胞处于分裂期。结论体外培养的心肌细胞存在一定数量的完全有丝分裂,是心肌增殖和心肌再生的细胞学证据。

关键词：有丝分裂心肌细胞免疫荧光技术体外培养大鼠

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仔猪回肠绒毛M细胞的形态、分布及其与猪流行性腹泻病毒感染的关系

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畜牧兽医学报 2016年第3期47卷 581-586页

作者：李任峰田香勤乔松林郭军庆周恩民张改平河南科技学院动物科学学院新乡453003 农业部动物免疫学重点实验室河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002 河南农业大学牧医工程学院郑州450002 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室新乡453003

为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下P... 详细信息

为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下PEDV与仔猪回肠绒毛M细胞之间的关系。免疫荧光结果证实正常仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,沿隐窝至绒毛顶端上皮方向,M细胞的数量逐渐减少。电镜下,正常仔猪的回肠绒毛M细胞具有典型的M细胞特征。自然感染PEDV的仔猪回肠绒毛M细胞病变明显,在其顶膜、细胞质、细胞核及其上皮下层均观察到成簇的PEDV颗粒,而相邻的其他上皮细胞病变不明显,且细胞内没有观察到病毒粒子。以上研究结果表明,新生仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,在绒毛的不同位置其分布比例存在差异。仔猪回肠绒毛M细胞可能是PEDV入侵肠道的重要通道。

关键词：肠绒毛M细胞新生仔猪猪流行性腹泻病毒

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