检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2009年第16期31卷 1552-1555页

作者：薛正楷魏泓商海涛杨根庆叶彬重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038 河南省新乡医学院第三附属医学院检验科河南新乡543003

目的建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株。方法通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为... 详细信息

目的建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株。方法通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为模板,采用PCR扩增CYP3A22基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A22基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,测序表明,CYP3A22基因真核表达载体正确构建;将测序正确的CYP3A22基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,RT-PCR及Western blot分析,并用探针药物硝苯地平对重组细胞进行进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A22细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A22的HepG2细胞株,可用于相关的药物代谢研究。

关键词： Bama小型猪 Sus scrofa CYP3A22 HepG2 RT—PCR Western blot 探针药物

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黄芪多糖抑制大鼠神经胶质瘤细胞增殖的实验研究

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中国老年学杂志 2009年第1期29卷 41-43页

作者：孙聪韩业超洪敏马南南周文龙长春中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130117 吉林省兽药饲料监察所吉林大学白求恩医学部生物化学与分子生物学教研室

目的观察黄芪多糖抑制信号转导子与转录活化子3(STAT3)对大鼠神经胶质瘤C6细胞的影响。方法用黄芪多糖作用于体外培养的大鼠胶质瘤细胞株C6,MTT法观察黄芪多糖作用后胶质瘤细胞存活率的变化,并用流式细胞分析技术检测肿瘤细胞的凋亡情... 详细信息

目的观察黄芪多糖抑制信号转导子与转录活化子3(STAT3)对大鼠神经胶质瘤C6细胞的影响。方法用黄芪多糖作用于体外培养的大鼠胶质瘤细胞株C6,MTT法观察黄芪多糖作用后胶质瘤细胞存活率的变化,并用流式细胞分析技术检测肿瘤细胞的凋亡情况。通过West-ern印迹和半定量RT-PCR了解STAT3基因在不同水平的表达。结果黄芪多糖作用胶质瘤细胞株后肿瘤细胞存活率明显下降,肿瘤细胞凋亡比例升高。黄芪多糖对C6细胞存活率和凋亡的影响与黄芪多糖的浓度和作用时间有关。可使细胞内STAT3表达下降,同时mRNA水平也有所下降。结论黄芪多糖可以降低STAT3的表达,进而抑制大鼠C6细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡。

关键词：黄芪多糖 C6细胞 STAT3

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血清一氧化氮测定方法的研究进展

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包头医学院学报 2009年第3期25卷 77-79页

作者：杨静吴刚包头医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室内蒙古包头014010

一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一种化学性质比较活泼的气体分子。在生理条件下,机体内NO浓度极低,但它们在机体内却发挥着重要又独特的生理作用;在病理条件下,当NO的代谢失衡时,就会导致心血管、呼吸、神经等系统的多种疾病。因此,血清N... 详细信息

一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一种化学性质比较活泼的气体分子。在生理条件下,机体内NO浓度极低,但它们在机体内却发挥着重要又独特的生理作用;在病理条件下,当NO的代谢失衡时,就会导致心血管、呼吸、神经等系统的多种疾病。因此,血清NO浓度已经成为衡量人体健康与疾病状态的重要指标之一,也成为监测很多疾病状态的重要指标。为此,必须建立精确、简便、快速、灵敏的检测方法来监控血清NO含量。本文将对血清NO测定方法进行综述。[第一段]

关键词：氮测定方法血清NO 一氧化氮 NO浓度疾病状态生理作用 Oxide 气体分子

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牛血清蛋白在盐酸胍和尿素体系中变性的微量热研究

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化学学报 2008年第5期66卷 515-519页

作者：李向荣郭伟卢雁河南师范大学化学与环境科学学院新乡453007 新乡医学院基础医学院化学教研室新乡453003

在30℃时用恒温微量热法研究了不同pH值下盐酸胍、尿素诱导牛血清蛋白变性的过程.并用Privalov提出的简单键合模型对量热数据进行了分析,计算了表观键合常数K,简单键合的单个表观键合自由能△G和总吉布斯能△G(a),用变性中点的直线外推... 详细信息

