检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2018年第10期38卷 739-747页

作者：孙钰椋杨记超何亚南任雅坤乔梁王聪睿刘彦礼林俊堂新乡医学院生命科学技术学院 453003 河南省医用组织再生重点实验室精神与神经研究院新乡医学院生物医学工程学院

目的探讨Ⅳpcl基因突变型（Npcl^-/-）和野生型（Npcl^＋/＋）小鼠免疫系统差异，从免疫学角度完善对C1型尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease type C1，NPCI）发病机制的研究，为人NPCI疾病的治疗提供重要支持。方法分别测量不同时间节... 详细信息

目的探讨Ⅳpcl基因突变型（Npcl^-/-）和野生型（Npcl^＋/＋）小鼠免疫系统差异，从免疫学角度完善对C1型尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease type C1，NPCI）发病机制的研究，为人NPCI疾病的治疗提供重要支持。方法分别测量不同时间节点Npc1^-/-与Npcl^＋/＋小鼠体重、胸腺及脾脏重量，计算胸腺与脾脏指数；血常规检测小鼠外周血白细胞数量；qPCR检测小鼠外周血白细胞细胞因子表达：流式细胞术检测小鼠外周血与脾脏中CD4^＋、CD8^＋和CDl9^＋淋巴细胞比例；免疫荧光及β-半乳糖苷酶染色检测小鼠脾脏的凋亡与衰老。结果与野生型小鼠相比，Day14±2时Npcl^-/-小鼠脾脏和胸腺重量差异无统计学意义，Day42±2时，Npc1^-/-小鼠脾脏重量显著增加，而胸腺重量却显著降低，至Day63±2时，脾脏重量显著降低；其次，Day42±＋2时Npc1^-/-小鼠中性粒细胞数量的显著增加，淋巴细胞绝对数量虽与野生型小鼠相比差异无统计学意义，但所占百分比显著降低；其次，Day42±2时Npc1^-/-小鼠血液白细胞中细胞因子（IL-1、IL-2、IFN-γ、TNFα、IL-4、GA及GB）的基因表达与野生型小鼠相比具有明显异常；进一步，流式细胞术检测发现，Day42±2时Npc1^-/-小鼠无论在血液还是脾脏中，T（CD4^＋和CD8^＋）淋巴细胞数量较野生型小鼠显著减少，而B（CDl9^＋）淋巴细胞却显著增多；最终，通过对小鼠脾脏组织的凋亡和衰老染色发现，Day63±2时Npc1^-/-小鼠脾脏细胞凋亡和衰老明显。结论Npc1基因突变引起的脂质代谢异常，导致Npc1^-/-小鼠在其生长过程中免疫系统及功能活性与野生型小鼠存在明显异常。该结果可为NPCI患者在临床上的用药与治疗提供借鉴，最大限度地改善患者生活质量并延长患者生存时间。

关键词： c1型尼曼.匹克氏症 Npcl基因免疫功能异常衰老

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大鼠脂肪源和骨髓源间充质干细胞生物特性差异

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中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生 2020年第7期 00001-00001页

作者：陆彦宾郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡 453000

本文主要比较大鼠脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的生物特性差异,主要包括两者的内皮分化差异、增殖速度和抗凋亡的影响,为间充质干细胞的研究和应用提供一定理论基础。

关键词：大鼠脂肪源骨髓间充质干细胞生物特性差异

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金黄色葡萄球菌类肠毒素K与GFP融合蛋白工程菌的构建及其表达蛋白生物学活性分析

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中国生物工程杂志 2018年第12期38卷 14-20页

作者：何亚南孙钰椋任雅坤梁盛英杨芬刘彦礼林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 新乡医学院生物医学工程学院新乡453003

