检索结果-内蒙古大学图书馆

生理学报 2019年第6期71卷 874-882页

作者：刘夏魏婷高招娣赵修粱吴慧晴严静济宁医学院基础医学院生理学教研室新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室

本研旨在探讨Janus激酶3 (JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制。利用si RNA (si JAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operatedcalcium channel,SO... 详细信息

本研旨在探讨Janus激酶3 (JAK3)对乳腺癌细胞迁移能力的影响以及其作用机制。利用si RNA (si JAK3)沉默乳腺癌MCF-7细胞JAK3的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,用荧光钙成像技术检测钙池操纵性钙通道(store-operatedcalcium channel,SOCC)活性,用Westernblot和RT-PCR检测钙池操纵性钙内流(store-operatedcalciumentry,SOCE)过程中的重要分子Orai1和STIM1表达水平。结果显示,SOCC抑制剂2-APB对MCF-7细胞的迁移能力有抑制作用。si JAK3转染可显著抑制MCF-7细胞的迁移能力,降低SOCC活性,下调Orai1和STIM1的m RNA和蛋白表达水平。在JAK3沉默细胞中过表达Orai1或STIM1,可使MCF-7细胞迁移力恢复。上述结果提示,JAK3通过影响SOCC促进乳腺癌细胞的迁移。

关键词： Ca2+ 钙池操纵性钙内流 Orai1 Janus激酶3

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胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

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中国病理生理杂志 2014年第8期30卷 1388-1393页

作者：卢娜白瑞樱魏林郁李超堃李新娟赵红岗李东亮新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

目的:观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法:培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoe... 详细信息

目的:观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法:培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达。结果:(1)与对照组相比,不同浓度(3、6、9、12、15 mmol/L)的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间(1、2、3、6 h)ATP(6 mmol/L)也可使SHSY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。(2)ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多(P<0.05),随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强(P<0.05),形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。(3)与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰(P<0.05),6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强(P<0.05),6 h时达高峰。结论:胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。

关键词：腺苷三磷酸 SH-SY5 Y细胞自噬细胞凋亡

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低氧预适应对大鼠缺血-再灌注性脑损伤中HSP-70、Survivin蛋白和学习记忆能力的影响

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南方医科大学学报 2007年第12期27卷 1856-1859,1862页

作者：卢娜李晓娟李成长李东亮崔鹏飞侯宇宁王寅琳新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院基础医学院 2004级学生河南新乡453003

目的探讨低氧预适应减轻大鼠缺血-再灌注性脑损伤中学习记忆能力及HSP-70、存活素蛋白表达的变化。方法采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),将48只大鼠随机分为3组6个亚组:假手术组、缺血再灌注组(I/R)、低氧预适应组(HP+I/R),应... 详细信息

目的探讨低氧预适应减轻大鼠缺血-再灌注性脑损伤中学习记忆能力及HSP-70、存活素蛋白表达的变化。方法采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),将48只大鼠随机分为3组6个亚组:假手术组、缺血再灌注组(I/R)、低氧预适应组(HP+I/R),应用免疫组织化学法研究脑组织细胞凋亡相关蛋白存活素和应激蛋白HSP-70的表达情况;并通过Y-电迷宫测试缺血再灌注24h后大鼠学习、记忆能力。结果高倍视野下存活素和HSP-70蛋白阳性细胞数比较,HP+I/R组与I/R组及假手术组间差异具有统计学意义(P<0.05)。缺血3h再灌注24h后,Y-电迷宫测试大鼠学习记忆能力,HP+I/R组优于I/R组(P<0.05)。结论低氧预适应可减轻局灶性缺血再灌注脑损伤,提高动物学习记忆能力和损伤后神经功能恢复;上调神经细胞中存活素、HSP-70蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。

关键词：脑缺血再灌注损伤低氧预适应存活素热休克蛋白70 Y-电迷宫学习记忆

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孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮对K562白血病细胞系增殖和分化的影响

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中国病理生理杂志 2011年第6期27卷 1097-1102页

作者：尹雅玲李鹏魏林郁白瑞樱王亚莉新乡医学院基础医学版生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院药学院河南新乡453003

目的:观察孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮(RU486)对K562白血病细胞增殖和分化的影响。方法:用10-5 mol/L孚酮分别联合10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7 mol/L RU486共同作用K562白血病细胞5 d,采用液体培养,XTT实验和集落培养实验观察K562... 详细信息