在30℃时用恒温微量热法研究了不同pH值下盐酸胍、尿素诱导牛血清蛋白变性的过程.并用Privalov提出的简单键合模型对量热数据进行了分析,计算了表观键合常数K,简单键合的单个表观键合自由能△G和总吉布斯能△G(a),用变性中点的直线外推方法求出了表观变性焓△Hd.实验结果表明,牛血清蛋白与盐酸胍的键合在碱性条件下更易进行,牛血清蛋白在盐酸胍溶液中的变性焓△Hd在牛血清蛋白的pH=6.97和7.05时为350kJ·mol-1,在pH=9.30时为275kJ·mol-1,表明牛血清蛋白在接近中性时较稳定.而牛血清蛋白与尿素的键合在酸性条件下更易进行,此变性焓△Hd在牛血清蛋白的pH=6.97时为295kJ@mol-1,在pH=7.05和9.30时为230kJ·mol-1.此结果说明牛血清蛋白在两种变性剂溶液中的展开程度是不同的.

关键词：牛血清蛋白恒温微量热盐酸胍尿素变性

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吗啡对C6神经胶质瘤细胞Glu和Gln含量及其代谢关键酶转录活性的影响

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吉林大学学报（医学版） 2008年第5期34卷 786-789页

作者：王少华孙吉凤刘剑凯张连芝邓志会林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021 长春医学高等专科学校基础医学部生物化学教研室吉林长春130031

目的:研究吗啡对C6神经胶质瘤细胞谷氨酸(Glu)-谷氨酰胺(Gln)循环代谢产物含量及其相关酶基因转录的影响,探讨吗啡依赖与耐受的作用机制。方法:传代培养的C6神经胶质瘤细胞,随机分为4组:对照组(C组),吗啡组(M组),纳洛酮加吗啡组(N+M组)... 详细信息

目的:研究吗啡对C6神经胶质瘤细胞谷氨酸(Glu)-谷氨酰胺(Gln)循环代谢产物含量及其相关酶基因转录的影响,探讨吗啡依赖与耐受的作用机制。方法:传代培养的C6神经胶质瘤细胞,随机分为4组:对照组(C组),吗啡组(M组),纳洛酮加吗啡组(N+M组)和纳洛酮组(N组),应用比色法测定C6神经胶质瘤细胞培养上清液中Glu及Gln的含量,应用半定量RT-PCR法测定C6神经胶质瘤细胞Glu-Gln循环关键酶谷氨酰胺合成酶(GS)及谷氨酸脱氢酶(GDH)mRNA相对含量的变化。结果:与C组比较,M组细胞外Glu含量显著性增加(P<0.01)。与M组比较,N+M组细胞外Glu含量显著性降低(P<0.01);与C组比较,M组、N组以及N+M组细胞外Gln含量均降低,但差异无显著性(P>0.05)。与C组比较,M组、N组细胞GSmRNA转录活性均显著降低(P<0.01)。与M组比较,N+M组细胞GS mRNA转录活性显著升高(P<0.01);与C组比较,M组细胞GDH mRNA转录活性升高(P<0.05)。与M组比较,N+M组细胞GDH mRNA转录活性显著性升高(P<0.01)。结论:吗啡可能通过对Glu-Gln循环关键酶GS和GDH基因转录活性的影响调节细胞外Gln和Glu浓度,其机制可能与吗啡依赖等作用相关。

关键词：吗啡谷氨酸谷氨酰胺谷氨酰胺合成酶谷氨酸脱氢酶

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吲哚美辛对喉癌Hep-2细胞增殖与iNOS活性的影响

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吉林大学学报（医学版） 2008年第2期34卷 251-253页

作者：张连芝孙吉凤王少华王为方杨柳王宁刘剑凯吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林长春130021 长春医学高等专科学校基础医学部生物化学教研室吉林长春130031

目的:探讨吲哚美辛对喉癌细胞增殖与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响,为喉癌的预防和治疗提供理论依据。方法:Hep-2细胞培养于含吲哚美辛(30、60、125和250μmol.L-1)的培养基中,分别培养24h和48h;用MTT方法检测吲哚美辛组细胞增殖... 详细信息