目的构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K(staphylococcal enterotoxin-likeK,SElK)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因的工程菌,并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法利用PCR和OverlapPCR克隆获得SElK-GFP融合基因,并插入pET28a表达载体中,通过菌落PCR,质粒双酶切及测序验证后,将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到***21菌株中进行诱导表达,通过Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白;并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌,纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光,融合蛋白生物学活性分析表明,SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白,其不仅保留了SElK的超抗原活性,同时兼具GFP绿色荧光的可视性,为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。

关键词：金黄色葡萄球菌类肠毒素K 超抗原 T淋巴细胞原核表达

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超声联合载GDNF逆转录病毒微泡开放血脑屏障治疗帕金森病

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广州医科大学学报 2019年第6期47卷 1-5,16页

作者：王峰李娜娜王永玲侯软玲王璐张利彬李成长张煜程远尹雅玲常连生新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院病理生理学教研室河南新乡453003 新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院生物化学教研室河南新乡453003 新乡医学院组织学与胚胎学教研室河南新乡453003

目的:制备载胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的逆转录病毒超声微泡MpLXSN-GDNF,探讨MpLXSN-GDNF联合超声开放血脑屏障对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用。方法:制备载逆转录病毒载体pLXSN-GDNF、pLXSN-EGFP微泡造影剂。将SD大鼠分为4组:... 详细信息

目的:制备载胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的逆转录病毒超声微泡MpLXSN-GDNF,探讨MpLXSN-GDNF联合超声开放血脑屏障对帕金森病(PD)模型大鼠的治疗作用。方法:制备载逆转录病毒载体pLXSN-GDNF、pLXSN-EGFP微泡造影剂。将SD大鼠分为4组:(1)Normal组,为未进行处理的正常大鼠;(2)U+MpLXSN-EGFP组,尾静脉注射4×10~7载pLXSN-EGFP微泡并用超声照射受损脑区;(3)U+MpLXSN-GDNF组,尾静脉注射4×10~7载pLXSN-GDNF微泡并用超声照射受损脑区;(4)U+M+pLXSN-GDNF组,尾静脉注射4×10~7微泡及pLXSN-GDNF病毒并用超声照射受损脑区。MRI实时引导聚焦超声联合载GDNF或EGFP基因的逆转录病毒的微泡辐照大鼠颅脑纹状体开放血脑屏障,促逆转录病毒透过血脑屏障转染该区域的神经元细胞而增加目的基因表达。免疫印迹法检测各组大鼠脑组织GDNF表达,旋转实验评价颅内GDNF表达增加对大鼠行为学的影响,免疫组化法测定脑组织酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元细胞数目。结果:免疫印迹检测脑组织GDNF蛋白表达显示,U+MpLXSN-EGFP组、U+M+pLXSN-GDNF组与Normal组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。旋转实验显示,处理8周后U+M+pLXSN-GDNF组大鼠旋转症状较治疗前明显好转(P<0.05)。免疫组化法检测各组大鼠脑内TH阳性神经元细胞数量显示,U+MpLXSN-EGFP组、U+M+pLXSN-GDNF组、U+MpLXSN-GDNF组较Normal组均显著降低,而U+MpLXSN-GDNF组较U+M+pLXSN-GDNF组显著增加(均P<0.05)。结论:超声联合载GDNF病毒微泡可以增加脑内神经细胞的转染效率,并高表达外源基因GDNF,从而对PD模型大鼠起到治疗作用。

关键词：阳离子微泡帕金森病逆转录病毒胶质细胞源性神经营养因子

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小鼠神经母细胞瘤细胞中神经型钙黏蛋白超表达对突起形成及连环蛋白表达的影响

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解剖学报 2018年第5期49卷 598-604页

作者：朱少义管丽红杨慈清张必超李秋玲林俊堂新乡医学院生命科学技术学院干细胞与生物治疗技术研究中心河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院生物医学工程学院河南新乡453003