目的:观察孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮(RU486)对K562白血病细胞增殖和分化的影响。方法:用10-5 mol/L孚酮分别联合10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7 mol/L RU486共同作用K562白血病细胞5 d,采用液体培养,XTT实验和集落培养实验观察K562细胞增殖能力;用流式细胞术检测K562细胞周期;通过Wright-Giemsa染色、联苯胺染色和表面分化抗原CD71表达观察孕酮和RU486对K562细胞分化的作用。结果:液体培养,XTT实验和集落形成抑制实验均显示单独使用孕酮可显著抑制K562细胞增殖,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。孕酮联合RU486对K562细胞的增殖抑制作用减弱,与单独使用孕酮组比较有显著差异(P<0.01),呈剂量依赖关系。形态学观察孕酮处理组K562细胞体积变大,核浆比例减少,趋向成熟分化。联苯胺染色吸光度值升高,与对照组比较差异显著(P<0.01)。流式细胞术检测10-5 mol/L孕酮处理4 d后K562细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为(85.72±2.31)%,显著高于对照组(P<0.01);但孕酮联合RU486对K562细胞的诱导分化作用减弱,与单独使用孕酮组比较有显著差异(P<0.01),并呈剂量依赖关系。细胞周期显示孕酮可将K562细胞周期阻滞在S期。但孕酮联合RU486组分布于S期的K562细胞百分比显著下降,与单独使用孕酮组比较差异显著(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论:孕酮可抑制K562细胞增殖并诱导其向红系分化,而RU486可阻断P对K562细胞的增殖抑制与诱导分化作用。

关键词：孕酮 K562细胞细胞增殖细胞分化

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γ-氨基丁酸Rho2受体在神经母细胞瘤细胞中的稳定表达及其在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用

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新乡医学院学报 2019年第1期36卷 13-18页

作者：李敏楚人杰张姣韩思乐李超堃新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

目的构建人γ-氨基丁酸(GABA) Rho2受体(GABRR2)真核表达载体,并转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立稳定表达细胞株,探讨GABRR2在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用。方法采用快速克隆方法将人脑组织GABRR2基因克隆至p IRES2-eGFP质粒,构建重... 详细信息

目的构建人γ-氨基丁酸(GABA) Rho2受体(GABRR2)真核表达载体,并转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立稳定表达细胞株,探讨GABRR2在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用。方法采用快速克隆方法将人脑组织GABRR2基因克隆至p IRES2-eGFP质粒,构建重组质粒p IRES2-eGFP-Rho2,利用X-fect试剂盒将其转染至SH-SY5Y细胞中,使用遗传霉素进行筛选,建立稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞株。使用流式细胞术检测稳定转染过表达p IRES2-eGFP-Rho2的细胞,利用免疫荧光法鉴定稳定转染的SH-SY5Y细胞中p IRES2-eGFP-Rho2的表达。将野生型SH-SY5Y细胞分为A1、B1、C1组,稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞分为A2、B2、C2组,每组设3个平行孔,其中A1、A2组细胞使用达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)孵育,B1、B2组细胞使用含有谷氨酸盐的DMEM孵育,C1、C2组细胞使用含有谷氨酸盐和GABA的DMEM孵育,将各组细胞置于细胞培养箱中培养24 h,应用乳酸脱氢酶试剂盒检测各组细胞的存活率。结果重组真核表达载体构建正确,获得了稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的细胞株。A1、B1、C1组细胞存活率比较差异有统计学意义(F=5. 542,P <0. 05);其中B1、C1组细胞存活率显著低于A1组(P <0. 05),C1组细胞存活率显著高于B1组(P <0. 05)。A2、B2、C2组细胞存活率比较差异有统计学意义(F=6. 588,P <0. 05);其中B2、C2组细胞存活率显著低于A2组(P <0. 05),C2组细胞存活率显著高于B2组(P <0. 01)。A2组细胞存活率与A1组比较差异无统计学意义(P> 0. 05),B2组细胞存活率显著低于B1组(P <0. 05),C2组细胞存活率显著低于C1组(P <0. 05)。结论成功构建p IRES2-eGFP-Rho2真核表达载体,建立了稳定表达p IRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞株,为体外研究GABRR2的功能提供了实验基础,并证明使用GABA可缓解谷氨酸盐对细胞的损伤,为缺血性脑损伤的分子生物学治疗提供了靶点。

关键词：真核表达载体 γ-氨基丁酸神经母细胞瘤 SH-SY5Y细胞细胞克隆基因表达

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肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响

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中国药理学通报 2012年第9期28卷 1262-1266页

作者：王国红郭直岳石松林李祺福新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 厦门大学医学院基础医学部福建厦门361005