目的:探讨吲哚美辛对喉癌细胞增殖与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响,为喉癌的预防和治疗提供理论依据。方法:Hep-2细胞培养于含吲哚美辛(30、60、125和250μmol.L-1)的培养基中,分别培养24h和48h;用MTT方法检测吲哚美辛组细胞增殖的抑制率,用台盼蓝染色法检测吲哚美辛组细胞活力的抑制作用,并与溶剂对照组进行比较;吲哚美辛(125、250和500μmol.L-1)与脂多糖(LPS,10μmol.L-1)同时处理细胞16h,同时设只加LPS对照组,采用酶法和分光光度法检测细胞培养上清液中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果:与对照组比较,不同浓度的吲哚美辛(30、60、125和250μmol.L-1)组Hep-2细胞增殖的抑制率均显著增加(P<0.05)。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞增殖的抑制率显著降低(P<0.05);与对照组比较,不同浓度的吲哚美辛(30、60、125和250μmol.L-1)随剂量增加,Hep-2细胞活力的抑制程度均显著增加(P<0.05)。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞活力的抑制程度显著降低(P<0.05);与LPS对照组比较,吲哚美辛在125、250及500μmol.L-1浓度时,LPS诱导的细胞培养上清液中iNOS的活性显著降低(P<0.05)。结论:吲哚美辛在30～250μmol.L-1浓度范围内显著抑制Hep-2细胞的细胞增殖与细胞活力,明显降低LPS诱导的细胞iNOS的活性升高。

关键词：吲哚美辛消炎药非甾类喉肿瘤一氧化氮合酶

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应用改良的原位杂交方法分析Pax3基因在鸡胚脊髓中的表达

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新乡医学院学报 2008年第2期25卷 141-143页

作者：王聪睿昝玉玺杨保胜新乡医学院基础医学院生物化学教研室河南新乡453003

目的改良传统的原位杂交方法,提高其信号强度和特异性;应用改良的原位杂交方法分析Pax3基因在鸡胚脊髓中的表达情况。方法分子克隆Pax3 cDNA进入pCR-TopoII质粒,使用sp6 RNA聚合酶体外合成Pax3 cRNA反义探针,组织原位杂交分析Pax3(paire... 详细信息

目的改良传统的原位杂交方法,提高其信号强度和特异性;应用改良的原位杂交方法分析Pax3基因在鸡胚脊髓中的表达情况。方法分子克隆Pax3 cDNA进入pCR-TopoII质粒,使用sp6 RNA聚合酶体外合成Pax3 cRNA反义探针,组织原位杂交分析Pax3(pairedbox3)mRNA在鸡胚脊髓内分布。结果获得高质量的Pax3 cRNA探针,通过改进的原位杂交方法发现Pax3 mRNA在鸡胚脊髓内呈区域状特异分布。结论改进的原位杂交方法显著提高了杂交信号特异性,Pax3在鸡胚脊髓内区域状表达显示Pax3基因在脊髓发育过程中扮演一定角色。

关键词：表达 Pax3 脊髓原位杂交

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CCl4诱发galectin-3基因敲除鼠急性肝损伤的实验研究

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中国医科大学学报 2008年第5期37卷 603-606页

作者：郑华川王威关一夫平賀紘一中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院病理生理学教研室沈阳110001 日本富山大学医学部生物化学教室

目的研究四氯化碳(CCl4)诱发急性肝损伤中半乳凝素3(galectin-3)作用及相关线粒体抗凋亡途径。方法利用PCR和Northern印迹杂交确认galectin-3+/+和galectin-3-/-遗传背景及galectin-3表达,HE组织切片和ELISA分别检测肝细胞形态和谷草转... 详细信息

目的研究四氯化碳(CCl4)诱发急性肝损伤中半乳凝素3(galectin-3)作用及相关线粒体抗凋亡途径。方法利用PCR和Northern印迹杂交确认galectin-3+/+和galectin-3-/-遗传背景及galectin-3表达,HE组织切片和ELISA分别检测肝细胞形态和谷草转氨酶(AST)活性,采用Western印迹杂交检测CYP2E1、CYP1A2、Bid和PUMA蛋白表达。结果遗传背景正确galectin-3+/+小鼠肝脏经CCl4作用后galectin-3mRNA表达和血清AST水平升高而后下降、肝脏表现水肿和坏死等形态学改变,galectin-3+/+小鼠肝细胞坏死和血清AST水平高于galectin-3-/-小鼠。细胞色素氧化酶CYP2E1和CYP1A2主要存在于微粒体中,CCl4毒性作用降低其表达水平。Bid蛋白主要定位在细胞浆和线粒体中,CCl4诱导下线粒体中22kd和15kdBid升高,galectin-3+/+鼠表现升高显著。PUMA蛋白主要定位于细胞浆,galectin-3+/+鼠中表达水平高于对应基因缺陷鼠,CCl4降低其表达。结论CCl4毒性对galectin-3+/+和galectin-3-/-小鼠可产生以细胞色素氧化酶降低、AST水平升高、细胞水肿或坏死等肝损伤,galectin-3基因缺损可减轻CCl4肝毒性,该生物学现象可能与galectin-3抗凋亡作用有关,急性肝细胞损伤中galectin-3作用与线粒体途径中Bid和PUMA表达无显著相关。