目的探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)调控连环蛋白(catenin)对小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)形态的影响。方法构建鼠源的N-cadherin融合蛋白超表达载体,利用脂质体转染的方法将空载体pCAG-MCS-EGFP和超表达载体pCAG-N-Cad-EGFP分别转染至N2... 详细信息

目的探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)调控连环蛋白(catenin)对小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a)形态的影响。方法构建鼠源的N-cadherin融合蛋白超表达载体,利用脂质体转染的方法将空载体pCAG-MCS-EGFP和超表达载体pCAG-N-Cad-EGFP分别转染至N2a细胞,作为对照组和实验组;细胞划痕和黏附实验检测Ncadherin超表达对N2a细胞迁移和黏附的影响,免疫荧光检测N-cadherin超表达对N2a细胞形态的影响,并结合Western blotting检测连环蛋白家族的表达情况。结果与对照组相比,N-cadherin超表达促进细胞突起的形成,使得N2a细胞突起增多和伸长; N-cadherin超表达增强了黏附性而抑制了细胞的迁移能力; N-cadherin超表达使得细胞内连环蛋白家族中α-catenin、β-catenin和p120蛋白表达均显著上升(P <0. 05),而γ-catenin表达下降但差异不显著(P> 0. 05);另外,N-cadherin超表达的细胞有明显的聚集现象。结论 N-cadherin超表达促进N2a细胞突起形成,增强细胞的黏附性从而抑制细胞的迁移能力,调控连环蛋白家族成员的表达并促使细胞聚集。

关键词：神经型钙黏蛋白小鼠神经母细胞瘤细胞细胞突起连环蛋白细胞黏附免疫荧光小鼠

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心肌弹性纤维的研究进展

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国际心血管病杂志 2018年第2期45卷 73-75页

作者：余悦欣郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室 453003

弹性纤维是细胞外基质必需的生物大分子。弹性纤维尤其是弹性蛋白的主要结构组分发生变化时,常会引起器官功能减退。弹性纤维是心脏的重要间质成分,其生物学结构和功能复杂,对心脏的生理功能和心肌修复有重要作用。

关键词：弹性纤维心肌组织大鼠心肌梗死

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心肌脂肪酸代谢和心肌脂毒性损伤研究进展

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新乡医学院学报 2018年第7期35卷 646-650页

作者：孙晓鹏李辞霞郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

健康成年人50%~70%的心肌三磷腺苷来自于长链脂肪酸的β氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。正常心肌脂肪酸的摄取和氧化维持在一... 详细信息

健康成年人50%~70%的心肌三磷腺苷来自于长链脂肪酸的β氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。正常心肌脂肪酸的摄取和氧化维持在一个动态平衡,过多的脂质在心肌内聚集会造成心肌脂毒性,心肌脂毒性可以造成心肌胰岛素抵抗、心肌细胞凋亡和心脏收缩功能障碍,实验和临床数据表明,减少毒性脂质可以改善心肌代谢和功能。目前临床上对心肌的脂毒性损伤尚未引起足够重视。本文查阅近年来国内外文献,就心肌脂肪酸代谢途径和心肌脂毒性、潜在性的脂毒性物质以及与临床的关系进行综述。

关键词：脂肪酸脂质代谢脂毒性心肌

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低氧诱导因子对缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤模型中自噬的调控作用

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中国临床解剖学杂志 2018年第4期36卷 419-422页

作者：宋海岩连辉张毅敏付升旗新乡医学院人体解剖学教研室河南省医用组织再生重点实验室河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心

目的探讨在缺血缺氧模型中低氧诱导因子（HIF-1α）对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响及其对自噬的调节作用。方法建立缺血缺氧细胞模型,利用western blot检测HIF-1αsi RNA的干预效果;利用CCK-8实验检测HIF-1αsi RNA对心肌细胞... 详细信息