目的研究中药有效成分肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法肉桂酸处理MG-63细胞前后,台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞仪检测细胞周期时相变化;光镜和电镜观察细胞形态和超微结构;VanGieson染色检测细胞Ⅰ型胶原表达;... 详细信息

目的研究中药有效成分肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法肉桂酸处理MG-63细胞前后,台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞仪检测细胞周期时相变化;光镜和电镜观察细胞形态和超微结构;VanGieson染色检测细胞Ⅰ型胶原表达;茜素红染色观察钙化骨结节形成;免疫细胞化学检测骨粘素和骨钙蛋白表达。结果肉桂酸明显抑制MG-63细胞增殖,D7抑制率达54.94%±4.69%。周期分析结果显示,肉桂酸处理后G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P<0.01)。光镜和电镜结果显示,肉桂酸处理组MG-63细胞形态和超微结构发生明显改变,呈现相应正常细胞的形态和超微结构特征。肉桂酸促进成骨细胞分化标志物Ⅰ型胶原、骨粘素和骨钙蛋白的表达与钙沉积以及典型骨结节的形成。结论肉桂酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其向成骨细胞分化。

关键词：肉桂酸人骨肉瘤MG-63细胞增殖分化骨肉瘤成骨细胞

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乳鼠海马神经干细胞的体外分离、扩增和分化研究

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中国细胞生物学学报 2012年第10期34卷 1017-1022页

作者：白瑞樱张紫娟王亚莉李新娟程远魏林郁薛红新乡医学院生理学与神经生物学教研室新乡453003 河南中医学院基础医学院郑州450008

探讨海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)在体外分离扩增和诱导分化的可行性。无菌条件下分离新生(24 h)SD大鼠海马神经干细胞,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化。免疫荧光染色技术分别检测诱导前细胞巢蛋白(Nestin)的表达,以及分... 详细信息

探讨海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)在体外分离扩增和诱导分化的可行性。无菌条件下分离新生(24 h)SD大鼠海马神经干细胞,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化。免疫荧光染色技术分别检测诱导前细胞巢蛋白(Nestin)的表达,以及分化细胞的神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,以鉴定细胞类型。流式细胞仪检测神经干细胞分化前后增殖能力的变化。结果显示:从乳鼠海马分离培养的细胞生长状态良好,具有克隆增殖能力,并呈Nestin表达阳性,分化后可出现NSE及GFAP表达阳性的细胞。流式细胞仪检测显示:诱导前,细胞增殖活跃,S+G2/M期细胞为(36.27±1.99)%,而分化各阶段(3,7,10 d)S+G2/M期细胞比例与诱导前(Ctrl)相比则明显下降(P<0.05),分别为(26.39±1.10)%、(26.33±1.33)%和(24.54±1.12)%。这些结果表明乳鼠海马存在神经干细胞,并具有自我更新和多向分化的潜能,可用于基础和临床的相关研究。

关键词：神经干细胞分离扩增分化鉴定

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缺氧缺血性脑损伤新生大鼠皮质脑组织硫化氢的动态变化

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实用儿科临床杂志 2008年第12期23卷 930-931页

作者：任彩丽赵红岗刘磊甄万里王湜卿尹晓峰侯志慧李东亮新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院三全学院河南新乡453003 新乡医学院基础医学院河南新乡453003

目的探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)病理过程中不同时间点新生大鼠皮质脑组织硫化氢(H2S)水平动态变化。方法SD新生大鼠56只随机分成7组:正常组,假手术组,HIBD12h组、24h组、48h组、72h组及7d组,每组各8只。HIBD各组大鼠乙醚麻醉后,颈部正... 详细信息

目的探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)病理过程中不同时间点新生大鼠皮质脑组织硫化氢(H2S)水平动态变化。方法SD新生大鼠56只随机分成7组:正常组,假手术组,HIBD12h组、24h组、48h组、72h组及7d组,每组各8只。HIBD各组大鼠乙醚麻醉后,颈部正中切口,分离左侧颈总动脉,两端结扎中间凝断,消毒后缝合切口,2～4h置常压缺氧舱中,以1.5L/min的速度通入80mL/L氧气和920mL/L氮气的氮氧混合气体2h制成HIBD模型,观察动物行为学变化以确定建模是否成功,舱温控制在37℃左右,湿度为(70±5)%,而后放回原饲养环境继续母乳喂养。正常组不做任何处理。假手术组仅切开颈正中皮肤和分离左侧颈总动脉,不结扎,不吸入氮氧混合气体。HIBD组新生大鼠分别在建模后12、24、48、72h及7d时间点快速断头取脑,分离出左侧大脑皮质,用生化反应方法测定不同时间点新生大鼠皮质脑组织内源性H2S水平。结果与假手术组相比,HIBD12h组新生大鼠大脑皮质中H2S水平升高,是假手术组的1.5倍(P<0.01);之后开始降低,HIBD48h时,大脑皮质中H2S水平降至最低,与假手术组比较差异非常显著(P<0.01)。HIBD72h组、7d组新生大鼠皮质脑组织H2S水平与假手术组比较无显著差异。结论在HIBD过程中新生大鼠皮层脑组织H2S水平呈动态变化,H2S可能参与HIBD新生大鼠的发生发展过程。