关键词：急性肝损伤半乳凝素3 细胞凋亡四氯化碳

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小鼠皮肤损伤修复过程中白细胞介素1α和白细胞介素1β变化与损伤时间的关系

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第15期12卷 2879-2882页

作者：李树王杰中国刑事警察学院法医学系辽宁省沈阳市110035 沈阳医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室辽宁省沈阳市110034

目的：研究表明，细胞因子在各种炎症反应、损伤修复及细胞突变过程中发挥着重要作用，并且有望成为推断损伤时间新的有效指标。实验拟验证皮肤损伤后损伤区组织内不同时间白细胞介素1α和白细胞介素1β基因表达的变化及其与损伤时间的... 详细信息

目的：研究表明，细胞因子在各种炎症反应、损伤修复及细胞突变过程中发挥着重要作用，并且有望成为推断损伤时间新的有效指标。实验拟验证皮肤损伤后损伤区组织内不同时间白细胞介素1α和白细胞介素1β基因表达的变化及其与损伤时间的关系。方法：实验于2006-03／2007-12在中国刑警学院法医系实验室完成。①实验材料：清洁级BALB／c纯系雄性小白鼠35只，体质量25～27g。②实验方法：建立动物皮肤损伤模型，在脊柱两侧1．0cm处，左右对称各做一处皮肤缺损损伤，损伤不伤及肌肉，每只鼠做3对损伤。损伤后分别在0，3，6，12h，1，3，6d（0h作为对照）取5只动物麻醉断头处死。③实验评估：免疫组织化学染色后，显微镜下观察不同时间点白细胞的变化，实时定量聚合酶链反应检测白细胞介素1α和白细胞介素1β两种炎症因子的基因表达。结果：纳入BALB／c纯系雄性小白鼠35只，均进入结果分析。①伤后0-5h，皮肤创缘呈弱阳性反应；伤后6-24h，表皮阳性反应减弱，创伤局部以巨噬细胞为主的阳性细胞逐渐增多。伤后1d可见嗜中性白细胞大量浸润及少量单核细胞；伤后2～4d，单核细胞数目逐渐增加，3d达高峰。对照组皮肤表皮、毛囊、皮脂腺和汗腺均呈弱阳性反应。②皮肤损伤后在早期可诱导白细胞介素1α和白细胞介素1β的基因表达，6h达第一次高峰，24h下降，第3天再次出现高峰，第6天下降至正常水平。结论：损伤组织中白细胞介素1α和白细胞介素1β的基因表达随伤后不同时间呈现一定规律性变化，可为法医学案例早期损伤时间的推断提供参考。

关键词：损伤时间细胞因子皮肤损伤基因表达实时定量聚合酶链反应组织构建

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RNA干扰机制及其应用研究进展

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现代生物医学进展 2008年第2期8卷 372-375页

作者：万春鹏周寿然左爱仁江西中医学院基础医学部生物化学教研室南昌330004

2006年诺贝尔生理学或医学奖,授予给了美国科学家Andrew ***和Craig ***以表彰他们发现了RNA干扰(RNA interference RNAi)现象,使人们在基因治疗传染性、恶性肿瘤等危重疾病领域取得了突破性的发展。本文主要综述了RNA干扰系统的组成、... 详细信息

2006年诺贝尔生理学或医学奖,授予给了美国科学家Andrew ***和Craig ***以表彰他们发现了RNA干扰(RNA interference RNAi)现象,使人们在基因治疗传染性、恶性肿瘤等危重疾病领域取得了突破性的发展。本文主要综述了RNA干扰系统的组成、分子机制、作用特点及其在探索基因功能、传染性、恶性肿瘤的基因治疗和药物研发等四个方面的应用。

关键词： RNA干扰 RNA干扰机制 RNA干扰应用

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