目的探讨在缺血缺氧模型中低氧诱导因子（HIF-1α）对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响及其对自噬的调节作用。方法建立缺血缺氧细胞模型,利用western blot检测HIF-1αsi RNA的干预效果;利用CCK-8实验检测HIF-1αsi RNA对心肌细胞活性的影响;利用RT-q PCR与western blot检测HIF-1αsi RNA对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响。结果 Western blot结果显示HIF-1αsi RNA可有效敲低模型心肌细胞中HIF-1α的表达;CCK-8实验结果显示,HIF-1αsi RNA可降低缺血缺氧细胞模型中心肌细胞的活性;RT-q PCR与western blot结果均提示HIF-1αsi RNA可降低模型细胞中自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的表达,降低LC3II/LC3I的比率。结论 HIF-1αsi RNA敲低缺血缺氧细胞模型中的HIF-1α表达后,导致心肌细胞的活性进一步降低,细胞中Beclin1表达降低,LC3II/LC3I的比率降低,HIF-1α正调控缺血缺氧诱导的自噬而发挥心肌保护作用。

关键词：缺血缺氧自噬低氧诱导因子心肌损伤

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CRISPR-Cas9基因编辑技术在眼科疾病中的应用

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眼科新进展 2018年第9期38卷 801-803,814页

作者：管丽红林俊堂新乡医学院生命科学技术学院干细胞中心河南省医用组织再生重点实验室河南省新乡市453003 新乡医学院生物医学工程学院河南省新乡市453003

规律成簇间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)及相关核酸内切酶9(CRISPR associated protein,Cas9)技术是一种由RNA指导核酸内切酶的基因编辑技术。该技术以其操作简便、基因敲除效率高、靶向精准、周期短等特点迅速被用于多个物种的基因组编辑及疾病基因治疗中。本文旨在对CRISPR-Cas9技术在构建眼科疾病模型和治疗眼科疾病中的应用进展进行综述。

关键词： CRISPR-Cas9 基因组编辑基因治疗眼科疾病

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不同reelin基因型小鼠大脑皮层分布的差异

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解剖学杂志 2018年第1期41卷 37-39,F0004页

作者：李小英郭潇周洁钱瑶瑶张必超杨慈清新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:比较分析不同reelin基因型小鼠大脑皮层分布的差异,为reelin在小鼠大脑皮层形成过程中的作用研究提供依据;方法:选择reelin杂合子小鼠繁殖后代,在出生10d时进行基因型鉴定,设reelin^(+/+)、reelin^(+/-)和reelin^(-/-)3组。每组取... 详细信息

目的:比较分析不同reelin基因型小鼠大脑皮层分布的差异,为reelin在小鼠大脑皮层形成过程中的作用研究提供依据;方法:选择reelin杂合子小鼠繁殖后代,在出生10d时进行基因型鉴定,设reelin^(+/+)、reelin^(+/-)和reelin^(-/-)3组。每组取3只小鼠,采用DAPI染色细胞核,用荧光免疫组化标记FoxP-1、Tbr-1、NeuN和GFAP特异性表达的细胞,显微镜下观察拍照后进行结果分析;结果:从DAPI染色的细胞核及FoxP1、Tbr1、NeuN和GFAP标记的细胞显示,3种不同基因型小鼠大脑皮层结构彼此都存在一定差异,reelin^(+/-)型与reelin^(+/+)型小鼠相比大脑皮层结构相似,但也存在一定差异,如被FoxP-1和Tbr-1标记的神经元在SVZ区reelin^(+/-)型比reelin^(+/+)型更多;但reelin^(-/-)型与reelin^(+/+)型小鼠相比,reelin^(-/-)型小鼠大脑皮层无明显层的结构,FoxP-1、Tbr-1、NeuN和GFAP标记的细胞分布在整个皮层;结论:Reelin表达的下调或缺失对小鼠大脑皮层正常结构的形成存在影响,在reelin缺失表达后小鼠大脑皮层的形成明显发生异常,不具有典型的分层结构。

关键词： reelim大脑皮层神经元小鼠

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