关键词：大鼠新生缺氧缺血性脑损伤硫化氢

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人脐血单个核细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复作用

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郑州大学学报(医学版) 2009年第2期44卷 309-312页

作者：王亚莉许燕韩雪飞郭思鄢文海邢莹新乡医学院生理学与神经生物学教研室郑州大学医学院干细胞研究中心郑州大学基础医学院病理生理学教研室

目的:观察人脐血单个核细胞移植入大鼠脊髓损伤部位后的分化、迁移情况和损伤后功能的修复。方法:建立SD大鼠T10脊髓节段损伤模型,随机分为移植组和对照组,每组20只。分离人脐血单个核细胞,Ho-echst33258标记后移植入脊髓损伤部位,观察... 详细信息

目的:观察人脐血单个核细胞移植入大鼠脊髓损伤部位后的分化、迁移情况和损伤后功能的修复。方法:建立SD大鼠T10脊髓节段损伤模型,随机分为移植组和对照组,每组20只。分离人脐血单个核细胞,Ho-echst33258标记后移植入脊髓损伤部位,观察迁移情况,并用免疫荧光双标法观察移植细胞是否可以表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP),同时采用BBB运动功能评分观察脊髓功能的修复情况。结果:人脐血单个核细胞在移植区脊髓内存活,并有GFAP和NSE阳性表达的移植细胞,移植细胞沿脊髓长轴发生迁移,10周时最多可向脊髓头尾两侧迁移7mm。BBB评分结果显示,移植组4周后与对照组相比[(11.55±1.05)vs(5.93±0.80)]、10周后与对照组相比[(13.50±0.88)vs(8.07±0.82)],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:人脐血单个核细胞对脊髓损伤的功能修复有促进作用,可能是一种治疗脊髓损伤的新的种子细胞。

关键词：脐血单个核细胞脊髓损伤分化迁移大鼠

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孕酮对小鼠放射性脑损伤的神经保护作用及分子机制

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安徽医科大学学报 2018年第2期53卷 204-209页

作者：李卓张海三李新娟魏林郁新乡医学院第二附属医院(河南省精神病医院)放射科新乡453002 新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室新乡453002

目的探讨孕酮对小鼠放射性脑损伤的神经保护作用及其可能分子机制。方法 144只小鼠分为溶剂对照组、单纯照射组和孕酮组,采用Morris水迷宫实验评价小鼠空间学习和记忆能力;干/湿法测定脑含水量;ELISA法检测脑脊液三磷酸腺苷(ATP)、环氧... 详细信息

目的探讨孕酮对小鼠放射性脑损伤的神经保护作用及其可能分子机制。方法 144只小鼠分为溶剂对照组、单纯照射组和孕酮组,采用Morris水迷宫实验评价小鼠空间学习和记忆能力;干/湿法测定脑含水量;ELISA法检测脑脊液三磷酸腺苷(ATP)、环氧合酶-2(COX-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot法检测脑组织P2X7受体蛋白表达水平。结果单纯照射组小鼠第4~7天平均潜伏期时间和寻找平台的路径总长均明显大于溶剂对照组,孕酮组明显短于单纯照射组(P=0.000 1);单纯照射组脑含水量和细胞凋亡率明显高于溶剂对照组,孕酮组明显低于单纯照射组(P=0.000 0);单纯照射组脑脊液ATP、COX-2、TNF-α和IL-6的含量明显高于溶剂对照组,孕酮组明显低于单纯照射组(P=0.010 9、0.004 6、0.007 8、0.001 4);单纯照射组小鼠脑组织P2X7受体蛋白的表达高于溶剂对照组,而孕酮组P2X7受体蛋白的表达水平明显低于单纯照射组。结论孕酮可能通过抑制ATP介导的P2X7R活化和炎症介质的释放,进而减轻脑水肿和减少细胞凋亡,起到保护放射性脑损伤所致的神经损害作用。

关键词：孕酮放射性脑损伤 ATP-P2X7R 炎症介质脑水肿细胞凋亡

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